脂蛋白胆甾醇的定量方法、定量试剂和定量试剂盒技术

提供能够更准确地定量待测试样中的脂蛋白胆甾醇的方法、该方法所使用的定量试剂和定量试剂盒。本发明专利技术是脂蛋白胆甾醇的定量方法，其根据期望使用定量试剂对含有脂蛋白的待测试样中的脂蛋白胆甾醇进行定量，该定量方法包括向前述待测试样中或前述定量试剂中添加磷脂。此外，本发明专利技术是定量试剂，其是在前述本发明专利技术的方法中使用的脂蛋白中的胆甾醇的定量试剂，且其含有磷脂。进而，本发明专利技术是定量试剂盒，其是在前述本发明专利技术的方法中使用的脂蛋白胆甾醇的定量试剂盒，且其含有磷脂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】脂蛋白胆甾醇的定量方法、定量试剂和定量试剂盒
本专利技术涉及脂蛋白中的胆甾醇的定量方法、定量试剂和定量试剂盒。
技术介绍
血液中包含的脂蛋白因基于超离心分离的密度差异而分为乳糜微粒、超低密度脂蛋白（以下有时称为VLDL）、中密度脂蛋白（以下有时称为IDL）、低密度脂蛋白（以下有时称为LDL）、高密度脂蛋白（以下有时称为HDL）。近年来，这些脂蛋白根据比重、大小而进一步细细分化，例如，在LDL之中作为体积小且密度高的脂蛋白，有小粒子低密度脂蛋白（以下有时称为小而密LDL或sdLDL）等。已知这些脂蛋白中的甘油三酯、胆甾醇等脂质、蛋白等的含量不同，分别在生物体内显示出不同的作用。作为至今为止已知的脂蛋白中的胆甾醇的测定法，存在超离心法、NMR法等。超离心是通过离心并利用脂蛋白的密度差来分级的方法，存在需要熟练操作、耗时多天且费用高昂的缺点。NMR法是通过磁共振来计测脂蛋白的粒子数的方法，但需要特殊设备，并不普遍。近年来，无需这些复杂操作且能够在自动分析装置中使用的直接法正在快速普及。作为测定HDL的方法，例如专利文献1公开了下述方法：作为聚集剂而使用硫酸化环糊精，使其与除HDL之外的脂蛋白充分反应后，使被聚乙二醇修饰的酶发挥作用，从而特异性地测定HDL中的胆甾醇。专利文献2公开了下述方法：对于除HDL之外的脂蛋白，使用反应阻碍性的表面活性剂和特异性溶解HDL的表面活性剂。专利文献3公开了下述方法：在第一工序中利用过氧化氢酶去除除HDL之外的脂蛋白，并在第二工序中使用特异性地作用于HDL的表面活性剂来测定HDL。进而，专利文献4公开了下述方法：首先使对于除HDL之外的脂蛋白的抗体发挥作用，接着进行HDL的溶解，并检测胆甾醇。作为测定小而密LDL的方法，例如专利文献5公开了下述方法：在第一工序中，使用作用于除小而密LDL之外的表面活性剂来去除除小而密LDL之外的脂蛋白的胆甾醇，接着，对残留的小而密LDL中的胆甾醇进行定量。专利文献6公开了下述方法：在第一工序中使用鞘磷脂酶去除除小而密LDL之外的LDL的脂蛋白的胆甾醇，接着，对残留的小而密LDL中的胆甾醇进行定量。此外，作为乳糜微粒（含有乳糜微粒残粒）、VLDL（含有VLDL残粒）和IDL的总密度小于1.019g/cm3的富含甘油三酯的脂蛋白（TRL）的测定方法，专利文献7公开了下述方法：使用作用于除TRL之外的表面活性剂去除除TRL之外的脂蛋白的胆甾醇，接着，对残留的TRL中的胆甾醇进行定量。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开平8-131197号公报专利文献2：日本特开平11-56395号公报专利文献3：WO98/26090号公报专利文献4：日本特开平9-96637号公报专利文献5：日本特开2013-148589号公报专利文献6：WO09/048143号公报专利文献7：日本特开2017-209035号公报。
技术实现思路
专利技术要解决的技术问题本专利技术的目的是提供能够更准确地定量待测试样中的脂蛋白胆甾醇的方法、该方法所使用的定量试剂和定量试剂盒。用于解决技术问题的手段本专利技术人等经深入研究的结果发现：通过向待测试样中或定量试剂中添加磷脂，测定值的线性（待测试样的稀释水平与胆甾醇的反应吸光度的相关线性）提高。并想到：通过利用该见解，能够更准确地测定脂蛋白中的胆甾醇，由此完成了本专利技术。即，本专利技术如下所示。[1]定量方法，其是根据期望使用定量试剂对含有脂蛋白的待测试样中的脂蛋白胆甾醇进行定量的脂蛋白胆甾醇的定量方法，其包括：向前述待测试样中或前述定量试剂中添加磷脂。[2]根据[1]所述的方法，其中，前述磷脂为磷脂酰胆碱（PC）或溶血磷脂酰胆碱（LPC）。[3]根据[1]所述的方法，其中，前述磷脂为磷脂样表面活性剂。[4]根据[1]所述的方法，其中，前述磷脂是与含有要定量的胆甾醇的脂蛋白不同的脂蛋白。[5]根据[4]所述的方法，其中，前述磷脂为高密度脂蛋白（HDL）。[6]根据[1]~[5]中任一项所述的方法，其中，前述脂蛋白为富含甘油三酯的脂蛋白（TRL）。[7]根据[1]~[5]中任一项所述的方法，其中，前述脂蛋白为小而密LDL。[8]根据[1]~[7]中任一项所述的方法，其中，使用定量试剂对前述脂蛋白胆甾醇进行定量。[9]定量试剂，其是在[1]~[8]中任一项所述的方法中使用的脂蛋白中的胆甾醇的定量试剂，且其含有磷脂。[10][9]所述的试剂的作为用于对含有脂蛋白的待测试样中的脂蛋白胆甾醇进行定量的试剂的用途。[11]定量试剂盒，其是在[1]~[8]中任一项所述的方法中使用的脂蛋白胆甾醇的定量试剂盒，且其含有磷脂。[12][11]所述的试剂盒的作为用于对含有脂蛋白的待测试样中的脂蛋白胆甾醇进行定量的试剂盒的用途。专利技术效果通过本专利技术，可提供能够更准确地定量待测试样中的脂蛋白胆甾醇的新型方法、该方法中使用的定量试剂和定量试剂盒。附图说明图1-1是在实施例1中对于稀释系列1（将人血清用生理盐水进行稀释）的稀释水平，标绘TRL-C的反应吸光度而得的图。图1-2是在实施例1中对于稀释系列2（将人血清用含有HDL的稀释液A进行稀释）的稀释水平，标绘TRL-C的反应吸光度而得的图。图1-3是在实施例1中对于稀释系列3（将人血清用含有HDL的稀释液B进行稀释）的稀释水平，标绘TRL-C的反应吸光度而得的图。图2-1是在实施例2中对于稀释系列4（将人血清用生理盐水进行稀释）的稀释水平，标绘sdLDL-C的反应吸光度而得的图。图2-2是在实施例2中对于稀释系列5（将人血清用含有HDL的稀释液B进行稀释）的稀释水平，标绘sdLDL-C的反应吸光度而得的图。图3-1是在使用实施例1的TRL-C试剂1-1（HDL-C：0mg/dL）的情况下，对于稀释系列1（将人血清用生理盐水进行稀释）的稀释水平，标绘TRL-C的反应吸光度而得的图。图3-2是在使用实施例3的TRL-C试剂1-2（HDL-C：2mg/dL）的情况下，对于稀释系列1的稀释水平，标绘TRL-C的反应吸光度而得的图。图3-3是在使用实施例4的TRL-C试剂1-3（HDL-C：3mg/dL）的情况下，对于稀释系列1的稀释水平，标绘TRL-C的反应吸光度而得的图。图4-1是在使用实施例1的TRL-C试剂1-1（磷脂：0mg/dL）的情况下，对于稀释系列1（将人血清用生理盐水进行稀释）的稀释水平，标绘TRL-C的反应吸光度而得的图。图4-2是在使用实施例5的TRL-C试剂1-4（磷脂PC：400mg/dL）的情况下，对于稀释系列1的稀释水平，标绘TRL-C的反应吸光度而得的图。图4-3是在使用实施例6的TRL-C试剂1-5（磷脂PC：800mg/dL）的情况下，对于稀释系列1的稀释水平，标绘TRL-C的反应吸光度而得的图。...

【技术保护点】
1.定量方法，其是根据期望使用定量试剂对含有脂蛋白的待测试样中的脂蛋白胆甾醇进行定量的脂蛋白胆甾醇的定量方法，其包括：向所述待测试样中或所述定量试剂中添加磷脂。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180328 JP 2018-0621431.定量方法，其是根据期望使用定量试剂对含有脂蛋白的待测试样中的脂蛋白胆甾醇进行定量的脂蛋白胆甾醇的定量方法，其包括：向所述待测试样中或所述定量试剂中添加磷脂。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述磷脂为磷脂酰胆碱（PC）或溶血磷脂酰胆碱（LPC）。


3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述磷脂为磷脂样表面活性剂。


4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述磷脂是与含有要定量的胆甾醇的脂蛋白不同的脂蛋白。


5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述磷脂为高密度脂蛋白（HDL）。


6.根据权利要求1~5中任一项所述的方法，其中，所述脂蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐藤谦亨，伊海田诚，平尾裕子，
申请(专利权)人：电化株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP