一种C反应蛋白测定试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种C反应蛋白(CRP)测定试剂盒及其制备方法和应用，属于体外诊断试剂技术领域。本发明专利技术提供的C反应蛋白CRP测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；其中，所述试剂R1包括缓冲液、无机盐、表面活性剂、稳定剂和防腐剂；所述试剂R2包括缓冲液、表面活性剂、封闭剂、抗人CRP抗体胶乳结合物和防腐剂。本发明专利技术提供的C反应蛋白(CRP)测定试剂盒在现有的胶乳免疫比浊法的基础上，通过特定的制备方法以及抗冻剂优化反应体系，进一步提高了测定试剂的检测准确度、分析灵敏度及精密度，且未提高试剂研发成本，更易适应现代化临床检验医学的发展。

A C-reactive protein assay kit and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种C反应蛋白测定试剂盒及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种C反应蛋白(CRP)测定试剂盒及其制备方法和应用，属于体外诊断试剂

技术介绍
C-反应蛋白(C-reactiveprotein，简称CRP)，是在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质(急性蛋白)，是1930年由Tillet和Francis发现的蛋白质物质。最初他们观察到一些急性病人的血清可与肺炎链球菌的荚膜C-多糖发生反应，随后证实能与C-多糖反应的物质是一种蛋白质，便将其命名为C-反应蛋白(C-reactiveProtein，CRP)。C-反应蛋白(CRP)是由5个完全相同的非糖基化的亚单位非共价联结，每个亚单位相对分子质量23017，由206个氨基酸残基组成，CRP这种盘状五聚体特征结构使其归于五聚素(Pentraxins)家族。CRP在健康人血清中浓度很低，且细菌感染或组织损伤时，其浓度显著(10倍甚至百倍)升高，而且上升和下降都很迅速。其作为一种急性时相反应蛋白，在感染、炎性疾病、组织损伤、恶性肿瘤、手术创伤及组织坏死等多种病理生理情况下，几小时内迅速升高，并在24h-72h达高峰，可超过正常水平的十、百、甚至千倍。疾病好转后，CRP水平可迅速下降至正常。CRP上升速度、幅度及持续时间与病情及组织损伤的严重程度密切相关。因此对感染、炎性疾病、恶性肿瘤、结缔组织疾病、心血管疾病及外伤等多种疾病的诊断、辅助诊断、疗效观察及预后判断均有较好的临床意义。目前现有检测技术中，CRP的测定方法通常可以归为两大类，一类是标记免疫技术，另一类是非标记免疫技术。前者主要包括免疫层析法、ELISA、放射免疫法、直接化学发光法和电化学发光法等，后者的主要包括单项免疫扩散法、胶乳凝集法和免疫比浊法等。免疫层析法技术的检测在快速检测中应用广泛，但是本底高，易衰减，只定性不定量且灵敏度低；同时ELISA也有许多缺点，其灵敏度相对较低、操作复杂且耗时长，自动化程度低，并有逐渐被化学发光代替的趋势；而放射免疫法，由于试剂保存时间短、自动化程度低，同时会造成放射性物质环境污染，基本已被淘汰。而化学发光法与电化学发光法，两者都有灵敏度高、试剂稳定等优势，但相对来说试剂成本都较高，设备昂贵，存在中、小医院难以开展的不足。单项免疫扩散法及乳胶凝集法，操作简单快速、特异性高、但两种方法灵敏度低，前者抗体过量时易出现假阴性，后者易受补体、类风湿因子等干扰出现假阳性。免疫比浊法，又可分为散射比浊和透射比浊，两者在CRP反应原理上相似，只是在光波接收方式上不同。散射比浊由于其光波接受方式的特点，通常测试结果的灵敏度与测速要优于透射比浊，但同时需特定的自动化分析仪器，且试剂价格高，不易于在基层医院中推广使用。透射比浊操作简便适用性强，普通自动生化分析仪和分光光度计均可使用，几乎所有的各实验室、基层医院均能开展，不足的是灵敏度和精密度均不够理想。随着检验医学的飞速发展，临床上也不断发现新指标和新技术，对于检验医学的要求越来越精确量化，对于低浓度检测物质的检测越来越多，对体外诊断试剂产品的质量性能如稳定性、灵敏度、特异性、检测线性范围等也提出了更高要求。目前市场上用于比浊法检测的试剂绝大部分为液态的双试剂，且体外诊断试剂常用的运输手段主要为冷藏车和冷藏(保温)箱。但由于试剂供应商众多且品种供应分散以及运输成本等问题，绝大多数采用冷藏(保温)箱加冷冻冰袋配送。且在实际工作中，使用的冷藏(保温)箱大小不一，冷藏(保温)箱厚薄不均，密封性能也各有差异。在冰袋的使用上，也没有明确规定，随意性很大。冷藏(保温)箱中，试剂盒和冰袋的摆放，毫无规律，需冷藏保存的试剂如果裸露与冰袋混装，可能存在试剂冻融致使试剂中的某些因子失活的风险，从而影响测定结果，因此解决试剂在运输过程中的冻融问题就成了较大的难题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足提供一种灵敏度高、特异性强、精密度好、成本较低的C反应蛋白(CRP)测定试剂盒。本专利技术的另一目的是提供所述C反应蛋白(CRP)测定试剂盒的制备制备方法。本专利技术的再一目的是提供所述C反应蛋白(CRP)测定试剂盒在检测C反应蛋白(CRP)中的应用。本专利技术所述试剂盒基于胶乳免疫透射比浊法(PETIA)，其原理是采用化学偶联法将特异性抗体结合于一定粒径的胶乳颗粒表面，当交联有抗体的微球与抗原结合后，短时间内迅速聚集在一起，从而改变反应液的吸光度。根据吸光度增加量，即可在波长600nm处测定免疫复合物浊度，定量检测血清中的CRP含量。胶乳免疫透射比浊法由于其适用性强、测试方便等特性，已广泛应用于临床检测中。但随着医学的飞速发展，对于检验医学的要求越来越精确量化，同时对体外诊断试剂产品的质量性能如稳定性、灵敏度、特异性、检测线性范围等也提出了更高要求。本专利技术在现有的胶乳免疫比浊法的基础上，通过特定的制备方法以及添加抗冻剂等优化反应体系，进一步提高了测定试剂的分析灵敏度及精密度，同时保证了试剂的稳定性，即使C反应蛋白(CRP)测定试剂盒的温度低于0℃，甚至低于-20℃贮存一周，也能实现对CRP的准确检测，且未提高试剂研发成本，更易适应现代化临床检验医学的发展。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种C反应蛋白CRP测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；其中，所述试剂R1包括缓冲液、无机盐、表面活性剂、稳定剂和防腐剂；所述试剂R2包括缓冲液、表面活性剂、封闭剂、抗人CRP抗体胶乳结合物和防腐剂。优选地，所述试剂R2还包括抗冻剂。优选地，所述试剂R1中各组分的浓度为：缓冲液15～150mmoL/L、无机盐5～50g/L、表面活性剂5～50g/L、稳定剂5～100g/L和防腐剂0.05～2g/L。优选地，所述试剂R2中各组分的浓度为：缓冲液90～200mmoL/L、表面活性剂5～25g/L、封闭剂5～25g/L、抗人CRP抗体胶乳结合物5～15g/L和防腐剂0.05～2g/L。优选地，所述抗冻剂浓度为10g/L，所述抗冻剂为赤藓糖醇。优选地，所述试剂R1和所述试剂R2中的所述缓冲液选自TRIS/HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、硼砂缓冲液中的至少一种。优选地，所述试剂R1和所述试剂R2中的所述表面活性剂选自吐温-20、吐温80、十二烷基硫酸钠、曲拉通X-100中的至少一种。优选地，所述试剂R1和所述试剂R2中的所述防腐剂选自叠氮化钠、庆大霉素、硫柳汞、Proclin300中的至少一种。优选地，所述试剂R1中的无机盐选自KCl、CaCl2、NaCl、BaCl2、MgCl2、AlCl3中的至少一种。优选地，所述试剂R1中的稳定剂选自蔗糖、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、甘油、明胶中的至少一种。优选地，所述试剂R2中的封闭剂选自小牛血清白蛋白、明胶、吐温-20、酪蛋白中的至少一种。本专利技术所述的C反应蛋白(CRP)测定试剂盒的制备方法，其中，所述试剂R1中的各组分按照常规方法制备；所述试剂R2中的缓冲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种C反应蛋白CRP测定试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2；其中，所述试剂R1包括缓冲液、无机盐、表面活性剂、稳定剂和防腐剂；所述试剂R2包括缓冲液、表面活性剂、封闭剂、抗人CRP抗体胶乳结合物和防腐剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种C反应蛋白CRP测定试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2；其中，所述试剂R1包括缓冲液、无机盐、表面活性剂、稳定剂和防腐剂；所述试剂R2包括缓冲液、表面活性剂、封闭剂、抗人CRP抗体胶乳结合物和防腐剂。


2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R2还包括抗冻剂。


3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中各组分的浓度为：缓冲液15～150mmoL/L、无机盐5～50g/L、表面活性剂5～50g/L、稳定剂5～100g/L和防腐剂0.05～2g/L；所述试剂R2中各组分的浓度为：缓冲液90～200mmoL/L、表面活性剂5～25g/L、封闭剂5～25g/L、抗人CRP抗体胶乳结合物5～15g/L和防腐剂0.05～2g/L。


4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述抗冻剂浓度为10g/L，所述抗冻剂为赤藓糖醇。


5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和所述试剂R2中的所述缓冲液选自TRIS/HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液、硼砂缓冲液中的至少一种；所述试剂R1和所述试剂R2中的所述表面活性剂选自吐温-20、吐温80、十二烷基硫酸钠、曲拉通X-100中的至少一种；所述试剂R1和所述试剂R2中的所述防腐剂选自叠氮化钠、庆大霉素、硫柳汞、Proclin300中的至少一种；
所述试剂R1中的无机盐选自KCl、CaCl2、NaCl、BaCl2、MgCl2、AlCl3中的至少一种；所述试剂R1中的稳定剂选自蔗糖、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、甘油、明胶中的至少一种；
所述试剂R2中的封闭剂选自小牛血清白蛋白、明胶、吐温-...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘光华，杨玉军，
申请(专利权)人：广州市伊川生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44