用于选择性癌症治疗的特异性人抗体制造技术

本发明专利技术涉及一种包括Ｆｖ分子，其构建体，两者的片段，或片段的构建体的肽或多肽，它具有增强了的结合特征，以便与其他细胞相比更有利于选择性地和／或特异性地结合靶细胞，其中，所述结合选择性或特异性主要是由第一高变区决定的，并且，其中的Ｆｖ是ｓｃＦｖ或ｄｓＦｖ，并且任选具有一个或多个标记。所述增强了的结合是针对位于该靶上或靶内的基本上暴露的和／或超量表达的结合位点的，该靶包括一种细胞，该细胞相对于对在其上或内部基本上不存在和／或不表达所述结合位点的其他细胞更有利于结合。本发明专利技术还涉及用于从噬菌体展示文库中分离所述肽和多肽的方法，并且涉及编码它们的核酸分子。本发明专利技术提供了包括所述肽或多肽的药物组合物，以及用于诊断和治疗疾病，优选癌症，最优选急性髓细胞白血病的试剂盒。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及借助于噬菌体展示技术进行的组织导向和鉴定领域，并涉及能特异性结合靶细胞的肽和多肽。所述肽和多肽是Fv分子，其构建体，两者的片段或片段的构建体。更具体地讲，所述肽和多肽可以具有抗癌活性，和/或与抗癌剂缔合或偶联，特别是抗与血液相关的癌症。
技术介绍
治疗剂的组织选择性导向是制药工业中正在形成的学科。业已设计出了基于导向的新的癌症治疗方法，以便提高治疗的特异性和效力，同时降低毒性，从而增强总体效果。为了将毒素、放射性核苷酸和化疗偶联物导向肿瘤，业已采用了针对肿瘤相关抗原的小鼠单克隆抗体(MAb′s)。另外，在治疗造血细胞恶性肿瘤时，业已将CD19，CD20，CD22和CD25的分化抗原用作癌特异性靶。然而，深入的研究表明，该方法具有若干局限。一种局限是难于分离具有选择性结合能力的合适的单克隆抗体。第二种局限是作为成功分离抗体的前提，需要高的抗体免疫原性。第三种局限是引起患者对鼠抗体的免疫反应(人抗小鼠抗体-HAMA反应)，这种反应通常会导致较短的血清半衰期，并妨碍反复治疗，因此降低了所述抗体的治疗价值。后一种限制因素引起了在工程生产来源于鼠的嵌合的或人源化的单克隆抗体方面，以及在发现人类抗体方面的兴趣。存在多种干扰单克隆抗体(Mabs)治疗癌症的治疗效力的因素。所述因素包括在肿瘤细胞上抗原表达的特异性，表达的水平，抗原杂合性，以及肿瘤物质的可接近性。与诸如癌的实体瘤相比，白血病和淋巴瘤一般来说对用抗体进行的治疗更敏感。MAbs能迅速结合血流中的白血病细胞和淋巴瘤细胞，并且容易穿透至淋巴组织中的恶性肿瘤细胞，因此使得淋巴瘤成为基于MAb治疗的最佳候选疾病。一种理想系统涉及到鉴定能产生识别恶性肿瘤后代细胞的干细胞细胞表面上的标记的MAb。为了帮助发现/生产Mabs，业已利用噬菌体文库来选择能结合诸如抗体、激素和受体的分离的、预先确定的靶蛋白的随机单链Fvs(scFvs)。另外，一般来说，抗体展示文库的使用，具体来说噬菌体scFv文库的使用，有利于发现具有导向特异性、尚未认知和确定的、细胞表面成分的特殊分子的其他方法。白血病、淋巴瘤和骨髓瘤是起源于骨髓和淋巴组织的癌症，并且涉及细胞的不受控制的生长。急性成淋巴细胞性白血病(″ALL″)是通过特异性临床和免疫学特征定义的异型疾病。与其他形式的ALL类似，大部分B细胞ALL(″B-ALL″)的形成原因尚属未知，尽管在很多场合下，这种疾病是由于单细胞DNA上的获得性遗传改变所导致的，这种改变使它变得异常并且连续扩增。AML是一种杂合型肿瘤，其祖细胞在正常情况下能产生骨髓系的最终分化细胞(红细胞、粒细胞、单核细胞和血小板)。与其他形式的肿瘤类似，AML与获得性遗传改变相关，这种改变会导致表现出一种或多种类型的早期骨髓分化特征的相对未分化的胚细胞取代正常分化的骨髓细胞。AML一般与骨髓相关，并且在较低程度上与次要造血器官相关。AML主要影响成年人，发病高峰在15-40岁之间，不过已知这种病还能影响儿童和老年人。几乎所有AML患者都需要在诊断之后马上治疗，以便获得临床上的症状缓解，其中，没有异常含量的循环的未分化胚细胞的证据。到目前为止，业已开发了能诱导针对肿瘤细胞的细胞溶解活性的多种单克隆抗体。一种针对P185-生长因子受体(HER2)的细胞外结构域的人源化形式的单克隆抗体MuMAb4D5获得了FDA的批准，并且正被用于治疗人类乳腺癌(美国专利5,821,337和5,720,954)。在结合之后，所述抗体能够抑制肿瘤细胞生长，肿瘤细胞的生长是依赖于HER2生长因子受体的。另外，一种能导致包括与淋巴瘤相关的B细胞在内的外周B细胞快速清除的抗CD20的嵌合抗体，最近获得了FDA的批准(美国专利5,843,439)。这种抗体与靶细胞的结合导致了补体依赖型裂解。该产品最近已经获得批准，并且正被用于治疗低级B细胞非何杰金氏淋巴瘤。若干种其他人源化和嵌合抗体正在开发之中或被用于临床实验。另外，将能与在正常骨髓细胞和大多数类型的髓细胞白血病细胞上表达的CD33抗原特异性起反应的人源化Ig偶联在抗癌药物加利车霉素，CMA-676(Sievers等，Blood，90(10 Suppl.1 Part 1)，504A(1997))上。这种偶联物被称为药物Mylotarg，最近已经获得批准(Caron等，Cancer Supplement，73，1049-1056(1994))。由于它的细胞溶解活性，将目前正在临床试验中的其他抗CD33抗体(HuM195)偶联在若干种细胞毒性剂上，包括gelonin毒素(McGraw等，Cancer Immunol.Immunother，39，367-374(1994))和放射性同位素131I(Caron等，Blood 83，1760-1768(1994))，90Y(Jurcic等，Blood，92，(10Suppl.Part 1-2)，613A(1998))和213Bi(Sgouros等，J.Nucl.Med.，38(5Suppl.)，231P(1997))。抗临床前期的白细胞抗原CD-45的嵌合抗体(cHuLym3)被用作骨髓移植的调理剂治疗人类白血病和淋巴瘤(Sun等，Cancer Immunol.Immunother.，48，595-602(2000))。在体外试验中，在ADCC(抗体依赖型细胞介导的细胞毒性)试验中观察到了特异性细胞裂解(Henkart，Immunity，1，343-346(1994)；Squier和Cohen，Current Opin.Immunol.，6，447-452(1994))。尽管以上初步结果看上去很有希望，但是它们存在以下局限性。包括非人序列的最终产品，导致了对非人材料的成问题的免疫反应，如HAMA。这种HAMA反应妨碍了反复治疗，并且导致了该产品具有较短的血清半衰期。另外，上述方法只能分离一种类型的抗体，并且只能分离抗已知的和纯化的抗原的抗体。另外，所述方法不是选择性的，因为所述方法可以分离抗存在于正常细胞和恶性肿瘤细胞上的细胞表面标记的抗体。因此，需要一种克服了上述局限性的方法。另外，所述方法优选能够鉴定癌细胞上的与诸如介导癌细胞转移相关的靶配体或标记。另外，所述方法还能够生产所述靶的抗体。噬菌体展示技术似乎具有这种能力。噬菌体展示技术的应用，使得可以分离包括完整人序列的scFvs。例如，最近业已开发出了来自噬菌体展示技术的基于scFv克隆的抗人TGFb2受体的完整的人抗体。这种scFv在转化成能够竞争结合TGFb2的完整的人IgG4之后(Thompson等，J.Immunol Methods，227，17-29(1999))，具有很强的抗增殖活性。为本领域技术人员所公知的这种技术，在以下文献中有更详细的说明Smith，Science，228，1315(1985)；Scott等，Science，249，386-390(1990)；Cwirla等，PNAS，87，6378-6382(1990)；Devlin等，Science，249，404-406(1990)；Griffiths等，EMBO J.，13(14)，3245-3260(1994)；Bass等，Proteins，8，309-314本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包括Ｆｖ分子、其构建体、两者的片段或片段的构建体的肽或多肽，它具有增强了的结合特征，以便与其他细胞相比，有利于选择性地和／或特异性地结合靶细胞，其中，所述结合选择性或特异性主要是由第一高变区决定的，并且其中的Ｆｖ是ｓｃＦｖ或ｄｓＦｖ，并且任选具有一个或多个标记。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：Y哈盖，J拉扎罗维茨，R盖伊，O利普施茨，E桑顿，A莱瓦农，D普拉克辛，T佩雷茨，
申请(专利权)人：萨文特医药公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]