抗人肝癌单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗人肝癌标志性抗原的特异性单克隆抗体ＭＦ４Ｃ４。该单克隆抗体具有与肝癌抗原结合的特异性强的特点。本发明专利技术还提供了ＭＦ４Ｃ４免疫球蛋白、及其片段和免疫偶联物以及含有上述免疫球蛋白、片段或免疫偶联物的药物组合物。本发明专利技术还提供了一种检测肝癌的检测试剂盒。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及肿瘤学和医学领域。更具体地，本专利技术涉及抗人肝癌的特异性单克隆抗体及其应用。
技术介绍
原发性肝癌(HCC)是常见的恶性肿瘤之一，死亡率高，严重危害人类的健康和生命。目前，就世界范围而言，其发病率呈上升趋势，作为一种高死亡率的疾病，肝癌的病因、发生、演化、诊断、治疗都越来越引起人们的关注。其中，肝癌的早期诊断对于患者的转归以及预后都具有十分重要的意义。目前，肝癌诊断的标志物首推AFP，用于肝癌的血清学诊断已沿用多年，最近又用于肝癌血液转移的基因诊断。但此方法在特异性和敏感性上仍存在问题。就特异性而言，对于HCC患者，干扰诊断准确性的因素主要是因为部分伴有肝硬化或慢性肝炎的患者血中可检出AFP蛋白以及mRNA。权威统计表明，血清AFP阳性率在急性黄疸性肝炎为19.8％，慢迁肝为19.9％，慢活肝为34.4％，而肝炎后肝硬化可达44.6％，上述非癌肝病的血清AFP浓度多在25-200ng/ml之间。对比肝癌及癌旁肝组织的Northern杂交和免疫组化结果，常发现癌旁肝组织有AFP的弱阳性表达，因此常有血清AFP蛋白的假阳性结果。当这些病人由于某种原因如炎症、坏死导致部分肝细胞脱落入血时，还可造成血液中AFP mRNA的假阳性结果。Matsmnura等的一组研究显示在15％的肝硬化患者和12％慢性肝炎患者中可检出AFP mRNA阳性。另一组实验中，Jiang等则在11例慢性肝炎患者中检出6例AFP mRNA阳性，2例急性肝炎患者中检出1例AFP mRNA阳性。就敏感性而言，大约1/3的HCC患者，其血清AFP阴性(＜20ng/ml)，在分化好(I级)及分化极差(IV级)的HCC内AFP的阳性率也较低，因此对这些肿瘤患者不能有效地检出。这就说明AFP在肝癌诊断中存在相当的漏诊率和误诊率，所以，要提高肝癌的早期诊断率需要有敏感性更高和特异性更强的新的标志物。由于目前尚缺特异性强的检测和/或治疗肝癌的有效方法，因此，本领域迫切需要开发特异性抗人肝癌单克隆抗体，以及检测和治疗肝癌的有效方法。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种特异性抗人肝癌标志性抗原的单克隆抗体。本专利技术的另一目的是提供一种特异性检测人肝癌的试剂盒。本专利技术的另一目的是提供一种特异性治疗人肝癌的治疗剂。在本专利技术的第一方面，提供了一种免疫球蛋白，其特征在于，它特异性地结合于MXR7蛋白。较佳地，所述免疫球蛋白特异性地结合于去除了N端的MXR7蛋白(例如，缺失了N端50-100个氨基酸，较佳地50-80个氨基酸后的MXR7蛋白)更佳地，所述的免疫球蛋白，其特征在于，所述的MXR7蛋白具有SEQ ID NO2所示的氨基酸序列，或是缺失了N端55个氨基酸的MXR7蛋白。在本专利技术的一个实例中，所述的免疫球蛋白是单克隆抗体。在本专利技术的另一实例中，所述的免疫球蛋白由小鼠杂交瘤细胞系MF4C4，CCTCC No.C200111所产生。在本专利技术的第二方面，提供了一种免疫偶联物，该免疫偶联物含有特异性地结合于MXR7蛋白的免疫球蛋白和选自下组的偶联部分药物、毒素、细胞因子、放射性核素、酶。在本专利技术的第三方面，提供了一种产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，它是小鼠杂交瘤细胞系MF4C4，CCTCC No.C200111。在本专利技术的第四方面，提供了一种检测肝癌的试剂盒，它含有上述的免疫球蛋白或免疫偶联物，或其活性片段。在本专利技术的第五方面，提供了一种药物组合物，它含有上述的免疫球蛋白或上述的免疫偶联物，以及药学上可接受的载体。附图说明图1用单克隆抗体MF4C4，通过western印迹法检测人胚肝细胞MXR7蛋白的表达。图2用单克隆抗体MF4C4，通过免疫组化方法检测肝癌组织中MXR7的表达。具体实施例方式本专利技术人经多年研究发现，MXR7基因与肝癌有十分密切的联系，可以作为肝癌特异性敏感标志基因。在此发现基础上，从胎盘cDNA文库分离得到MXR7基因，表达MXR7蛋白，并研制成功一种杂交瘤单克隆抗体，即抗人肝癌单抗MF4C4。此抗体经研究证实稳定性好，和肝癌抗原结合的特异性强。MXR7是1996年Lage等人通过差异杂交方法分离克隆的。同期，本专利技术人在研究肝癌特异性敏感标志基因时，从肝癌cDNA文库分离得到MXR7基因。该基因全长cDNA序列为2263bp，定位于人染色体Xq26，由8个外显子组成，编码由580个氨基酸组成的硫酸类肝素蛋白聚糖，分子量66kDa，通过糖基磷脂酰肌醇(glycosyl-phosphatidylinositol，GPI)锚连接于细胞膜，属于蛋白聚糖家族。MXR7基因在胚胎时大量表达于中胚层组织，合成于胎儿肝脏、肺脏和肾脏，在胎盘组织内低水平表达，其它组织内则不表达，被认为参与发育期形态发生和生长调控，一旦形态发生完成，转录呈负调节，断奶后就不能检测到。研究表明，MXR7与肝癌的发生发展有密切关系，不仅在肝癌的早期有较高的检出率，而且随着肝癌的进展，其检出率也随之增高。本专利技术人检测到76.7％(23/30)肝癌组织内有MXR7表达，其中13.3％(4/30)癌旁组织有MXR7弱阳性表达，而另外7例肝癌组织内MXR7表达阴性的病人，其癌旁组织MXR7也表达阴性。重要的是在血清AFP阳性的病人肝癌中88％表达MXR7 mRNA，而在血清AFP阴性的病人肝癌中仍可发现有73％呈MXR7 mRNA表达阳性。在直径＜3cm肝癌中，MXR7 mRNA阳性表达率为77％，显著高于血清AFP水平升高率43％和肝癌中AFPmRNA表达率41％。MXR7在肝腺瘤、胆管细胞癌、肝转移癌和12种常见实体瘤以及21个非肝癌细胞系中均未检测到MXR7表达，表明MXR7是一个肝癌内特异表达的基因，其特异性明显高于目前仍用于肝癌诊断标志物的AFP，并且比AFP更敏感、检出率更高，尤其在AFP阴性的肝癌患者中有较高的检出率。因此MXR7是一新的肝癌标志物，能与AFP互补协同用于肝癌的早期诊断。另一方面，由于MXR7在肝癌的恶性进展中的表达水平逐渐增高，而可能成为用于判断肝癌的预后或抗肝癌转移和复发的重要的靶基因。MXR7基因是目前在肝癌中发现的与X染色体相关的两个基因之一。肝癌具有十分明显的家族聚集性和遗传易感性，男性发病率约是女性的10倍，流行病学调查已证明母亲患肝癌对子代的遗传影响远大于父亲患肝癌对子代的影响。MXR7基因是否肝癌易感性遗传的主基因尚需研究。MXR7与肝癌的关系十分密切，其作用的分子机理仍不清楚，有待进一步研究。MXR7基因在胎肝高水平表达，成人关闭，肝癌时复苏，与AFP基因表达的时空分布很相似，但MXR7 mRNA表达比AFP更敏感，阳性率更高。该基因以GPI锚连接于细胞表面，是IGF-2的共同受体(co-receptor)。因此与该家族其它成员一样可以脱落入血，在肝癌患者血液中可检测到，以此作为肝癌早期血清学诊断的特异性标志物。在上述研究基础上，本专利技术人利用杂交瘤技术制备了抗人MXR7的单克隆抗体MF4C4。本专利技术的MF4C4单抗或其片段可用于肝癌的放射性定位的诊断成像，还可用于免疫治疗，例如通过直接或间接地将MF4C4单抗或其片段与化学治疗剂、或放疗剂相连从而使其能直接导向肿瘤细胞。本专利技术包括具有MF4C4单抗的相应氨基酸序列的单克隆抗体、具有MF本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫球蛋白，其特征在于，它特异性地结合于ＭＸＲ７蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王红阳，陈正军，吴秀菊，吴孟超，
申请(专利权)人：王红阳，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]