一种缺血修饰白蛋白测定试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及一种缺血修饰白蛋白测定试剂盒及其使用方法，属于医学检测测定技术领域。本发明专利技术的缺血修饰白蛋白检测试剂盒由试剂1和试剂2组成，试剂1包含缓冲液、硫酸钴；试剂2包含缓冲液、二硫苏糖醇、抗冻剂和还原剂。本发明专利技术通过添加还原剂、抗冻剂等优化反应体系，进一步提高了测定试剂盒的分析灵敏度和稳定性；避免在运输过程中因震荡或挤压造成局部与冰袋直接接触，使试剂盒产生冻结，试剂失活影响测定结果；同时其检测灵敏度高、特异性强、精密度好、成本低，可实现对缺血修饰白蛋白(IMA)的准确检测。

【技术实现步骤摘要】
一种缺血修饰白蛋白测定试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及医学检测测定
，具体涉及一种缺血修饰白蛋白测定试剂盒及其使用方法。
技术介绍
缺血修饰白蛋白(IMA)是人血清白蛋白流经缺血组织时产生的。成熟的白蛋白在肝脏合成，由585个氨基酸残基组成。完整的血清白蛋白含N-天冬氨酸(Asp)-丙氨酸(Ala)-组氨酸(His)-赖氨酸(Lys)的氨基酸序列，该序列是过渡金属元素(如钴、铜、镍)的一个很强的结合位置。在生理情况下，过渡金属紧密结合与该序列以避免或减少白蛋白的损伤。当组织缺血或再灌注时，由于组织局部反应性氧产物增多、酸中毒、细胞膜上各种离子泵破坏等变化，导致白蛋白结构发生改变，与过渡金属钴的结合能力下降。IMA是急性冠脉综合征(ACS)诊断的生物标志。ACS包括不稳定型心绞痛(unstableanginapectoris，UA)、非ST段抬高心肌梗死(Non-STsegmentelevationmyocardialinfarction，NSTEMI)及STEM，具有发病急、变化快、临床表现与危险性不均一等特征，早期诊断困难。IMA会在缺血的时候升高，传统的生物标志物如肌钙蛋白(cTn)、肌红蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)只有在心肌发生坏死时才升高，但这时已给患者带来了不可逆的病理损害。因此，医务工作者迫切需要一种在心肌缺血早期出现而又比较敏感的心肌缺血标志物。缺血修饰白蛋白(IMA)是美国食品药品管理局(FDA)认可的第一个检测心肌缺血的生化标志物，其对ACS患者心肌缺血检出的灵敏度是ECG的2倍、cTn的4倍，利用白蛋白-钴结合法(ACB法)，检测缺血修饰白蛋白的含量，可以作为检测早期心肌缺血的指标，敏感地反应心肌缺血的状况，并对急性冠状动脉综合征的早期诊断、指导治疗等方面有重要的临床意义，为ACS早期诊断的研究开辟了新的道路。目前，临床生化诊断试剂盒的冷链运输需要专门的冷链运输工具，包括冷藏车、冷藏船、冷藏集装箱等。但这些运输工具结构复杂，且成本极高，仅仅适合大批量运输。当遇到单个或小批量多次运输时，这类传统的运输装置成本就更高；在小批量运输过程中普遍采用具有隔热、防水、抗震、抗老化和价格低廉等特点的独立泡沫保温箱，添加若干块在-20℃～-30℃预冷的冰袋，再将缺血修饰白蛋白(IMA)测定试剂盒放入泡沫保温箱内的方式进行贮运，此贮运方式存在以下不足：包装简易，恒温效果差，而且试剂盒的位置放置不合理，运输过程中会因震荡或挤压造成局部与冰袋直接接触，因冰袋在-20℃～-30℃预冷，当冰袋放入泡沫保温箱时，受温度直接传导效应，泡沫保温箱和生化诊断试剂盒瞬时温度会低于0℃，从而极可能导致试剂盒产生冻结，会造成试剂冻融致使试剂中的因子失活从而影响测定结果。因此，急需一种能够解决以上抗冻问题而又不影响试剂性能的缺血修饰白蛋白(IMA)测定试剂盒。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服上述现有技术的不足而提供一种稳定性强、检测灵敏度高的缺血修饰白蛋白检测试剂盒。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下的技术方案：一种缺血修饰白蛋白检测试剂盒包括试剂1和试剂2，其中：pH值为7.0～9.0的缓冲液：10～150mmoL/L；硫酸钴：1～50mmol/L；所述试剂2包括以下成分：pH值为7.0～8.5的缓冲液：90～150mmol/L；二硫苏糖醇：1～30mmol/L；抗冻剂：5～25g/L；还原剂：1～15mmol/L。本试剂盒添加了还原剂抗坏血酸钠，用于促进钴离子与二硫苏糖醇(DTT)结合，从而提高检测的灵敏度。添加抗冻剂赤藓糖醇后，即使IMA测定试剂盒的温度低于0℃，甚至低于-20℃仍可以贮存一周，有效保证了试剂的稳定性。优选的，所述的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，其中，所述试剂1包括以下成分：pH值为7.0～9.0的缓冲液：100mmoL/L；硫酸钴：1mmol/L；所述试剂2包括以下成分：pH值为7.0～8.5的缓冲液：150mmol/L；二硫苏糖醇：2mmol/L；抗冻剂：10g/L；还原剂：10mmol/L。经过工艺配方改进、优化获得该优选方案，其检测灵敏度高、特异性强、精密度好。优选的，所述的缓冲液为甘氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液或3-三羟甲基-2-羟基丙磺酸缓冲液。优选的，所述试剂2中的抗冻剂为赤藓糖醇。优选的，所述的防腐剂为叠氮化钠、庆大霉素、硫柳汞、Proclin300、异噻唑啉酮中的至少一种。优选的，所述的缓冲液为甘氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、3-三羟甲基-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种。优选的，所述试剂2中的抗冻剂为赤藓糖醇。优选的，所述试剂2中的还原剂为硫代硫酸钠、抗坏血酸钠、谷胱甘肽中的至少一种。优选的，所述试剂1和试剂2均还包含1～15g/L的稳定剂和0.05～1g/L的防腐剂。防腐剂和稳定剂的添加保证了试剂盒的稳定性。优选的，所述试剂1和试剂2均还包含10g/L的稳定剂和0.5g/L的防腐剂。优选的，所述稳定剂为曲拉通X-100、乙二胺四乙酸二钠、海藻酸钠、甘油、吐温-20中的至少一种。优选的，所述防腐剂为叠氮化钠、庆大霉素、硫柳汞、Proclin300、异噻唑啉酮中的至少一种。上述缺血白蛋白测定试剂盒的制备方法为：试剂1和试剂2的配置方法均为按照配方比例，将试剂中所述的各组分加入蒸馏水搅拌混匀即可。上述缺血白蛋白测定试剂盒的使用方法为：(1)向血清样品中加入试剂1，混匀，孵育3～5min，在510nm波长下检测吸光度，读取吸光度值A1；(2)向步骤(1)的溶液中继续加入试剂2，混匀，孵育3～5min，在510nm波长下检测吸光度，读取吸光度值A2；(3)通过血清标准别数据计算IMA含量。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术在现有的白蛋白-钴结合法的基础上，通过特定的制备方法以及添加还原剂、抗冻剂等优化反应体系，进一步提高了测定试剂盒的分析灵敏度及稳定性，即使缺血白蛋白(IMA)测定试剂盒在温度低于0℃，甚至低于-20℃的条件下，可以贮存一周，也能有效保证其试剂的稳定性，同时其检测灵敏度高、特异性强、精密度好、成本较低，可以实现对IMA的准确检测。(2)本专利技术的试剂盒可在具备有400～800m波长的全自动生化分析仪上检测缺血修饰白蛋白的含量，直接上机使用，快速精准，自动化程度高，从而大大提高工作效率。而且所述检测样本量少，能满足少量样本和急诊样本测定的要求。具体实施方式为了更好地说明本专利技术的目的，技术方案和优点，下面个将结合具体实施例对本专利技术做进一步的说明。实施例1：一种缺血修饰白蛋白检测试剂盒由试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种缺血修饰白蛋白测定试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2，其中，所述试剂1包括以下成分：/npH值为7.0～9.0的缓冲液：10～150mmoL/L；/n硫酸钴：1～50mmol/L；/n所述试剂2包括以下成分：/npH值为7.0～8.5的缓冲液：90～150mmol/L；/n二硫苏糖醇：1～30mmol/L；/n抗冻剂：5～25g/L；/n还原剂：1～10mmol/L。/n

【技术特征摘要】
1.一种缺血修饰白蛋白测定试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2，其中，所述试剂1包括以下成分：
pH值为7.0～9.0的缓冲液：10～150mmoL/L；
硫酸钴：1～50mmol/L；
所述试剂2包括以下成分：
pH值为7.0～8.5的缓冲液：90～150mmol/L；
二硫苏糖醇：1～30mmol/L；
抗冻剂：5～25g/L；
还原剂：1～10mmol/L。


2.根据权利要求1所述的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2，其中，所述试剂1包括以下成分：
pH值为7.0～9.0的缓冲液：100mmoL/L；
硫酸钴：1mmol/L；
所述试剂2包括以下成分：
pH值为7.0～8.5的缓冲液：150mmol/L；
二硫苏糖醇：2mmol/L；
抗冻剂：10g/L；
还原剂：15mmol/L。


3.根据权利要求1或2所述的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为甘氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液或3-三羟甲基-2-羟基丙磺酸缓冲液。


4.根据权利要求1或2所述的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂2中的抗冻剂为赤藓糖醇。


5.根据权利要求1或2所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘光华，杨玉军，
申请(专利权)人：广州市伊川生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44