一种抽动障碍的血清多肽标志物F及其检测方法技术

本发明专利技术属生物医药领域，具体涉及一类非创伤性诊断抽动障碍的血清多肽标记物。本发明专利技术提供了一种抽动障碍的血清多肽标记物,多肽标志物是多肽FGA1或其肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A。本发明专利技术还提供了上述血清多肽标记物的检测方法和应用,还提供了根据上述血清多肽标记物制成的试剂盒。本发明专利技术抽动障碍的血清多肽标记物及其检测方法，有利于其早期诊断，对抽动障碍发病机制的探讨、早期干预及治疗药物的研发都具有重要意义。同时可以制备成不同的检验检测用品，如制成诊断试剂盒、诊断试纸、诊断试剂；治疗及预后评估相关试剂盒、试纸、试剂等。

【技术实现步骤摘要】
一种抽动障碍的血清多肽标志物F及其检测方法
本专利技术属生物医药领域，涉及生物医学中诊断抽动障碍血清分子标志物，具体涉及一类非创伤性诊断抽动障碍的血清多肽标志物。
技术介绍
抽动障碍(Ticdisorders，TD)是一种儿童常见，以无目的、反复、快速、不自主的一个部位或多个部位运动性或发声性抽动为主要临床表现的慢性神经精神疾病。该病于1885年在国际上首次报道，近年来，TD发病率呈整体上升趋向，但TD的发病原因及发病机制至今仍不清楚。对TD的诊断目前采用的是临床描述性诊断，还没有发现特异性的客观诊断手段。医生在详细询问病史的情况下，依据患儿的临床表现及伴随神经精神行为表现，再依据体格检查及相关辅助检查排除其它疾病后给予诊断。这种诊断方法有一定的缺陷性：①因需排除相关疾病，检查花费高，耗时长；②多数TD患儿常伴有注意力不集中、情绪障碍、自伤行为等精神行为异常表现，繁琐的诊断过程增加了患儿敏感内心的负担，加重心理行为异常表现。基于TD的诊断特点，患儿往往在得病之初不能得到及时、准确的诊断，迫切需要开发客观的生物诊断指标。而且，TD生物学指标的筛查不仅有利于其早期诊断，对该病发病机制的探讨、早期干预及治疗药物的研发都具有重要意义。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一类抽动障碍的血清多肽标志物F及其检测方法。本专利技术提供的技术方案是：本专利技术提供了一种抽动障碍的血清多肽标志物F，所述的多肽标志物F是多肽FGA1或其肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A。本专利技术还提供了上述的血清多肽标志物F的检测方法，其特征在于，取血清样本并进行纯化，检测所述的血清多肽标志物F的含量。进一步地，使用ELISA方法检测所述的血清多肽标志物多肽FGA1的含量。进一步地，使用MALDI-TOF-MS方法检测所述的血清多肽标志物肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A的含量。本专利技术还提供了上述的血清多肽标志物F的应用，根据所述的血清多肽标志物F的含量诊断抽动障碍。进一步地，血清样本中，正常儿童多肽FGA1的含量为抽动障碍儿童血清样本含量的1.2倍以上；或正常儿童肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A的含量为抽动障碍儿童血清样本含量的2.08倍及以上，相应多肽标志物的含量异常，血清多肽标志物表达量(即含量)异常可初步判断为抽动障碍。本专利技术还提供了抽动障碍的诊断试剂或诊断试剂盒，该诊断试剂或诊断试剂盒中含有所述的血清多肽标志物F或与该标志物F结合的物质。进一步地，与该标志物F结合的物质为结合有糖链、脂质等修饰物的该标志物F。本专利技术还提供了上述的血清多肽标志物F的应用，所述的血清多肽标志物F可以应用于抽动障碍诊断靶点。本专利技术的有益效果是：本专利技术公开了一种抽动障碍的血清多肽标志物FGA1或其肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A，在抽动障碍患儿血清中呈现显著低表达，组间差异极显著(P＜0.001)。鉴于多肽FGA1及其肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A在抽动障碍血清中显著低表达，那么FGA1及其肽段就可以作为抽动障碍血清诊断标志物。应用ELISA方法检测FGA1或MALDI-TOF-MS技术对其肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A的表达水平进行检测，可以作为抽动障碍患儿诊断的检测方法。FGA1及其肽段可以应用于制备血清检测抽动障碍诊断试剂或诊断试剂盒中，也可以作为检测药物的新靶点。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制，在附图中：图1是随机选取的一例健康对照组儿童三次采样的蛋白多肽图谱；图2是随机选取的一例TD组儿童三次采样的蛋白多肽图谱；图3是M/Z为2191.84的蛋白多肽峰在TD组和健康对照组中的表达差异；图4是M/Z为2191.84的蛋白多肽的LC-MS/MS鉴定质谱图；图5是FGA1标准曲线；图6是TD组和健康对照组血清多肽FGA1的表达水平(AB为TD组、Normal为健康对照组)。具体实施方式本专利技术公开了一种抽动障碍的血清多肽标志物FGA1及其肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A，该多肽及其肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A表达具有特异性，可以作为一种新的抽动障碍血清诊断标志物，可用于抽动障碍的诊断。下面结合具体的实施例对本专利技术抽动障碍的血清多肽标志物的验证做进一步的详细说明。所述是对本专利技术的解释而不是限定。步骤1、样本的采集与处理采集西安市儿童医院儿童保健科门诊2017年4—10月临床确诊的60例抽动障碍患儿，和同时期、同来源健康体检基本正常的30例健康对照儿童。经比较各组间性别、年龄均无统计学差异。使用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-k2)采血管采集入组研究对象空腹4小时的肘静脉血2mL，混匀后室温静置2小时。然后于10℃条件下，以3300rpm/min离心10min，将血清转移到样品管中并编号，-20℃冰箱保存，避免反复冻融。步骤2和3为使用MALDI-TOF-MS方法检测所述的血清多肽标志物肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A的含量。步骤2、样本的纯化应用Bruker公司的弱阳离(MB-WCX)试剂盒，对血清进行处理，具体操作步骤如下：从-20℃冰箱中取出血清并置于冰上融化。①从4℃冷藏储存室取出WCX磁珠悬浮液，完全混匀1min；②取7μL磁珠置于200μL样品管中，并加入10μL磁珠结合缓冲液(bindingbuffer，BB)，吹打20次混匀，然后再加入5μL样本，吹打10次混匀，室温下静置5min；③将样品管放入磁珠分离器，使磁珠贴壁2min，使液体澄清，然后弃上清液；④向样品管中加入100μL清洗液(washbuffer，WB)，并使样品管在磁珠分离器中来回移动10次，静置1min，弃上清液，此清洗过程共重复3次；⑤向样品管中加入5μL洗脱液(elutionbuffer，EB)，吹打20次混匀后使磁珠贴壁2min，然后转移上清液至新管；⑥加入5μL稳定液(stabilizationbuffer，SB)，混匀。步骤3、一级质谱分析3.1点样、上机在直径为600μL的AnchorChipTM质谱板上点加磁珠处理过的样品1μL，将点样后的质谱板室温条件下干燥；然后在每个样品干燥原点处点加1μL浓度为0.3g/L的HCCA溶液，室温条件下干燥。待干燥后将靶板放入质谱仪进行分析，校正并设置仪器参数，将质量范围设定为0.8-10kDa，每个样品孔均采集信息3次，如图1、图2，纵坐标代表波峰的强度，即蛋白质的相对含量，横坐标为分子量(M/Z)。3.2数据采集与分析应用flexControl3.3采本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抽动障碍的血清多肽标志物F，其特征在于，所述的多肽标志物F是多肽FGA1或其肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A。/n

【技术特征摘要】
1.一种抽动障碍的血清多肽标志物F，其特征在于，所述的多肽标志物F是多肽FGA1或其肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A。


2.权利要求1所述的血清多肽标志物F的检测方法，其特征在于，取血清样本并进行纯化，检测权利要求1所述的血清多肽标志物F的含量。


3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，使用ELISA方法检测权利要求1所述的血清多肽标志物多肽FGA1的含量。


4.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，使用MALDI-TOF-MS方法检测权利要求1所述的血清多肽标志物肽段T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A的含量。


5.权利要求1所述的血清多肽标志物F的应用，其特征在于，根据权利要求1所述的血清多...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈艳妮，王端，贺文香，张海清，何玉莹，张卉，马艳芳，
申请(专利权)人：陕西中医药大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61