一种涎液化糖链抗原测定试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及体外诊断试剂技术领域，尤其涉及一种涎液化糖链抗原测定试剂盒及其检测方法。本发明专利技术的涎液化糖链抗原检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2；试剂R1包括：稳定剂5～50g/L、防腐剂0.05～2g/L，并利用缓冲液调节pH为2～9；试剂R2包括：表面活性剂5～30g/L、稳定剂5～30g/L、抗人涎液化糖链抗原抗体乳胶颗粒结合物0.1～2g/L、防腐剂0.05～2g/L，并利用缓冲液调节pH为2～9。本发明专利技术试剂盒灵敏度高，最低检测能够达到50.0U/mL，且线性范围广，可达50～10000U/mL，可实现对涎液化糖链抗原的准确检测。测。

【技术实现步骤摘要】
一种涎液化糖链抗原测定试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术涉及体外诊断试剂
，尤其涉及一种涎液化糖链抗原测定试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]涎液化糖链抗原(Krebs Von Den Lungen-6，KL-6)是一种跨膜高分子量黏蛋白，含有分子量约为200KD的唾液酸化糖链，该糖链主要是由20个氨基酸残基组成的串联重复序列，具有被特异性抗体识别的空间结构表位。KL-6在肺支气管上皮的膜表面二硫键处形成肺支气管上皮被覆液，主要表达于Ⅱ型肺泡细胞和支气管上皮细胞的细胞质和胞膜。有研究指出，KL-6不仅是构成肺组织间质的蛋白质，还可作为肺组织高度特异性的标志。
[0003]间质性肺炎(IP)是以肺间质为主要病变部位的疾病。正常肺泡壁出现炎症或损伤后，肺间质逐渐变厚、变硬，随着病情恶化肺部会出现纤维化，从而引起肺部通气功能障碍，导致供氧不足，表现出呼吸困难等症状。间质性肺炎已知的病因包括自身免疫疾病引起、长期吸入粉尘颗粒物、以及使用药物(抗癌药、免疫抑制剂等)。患者表现为活动后气嘴、日常干咳，药物副作用加重等症状。
[0004]KL-6可以对肺间质状态进行检测，帮助选择治疗药物，也可用于判断停药时间。当发生间质性肺炎等情况时，肺泡上皮细胞受到损伤后会向血液中释放KL-6，使血液中KL-6蛋白的浓度升高。活动期的间质性肺炎患者血液中存在高浓度的KL-6，有效的治疗可以降低测定值。
[0005]近年来，随着医学各种检查技术的不断发展，尤其是肺部影像学如高分辨CT在临床中的广泛应用，提高了间质性肺炎患者早期诊断准确率，但间质性肺炎治疗并未取得实质性进展，部分患者的预后差，死亡率高。早期诊断和治疗可改善患者预后，故目前除临床已用于间质性肺炎诊断的肺CT、肺功能、血气分析、支气管镜及肺活检等手段外，与间质性肺炎疾病发展及转归有关的血清学检测亦成为研究热点，目前，有许多研究者认为KL-6在间质性肺炎的早期诊断及病变程度、发生、进展、药物疗效及预后评价均有重要价值。
[0006]目前现有技术中，涎液化糖链抗原的检测方法有酶联免疫吸附测定(ELISA)、化学发光免疫分析法(CLIA)和免疫浊度法(INA、ITA)。在酶联免疫吸附测定中，其检测灵敏度高，但操作过程略显复杂、测定时间较长、影响因素多，且此法主要应用于科学研究，不能用于临床诊断；在化学发光免疫分析法测定中，其自动化操作速度快、准确度高，但是成本高、设备昂贵、稳定性较差，无法普及中基层医院及医疗机构；免疫浊度法又可分为散射比浊(INA)和透射比浊(ITA)，这类方法的优点是快速简便，精密度高、易于自动化，适于大批量标本的同时检测，也可进行少量样本和急诊样本的测定，具有很强的适用性。散射比浊(INA)法由于其光波接收方式的特点，通常测试结果的灵敏度与测速要优于透射比浊，但需要专门仪器的散射比浊仪或特种蛋白仪，与专用配套试剂，测定成本较高，不易于在基层医院中推广使用。透射比浊(ITA)法，操作简便适用性强，普通自动生化分析仪和分光光度计均可使用，更易于被常规分析所采用，几乎所有的各实验室、基层医院均能开展，不足的是
灵敏度和精密度均不够理想。
[0007]因此，亟待在现有的涎液化糖链抗原胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒的制备基础上进行改良，提高涎液化糖链抗原检测试剂盒的灵敏度、精密度、适用性是目前的市场需求。

技术实现思路

[0008]因此，针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种涎液化糖链抗原测定试剂盒及其检测方法，可以实现对涎液化糖链抗原的准确检测。
[0009]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：提供一种涎液化糖链抗原检测试剂盒，所述检测试剂盒包括试剂R1、试剂R2；
[0010]所述试剂R1包括：稳定剂5～50g/L、防腐剂0.05～2g/L，并利用缓冲液调节pH为2～9；
[0011]所述试剂R2包括：表面活性剂5～30g/L、稳定剂5～30g/L、抗人涎液化糖链抗原抗体乳胶颗粒结合物0.1～2g/L、防腐剂0.05～2g/L，并利用缓冲液调节pH为2～9。
[0012]本专利技术的涎液化糖链抗原测定试剂盒，通过放大抗体抗原反应以及添加稳定剂、表面活性剂等优化反应体系，增加了免疫复合物的直径，提高了检测敏感性和测定试剂的分析灵敏度及精密度，可实现对涎液化糖链抗原的准确检测，同时适用于多种全自动生化分析仪，适于大批量标本的同时检测，也可进行少量样本和急诊样本的测定，具有广泛的通用性，且未提高试剂研发成本，更易适应现代化临床检验医学的发展。
[0013]本专利技术涎液化糖链抗原(KL-6)测定试剂盒，基于胶乳增强免疫比浊法(PETIA)，其原理是采用化学偶联法将特异性抗体结合于一定粒径的胶乳颗粒表面，当交联有抗体的微球与抗原结合后，短时间内迅速聚集在一起，从而改变反应液的吸光度。根据吸光度增加量，即可在特定波长处测定免疫复合物浊度，定量检测血清中的涎液化糖链抗原含量。
[0014]作为本专利技术所述的检测试剂盒的优选实施方式，所述缓冲液为甘氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、Good's缓冲液中的任意一种。
[0015]作为本专利技术所述的检测试剂盒的优选实施方式，所述稳定剂为蔗糖、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、甘油、明胶、小牛血清白蛋白、酪蛋白中的任意一种或多种。更优选的，所述稳定剂为小牛血清白蛋白(BSA)，浓度为10g/L。
[0016]适量的稳定剂可以提供良好稳定的反应环境，使抗原抗体保持天然构象。
[0017]作为本专利技术所述的检测试剂盒的优选实施方式，所述表面活性剂为吐温80、PEG6000、PEG 12000、十二烷基硫酸钠、曲拉通X-100中的任意一种或多种。更优选的，所述表面活性剂为PEG 6000，浓度为10g/L。
[0018]表面活性剂能够在试剂加入到反应体系时，降低表面张力，提高分散性和稳定性。本专利技术试剂盒特地添加了PGE 6000作为表面活性剂，并调整其用量为10g/L。
[0019]作为本专利技术所述的检测试剂盒的优选实施方式，所述涎液化糖链抗原抗体为单克隆抗体。
[0020]单克隆抗体特异性强、灵敏度高，同时可大量制备。
[0021]作为本专利技术所述的检测试剂盒的优选实施方式，所述涎液化糖链抗原抗体为羊抗人涎液化糖链抗原抗体、兔抗人涎液化糖链抗原抗体、鼠抗人涎液化糖链抗原抗体中的任
意一种。
[0022]作为本专利技术所述的检测试剂盒的优选实施方式，所述抗人涎液化糖链抗原抗体乳胶颗粒结合物是由涎液化糖链抗原抗体和胶乳微球采用化学偶联法得到。
[0023]作为本专利技术所述的检测试剂盒的优选实施方式，所述抗人涎液化糖链抗原抗体乳胶颗粒结合物的胶乳微球粒径为80～150nm，优选为120nm。
[0024]作为本专利技术所述的检测试剂盒的优选实施方式，所述防腐剂为叠氮化钠、庆大霉素、硫柳汞、Proclin 300、异噻唑啉酮中的任意一种或多种。
[0025]作为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种涎液化糖链抗原检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括试剂R1、试剂R2；所述试剂R1包括：稳定剂5～50g/L、防腐剂0.05～2g/L，并利用缓冲液调节pH为2～9；所述试剂R2包括：表面活性剂5～30g/L、稳定剂5～30g/L、抗人涎液化糖链抗原抗体乳胶颗粒结合物0.1～2g/L、防腐剂0.05～2g/L，并利用缓冲液调节pH为2～9。2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为甘氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、Good's缓冲液中的任意一种。3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为蔗糖、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、甘油、明胶、小牛血清白蛋白、酪蛋白中的任意一种或多种。4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为吐温80、PEG6000、PEG12000、十二烷基硫酸钠、曲拉通X-100中的任意一种或多种。5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述涎液化糖链抗原抗体为单克隆抗体。6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘光华，杨玉军，
申请(专利权)人：广州市伊川生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：