一种脂蛋白（a）测定试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术一种脂蛋白(a)测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，所述试剂1由以下质量浓度的组分组成：缓冲液、无机盐、表面活性剂、稳定剂、防腐剂、抗干扰剂、所述试剂2由以下质量浓度的组分组成：缓冲液、表面活性剂、稳定剂、封闭剂、脂蛋白(a)单抗乳胶颗粒、防腐剂。本发明专利技术试剂盒通过在试剂1中添加抗干扰剂，提高了脂蛋白(a)胶乳免疫比浊法试剂的抗干扰能力、分析灵敏度及精密度，且未提高试剂研发成本，更易适应现代化临床检验医学的发展。

【技术实现步骤摘要】
一种脂蛋白(a)测定试剂盒及其检测方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种脂蛋白(a)测定试剂盒及其检测方法。
技术介绍
脂蛋白(a)【Lipoprotein(a)，简称Lp(a)】，是一种富含胆固醇的特殊血浆脂蛋白，是1963年由挪威遗传学家Berg在制备低密度脂蛋白(LDL)抗体的过程中首先发现的特殊大分子脂蛋白，随后并将其命名为脂蛋白(a)。20世纪80年代末，人们发现脂蛋白(a)与动脉粥样硬化有关，与此同时，Mclean发现脂蛋白(a)与纤溶酶原(Plasminogen，PLG)的结构具有高度同源性。肝脏是脂蛋白(a)合成的主要场所，其主要的生理功能是阻止血管内血块溶解，病理上可促进动脉粥样硬化心脑血管病、急性心肌梗死、家族性高胆固醇血症、糖尿病、大动脉瘤及某些癌症等形成。脂蛋白水平持续升高与心绞痛、心肌梗死、脑溢血有密切关系，是脑卒中和冠心病的独立危险因子，其减低通常见于肝脏疾病、酗酒、摄入新霉素等药物后。脂蛋白(a)的核心部分由甘油三酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯等脂质和载脂蛋白B100组成，结构类似低密度脂蛋白(LDL)，但其含有一个独特的Apo(a)，后者在其它任何脂蛋白中都不存在。脂蛋白(a)的浓度主要取决于其合成速率，而与分解速率基本无关。据有关资料显示，脂蛋白(a)浓度的个体差异大，在人群中呈偏态分布，低者为不能检测(定性为阴性，定量测定为零)，高者为显著高值(可达1000mg/L以上)，这种差异最主要由Apo(a)基因位点决定。但在同一个体内，水平保持相对稳定。各种方法测脂蛋白(a)所得参考范围大致相近，目前国内外所采用的判断标准基本相同：一般认为300mg/L为临界水平，大于300mg/L以上作为病理性增高。早期检测脂蛋白(a)多用电泳法，观察β和前β脂蛋白之间是否出现额外的脂蛋白(a)区带，但此法灵敏度低，多用于定性检测。随后相继研制开发出一些直接测定脂蛋白(a)的免疫化学检测法，如辐射状免疫扩散法(RID)、电免疫扩散法(EID)、放射免疫测定法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫浊度法【包括免疫散射比浊法(INA)和免疫透射比浊法(ITA)】、解离增强配体荧光免疫测定法(DELFIA)等。辐射状免疫扩散法与电免疫扩散法因操作简便，不需特殊仪器，仍有一些基层单位实验室采用，但缺点是灵敏度低。放射免疫测定法，由于试剂保存时间短、自动化程度低，同时会造成放射性物质环境污染，基本已被淘汰。解离增强配体荧光免疫测定法因需特殊仪器，国内也较少应用。目前国内临床实验室最常用的方法为酶联免疫吸附试验(ELASA)法与免疫浊度法(INA、ITA)。酶联免疫吸附试验法虽然在临床上使用了近二十年，但是其精密度相对较低、操作复杂且耗时长，自动化程度低；免疫浊度法，又可分为散射比浊(INA)和透射比浊(ITA)，这类方法的优点是快速简便，精密度高、易于自动化、适于大批量标本的同时检测，缺点是抗体用量大(为ELISA)的数倍，对抗体要求高(应具有高特异性、高滴度和高亲和力)。免疫浊度法可分为散射比浊(INA)与透射比浊(ITA)。散射比浊(INA)法由于其光波接收方式的特点，通常测试结果的灵敏度与测速要优于透射比浊，但需要专门仪器的散射比浊仪或特种蛋白仪，与专用配套试剂，测定成本较高，不易于在基层医院中推广使用。透射比浊(ITA)法，操作简便适用性强，普通自动生化分析仪和分光光度计均可使用，更易于被常规分析所采用，几乎所有的各实验室、基层医院均能开展，不足的是灵敏度和精密度、抗干扰力均不够理想。因此，需要在现有的脂蛋白(a)胶乳免疫比浊法检测试剂盒的制备基础上进行改良，以提高脂蛋白(a)胶乳免疫比浊法试剂的抗干扰能力、分析灵敏度及精密度，以适应现代化临床检验医学的发展。
技术实现思路
因此，针对现有技术的不足，本专利技术提供一种脂蛋白(a)测定试剂盒，在现有的胶乳免疫比浊法的基础上，通过放大抗体抗原反应以及添加抗干扰剂，增加了免疫复合物的直径，提高了检测敏感性和测定试剂的分析灵敏度及精密度，同时试剂的稳定性、抗干扰能力强，可实现对脂蛋白(a)的准确检测，且未提高试剂研发成本，更易适应现代化临床检验医学的发展。本专利技术通过以下技术方案实现：一种脂蛋白(a)测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，所述试剂1由以下质量浓度的组分组成：所述试剂2由以下质量浓度的组分组成：其中所述试剂1与试剂2的体积比为4：1。优选地，所述缓冲液选自甘氨酸缓冲液、PBS缓冲液、Hepes缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris-Hcl缓冲液、DIPSO缓冲液中的一种。所述试表面活性剂均为是吐温80、PEG6000、PEG12000、Brij35中的任意一种或多种。所述试剂中的稳定剂选自蔗糖、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、甘油、明胶中的任意一种或多种。所述试剂盒中的防腐剂均为叠氮化钠、庆大霉素、硫柳汞、Proclin300、异噻唑啉酮中的任意一种或多种。所述试剂R1中的无机盐选自KCL、CaCl2、NaCl、BaCl2、MgCl2、AlCl3中的任意一种或多种。所述试剂R1中的抗干扰剂选抗坏血酸、十二烷基二甲基甜菜碱、月桂酰胺丙基甜菜碱、曲拉通X-100中的任意一种或两种的混合物。优选地，所述试剂中的抗干扰剂由十二烷基二甲基甜菜碱与曲拉通X-100按质量比为3：1复配得到。优选地，试剂R2中的封闭剂选自为小牛血清白蛋白(BSA)、明胶、酪蛋白、吐温-20中的一种或两种以上的混合物。优选地，试剂R2中的脂蛋白(a)单抗乳胶颗粒上的所述抗体选自为羊抗人脂蛋白(a)抗体、兔抗人脂蛋白(a)抗体、鼠抗人脂蛋白(a)抗体中的一种。优选地，所述R2试剂中的脂蛋白(a)单抗乳胶颗粒的粒径为150nm。本专利技术还提供一种使用本专利技术脂蛋白(a)检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：在血清样品中加入如权利要求1所述的试剂1，混匀，孵育3～5min后，加入如权利要求1所述的试剂2，混匀孵育20s后，于600nm波长下检测样品吸光度值A1，5min后，于600nm波长下检测样品吸光度值A2，通过比对脂蛋白(a)标准曲线相对应的浓度，即可获得样品中脂蛋白(a)的含量。优选地，所述加入试剂1与试剂2的体积比为：4:1。优选地，所述脂蛋白(a)的含量计算方法为：分别计算校准品的吸光度变化值△A，并绘制校准曲线，校准曲线使用多点非线性拟合；将样本测定的吸光度变化值△A按拟合的公式进行计算，其中△A＝A2-A1，即可得出样本中脂蛋白(a)的浓度。本专利技术的有益效果为：本专利技术试剂盒基于胶乳免疫透射比浊法(PETIA)，其原理是采用化学偶联法将特异性抗体结合于一定粒径的胶乳颗粒表面，当交联有抗体的微球与抗原结合后，短时间内迅速聚集在一起，从而改变反应液的吸光度。根据吸光度增加量，即可在波长600nm处测定免疫复合物浊度，定量检测血清中的脂蛋白(a)含量。PETIA检测方法是在均相反本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脂蛋白(a)测定试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2，所述试剂1由以下质量浓度的组分组成：/n

【技术特征摘要】
1.一种脂蛋白(a)测定试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2，所述试剂1由以下质量浓度的组分组成：



所述试剂2由以下质量浓度的组分组成：



其中所述试剂1与试剂2的体积比为4：1。


2.如权利要求1所述的测定试剂盒，其特征在于，所述缓冲液选自甘氨酸缓冲液、PBS缓冲液、Hepes缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris-Hcl缓冲液、DIPSO缓冲液中的任意一种。


3.如权利要求1所述的测定试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂均为是吐温80、PEG6000、PEG12000、Brij35中的至少一种。


4.如权利要求1所述的测定试剂盒，其特征在于，所述试剂中的稳定剂选自蔗糖、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、甘油、明胶中的至少一种。


5.如权利要求1所述的测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的防腐剂均为叠氮化钠、庆大霉素、硫柳汞、Proclin300、异噻唑啉酮中的至少一种。


6.如权利要求1所述的测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的抗干扰剂选自抗坏血酸、十二烷基二甲基甜菜碱、月桂酰胺丙基甜菜碱...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘光华，杨玉军，
申请(专利权)人：广州市伊川生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44