对脂蛋白质的吸收能力进行测定的方法及试剂技术

本发明专利技术旨在提供用于以更高的精度测定脂蛋白质的吸收能力的方法及试剂。通过将试样中的脂蛋白质和标记甾醇在不具有环状结构的表面活性剂的存在下混合，通过调制吸收该标记甾醇的脂蛋白质而测定脂蛋白质的标记甾醇的吸收能力，由此解决所述的课题。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对脂蛋白质的吸收能力进行测定的方法及试剂
本专利技术涉及对脂蛋白质的吸收能力进行测定的方法。另外，本专利技术涉及脂蛋白质的吸收能力测定用试剂。再者，本专利技术涉及在脂蛋白质的吸收能力的测定中使用的试样稀释用试剂及清洗用试剂。
技术介绍
已知脂质的代谢异常与各种疾病相关，血中的脂质浓度成为疾病的指标。但是，在有脂质浓度不反映疾病的存在或疾病风险等的情况中。从而，不仅是脂质浓度等的量的指标，关注关注于脂蛋白质的功能的质的指标。例如，有即使血中的高密度脂蛋白质胆甾醇(HDL-C)浓度高，心血管疾病(CVD)风险也不降低的情况，指出HDL-C浓度不完全地反映CVD风险的可能性。关注高密度脂蛋白质(HDL)的功能，报告了从由HDL的末梢组织的胆甾醇的排出功能是对于CVD风险的负的预后因子。作为研究HDL的功能的方法，例如，在专利文献1中记载了对脂蛋白质的胆甾醇吸收能力进行测定的方法，其包括：通过将试样中的脂蛋白质、附加有标签的胆甾醇和与脂蛋白质特异性地结合的抗体混合，形成含吸收附加有标签的胆甾醇的脂蛋白质和上述的抗体的复合体的工序，通过将此复合体、与上述的标签特异性地结合的捕获体和标记物质结合，对复合体进行标记的工序，和检测从与复合体结合的标记物质发生的信号的工序。【现有技术文献】【专利文献】专利文献1：美国专利申请公开第2017/0315112号说明书【专利技术的概要】【专利技术要解决的课题】在检测目标物质的测定系中，可发生各种非特异性的反应或粒子的凝集。本专利技术旨在抑制测定系中的非特异反应或粒子凝集。【用于解决课题的手段】本专利技术提供对脂蛋白质的吸收能力进行测定的方法，其包括：通过将试样中的脂蛋白质和标记甾醇在不具有环状结构的表面活性剂的存在下混合，调制吸收该标记甾醇的脂蛋白质的工序，和基于被该脂蛋白质吸收的标记甾醇的标记而测定对标记甾醇的吸收能力的工序。本专利技术提供对脂蛋白质的吸收能力进行测定的方法，其包括：通过将试样中的脂蛋白质、标记甾醇和不具有环状结构的表面活性剂混合，调制吸收该标记甾醇的脂蛋白质的工序，和基于被脂蛋白质吸收的标记甾醇的标记而测定对标记甾醇的吸收能力的工序。本专利技术提供标记甾醇和含不具有环状结构的表面活性剂的脂蛋白质的吸收能力测定用试剂。本专利技术提供含不具有环状结构的表面活性剂的在脂蛋白质的吸收能力的测定中使用的试样稀释用试剂。本专利技术提供含不具有环状结构的表面活性剂的在脂蛋白质的吸收能力的测定中使用的清洗用试剂。【专利技术的效果】根据本专利技术，在脂蛋白质的吸收能力的测定中，非特异反应或粒子凝集被抑制。【附图的简单的说明】【图1A】图1A是显示本实施方式涉及的试剂盒的外观的一例的图。【图1B】图1B是显示本实施方式涉及的试剂盒的外观的一例的图。【图1C】图1C是显示本实施方式涉及的试剂盒的外观的一例的图。【图1D】图1D是显示本实施方式涉及的试剂盒的外观的一例的图。【图2】图2是显示磁性粒子的回收效率的坐标图。【图3】图3是显示使用含各种表面活性剂的反应缓冲液而测定HDL的胆甾醇吸收能力的结果的坐标图。【图4】图4是显示使用含各种表面活性剂的反应缓冲液而测定HDL的胆甾醇吸收能力的结果的坐标图。【图5】图5是显示使用含不具有环状结构的表面活性剂的反应缓冲液而测定HDL的胆甾醇吸收能力的结果的坐标图。【图6】图6是显示使用含不具有环状结构的表面活性剂的反应缓冲液而测定HDL的胆甾醇吸收能力的结果的坐标图。【图7】图7是显示使用含各种表面活性剂的试样稀释用试剂而测定HDL的胆甾醇吸收能力的结果的坐标图。【图8】图8是显示使用含不具有环状结构的表面活性剂的试样稀释用试剂而测定HDL的胆甾醇吸收能力的结果的坐标图。【图9】图9是显示使用含不具有环状结构的表面活性剂及环糊精的试样稀释用试剂而测定HDL的胆甾醇吸收能力的结果的坐标图。【具体实施方式】[1.对脂蛋白质的吸收能力进行测定的方法1]在本实施方式的测定脂蛋白质的吸收能力的方法(以下，也称为“测定方法”)中，首先，将试样中的脂蛋白质和标记甾醇在不具有环状结构的表面活性剂的存在下混合。由此混合，在不具有环状结构的表面活性剂的存在下脂蛋白质和标记甾醇相接触，该标记甾醇被脂蛋白质吸收。在本实施方式中，如后述的实施例所示，通过在不具有环状结构的表面活性剂的存在下进行上述的混合，与使用具有环状结构的表面活性剂时相比，促进由脂蛋白质的吸收反应。所以，本实施方式的测定方法使以更高的精度测定脂蛋白质的吸收能力变得可能。另外，不具有环状结构的表面活性剂还发挥封闭剂的作用。因此，在本实施方式中，也可不使用牛血清白蛋白(BSA)等的免疫学测定中作为封闭剂一般使用的动物来源蛋白质。动物来源蛋白质有批间的品质不稳定的情况。另外，动物来源蛋白质有与表面活性剂相比，与试样中的成分或添加到测定系的抗体或标记甾醇非特异性地结合的倾向。由于不具有环状结构的表面活性剂是合成品，品质大致一定，对测定的影响与动物来源蛋白质相比轻微。(不具有环状结构的表面活性剂)不具有环状结构的表面活性剂是指作为非环式化合物的表面活性剂。不具有环状结构的表面活性剂可从非离子性表面活性剂、阳离子性表面活性剂、阴离子性表面活性剂及两性表面活性剂适宜选择，优选为非离子性表面活性剂。不具有环状结构的非离子性表面活性剂不特别限定，可举出例如，聚亚烷基二醇环氧乙烷加成物、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、聚氧基亚烷基二烷基醚、聚氧基亚烷基烯基醚、聚氧乙烯分歧烷基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、聚氧基亚烷基醚、聚乙二醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、聚丙烯二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯椰脂肪酸甘油基、聚氧乙烯固化蓖麻子油、聚氧乙烯蓖麻子油、聚氧乙烯三异硬脂酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基胺、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基胺、聚氧乙烯烷基丙二胺、脂肪酸二乙醇酰胺、聚氧乙烯脂肪酸单乙醇酰胺等。不具有环状结构的非离子性表面活性剂可单独使用，也可将2种以上组合使用。在上述的非离子性表面活性剂之中，也优选聚氧乙烯烷基醚及聚亚烷基二醇环氧乙烷加成物。作为聚氧乙烯烷基醚，可举出例如，聚氧乙烯月桂基醚、聚氧乙烯鲸蜡基醚、聚氧乙烯硬脂基醚、聚氧乙烯山萮基醚等。在本实施方式中，特别优选聚氧乙烯月桂基醚。聚氧乙烯月桂基醚有市售，可举出例如，日油株式会社的非离子K-230及非离子K-220、花王株式会社的Emulgen123P及Emulgen130K等。在本实施方式中，作为聚亚烷基二醇环氧乙烷加成物，优选嵌段共聚物，更优选环氧乙烷和环氧丙烷的三嵌段共聚物。作为这样的嵌段共聚物的非离子性表面活性剂，特别优选下述的式(I)所表示的化合物。【化1】(式中，x、y及z相同或不同，是1以上的整数，聚丙烯氧化物部分的分子量是2750以下)式(I)所表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.测定脂蛋白质的吸收能力的方法，其包括：/n通过将试样中的脂蛋白质和标记甾醇在不具有环状结构的表面活性剂的存在下混合，调制吸收所述标记甾醇的脂蛋白质的工序，及/n基于吸收到所述脂蛋白质的标记甾醇的标记而测定对所述标记甾醇的吸收能力的工序。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180330 JP 2018-0678241.测定脂蛋白质的吸收能力的方法，其包括：
通过将试样中的脂蛋白质和标记甾醇在不具有环状结构的表面活性剂的存在下混合，调制吸收所述标记甾醇的脂蛋白质的工序，及
基于吸收到所述脂蛋白质的标记甾醇的标记而测定对所述标记甾醇的吸收能力的工序。


2.权利要求1所述的方法，其中所述表面活性剂是非离子性表面活性剂。


3.权利要求1或2所述的方法，其中所述表面活性剂是聚亚烷基二醇环氧乙烷加成物。


4.权利要求3所述的方法，其中所述聚亚烷基二醇环氧乙烷加成物是嵌段共聚合型。


5.权利要求4所述的方法，其中所述嵌段共聚合型的表面活性剂是：
下述的式(I)所表示的化合物：
【化1】



式中，
x、y及z相同或不同，是1以上的整数，
聚丙烯氧化物部分的分子量是2750以下，或者
下述的式(II)所表示的化合物：
【化2】



式中，
p、q及r相同或不同，是1以上的整数，
聚丙烯氧化物部分的分子量是2750以下。


6.权利要求1或2所述的方法，其中所述表面活性剂是聚氧乙烯月桂基醚。


7.权利要求1～6之任一项所述的方法，其中所述脂蛋白质是高密度脂蛋白质。


8.权利要求1～7之任一项所述的方法，其中所述标记甾醇是标记胆甾醇。


9.权利要求8所述的方法，其中所述标记胆甾醇是下述的式(III)所表示的附加有标签的胆甾醇：
【化3】



式中，
R1是任选具有甲基的碳原子数1～6的亚烷基，
X及Y相同或不同，由-R2-NH-、-NH-R2-、-R2-(C＝O)-NH-、-(C＝O)-NH-R2-、-R2-NH-(C＝O)-、-NH-(C＝O)-R2-、-R2-(C＝O)-、-(C＝O)-R2-、-R2-(C＝O)-O-、-(C＝O)-O-R2-、-R2-O-(C＝O)-、-O-(C＝O)-R2-、-R2-(C＝S)-NH-、-(C＝S)-NH-R2-、-R2-NH-(C＝S)-、-NH-(C＝S)-R2-、-R2-O-、-O-R2-、-R2-S-、或者-S-R2-表示，其中，R2各自独立地是连键、任选有取代基的碳原子数1～10的亚烷基、任选有取代基的碳原子数6～12的亚芳基或杂亚芳基、或者，任选有取代基的碳原子数3～8的环亚烷基或杂环亚烷基，
L由-(CH2)d-[R3-(CH2)e]f-、或者-[(CH2)e-R3]f-(CH2)d-表示，其中，R3是氧原子、硫原子、-NH-、-NH-(C＝O)-或-(C＝O)-NH-，
TAG是标签，
a及c相同或不同，是0～6的整数，
b是0或1，
d及e相同或不同，是0～12的整数，
f是0～24的整数。


10.权利要求9所述的方法，其中所述附加有标签的胆甾醇的结构为，作为标签附加有：
下述的式(IV)所表示的结构：
【化4】

或者
下述的式(V)所表示的结构：
【化5】

或者
2,4-二硝基苯基。


11.权利要求10所述的方法，其中所述附加有标签的胆甾醇由下述的式表示：
下述的式(VI)：
【化6】

或者
下述的式(VII)：
【化7】



式中，n是0～24的整数，或者
下述的式(VIII)：
【化8】





12.权利要求1～11之任一项所述的方法，其中所述测定工序包括将吸收所述标记甾醇的脂蛋白质...

【专利技术属性】
技术研发人员：原田周，饭野琢也，久保卓也，村上克洋，佐伯直哉，彭小玲，桐山真利亚，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP