一种蛋白质标记方法技术

本发明专利技术专利公开了一种蛋白质标记方法，其标记方法包括如下步骤：首先从淋巴因子或生长因子中提取细胞因子，再选取培养基将细胞置于其中进行培养；向缺乏氨基酸的细胞培养基中加入精氨酸、赖氨酸和脯氨酸，将它们均匀混合并静置一段时间；本发明专利技术专利可以在几十分钟内完成样品的标记，而且用到蛋白质样品的质量较低，进而减少了所用的成本，其具备反应步骤较少，且不会出现严重副反应，在耗费较少样品的情况下即可实现高效和精确处理的优点，解决了目前对于蛋白质的酶解标记和化学标记方法会产生一定的副反应，而且其反应的步骤较多，导致样品大量损失，因而降低了标记的效率和鉴定的准确度的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白质标记方法
本专利技术专利涉及生物学
，具体为一种蛋白质标记方法。
技术介绍
蛋白质标记的主要目的是监测生物过程、辅助检测（例如化合物的可靠定量、蛋白质修饰的特异性检测）或者纯化标记后的蛋白及其结合对象。蛋白质的标记能够提高检测灵敏度以及简化检测工作流程。蛋白质的大规模鉴定和定量分析是蛋白质组学研究的关键。蛋白质定量分析新技术在生命基本机制及疾病标志物的发现中发挥着关键的推动作用。其中，基于生物质谱的稳定同位素化学标记技术在蛋白质的相对定量和绝对定量中发挥着越来越重要的作用。目前对于蛋白质的酶解标记和化学标记方法会产生一定的副反应，而且其反应的步骤较多，导致样品大量损失，因而降低了标记的效率和鉴定的准确度，为此我们提出一种反应步骤较少，且不会出现严重副反应，在耗费较少样品的情况下即可实现高效和精确处理的蛋白质标记方法来解决此问题。专利技术专利内容本专利技术专利的目的在于提供一种蛋白质标记方法，具备反应步骤较少，且不会出现严重副反应，在耗费较少样品的情况下即可实现高效和精确处理的优点，解决了目前对于蛋白质的酶解标记和化学标记方法会产生一定的副反应，而且其反应的步骤较多，导致样品大量损失，因而降低了标记的效率和鉴定的准确度的问题。为实现上述目的，本专利技术专利提供如下技术方案：一种蛋白质标记方法，其标记方法包括如下步骤：（1）细胞的培养：首先从淋巴因子或生长因子中提取细胞因子，再选取培养基将细胞置于其中进行培养；（2）培养基的制备：向缺乏氨基酸的细胞培养基中加入精氨酸、赖氨酸和脯氨酸，将它们均匀混合并静置一段时间；（3）蛋白质的提取：通过将上述细胞添加至上述培养基中，使它们进行分裂增殖，再对部分细胞进行收集，之后从其中提取蛋白质；（4）蛋白质的处理：将蛋白质提取物分别经过蛋白质变性，蛋白质还原和烷基化过程处理，之后再对蛋白质进行酶解处理；（5）产物的标记：对酶解处理后的产物进行同位素标记，且分别采用轻标记试剂和重标记试剂进行同位素标记；（6）产物的处理：将两种不同试剂标记的产物在反应后进行冻干，再经液质联用分析后，即可进行蛋白质的定量研究。优选的，所述步骤（3）中，所收集的细胞是经过分裂增殖6次以上的细胞，且在培养时将培养基等量分为三份，以提高试验数据的精确性。优选的，所述步骤（3）中，提取的蛋白质是源自单克隆抗体、双特异性抗体、鼠抗体、嵌合抗体、人抗体或人源化抗体中的任意一种。优选的，所述步骤（4）中，整个过程在碳酸氢铵水溶液中进行，且溶解的蛋白混合物它们的质量比不同，烷基化过程加入的试剂为二硫苏糖醇或碘乙酰胺中的任意一种。优选的，所述步骤（4）中，蛋白酶为胰蛋白酶、特异性内肽酶Arg-C、Lys-C、胰凝乳蛋白酶或弹性蛋白酶中的任意一种或二种以上蛋白酶的组合。优选的，所述步骤（4）中，酶解所用的碳酸氢铵溶液的PH值为8-9，蛋白质和酶的质量比为125:1，所反应的时间为14-17h，且反应的温度为37℃。优选的，所述步骤（5）中，轻标记试剂可以为CH2O、NaCNBH3和CH2O、NaCNBD3组合中的任意一种，相对应的重标记试剂可以为CD2O、NaCNBD3和CD2O、NaCNBH3组合中的任意一种。优选的，所述步骤（5）中，轻标记试剂的添加量为0.005-1mol，重标记试剂的添加量为0.005-1mol，且两种添加后的溶液均在相同试剂浓度下进行反应，反应的时间为50-70min。优选的，所述步骤（6）中，产物冻干操作采用的仪器为冷冻干燥仪，且该仪器的型号为Hetolyolab3000，冷冻的温度为-58℃。优选的，所述步骤（6）中，液质联用分析所使用的缓冲液为丙酮、多聚甲醛、PBS缓冲液中的任意一种或两种以上的组合。与现有技术相比，本专利技术专利的有益效果如下：本专利技术专利可以在几十分钟内完成样品的标记，而且用到蛋白质样品的质量较低，进而减少了所用的成本，其具备反应步骤较少，且不会出现严重副反应，在耗费较少样品的情况下即可实现高效和精确处理的优点，解决了目前对于蛋白质的酶解标记和化学标记方法会产生一定的副反应，而且其反应的步骤较多，导致样品大量损失，因而降低了标记的效率和鉴定的准确度的问题。具体实施方式下面将结合本专利技术专利中的实施例，对本专利技术专利实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术专利一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术专利中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术专利保护的范围。一种蛋白质标记方法，其标记方法包括如下步骤：（1）细胞的培养：首先从淋巴因子或生长因子中提取细胞因子，再选取培养基将细胞置于其中进行培养；（2）培养基的制备：向缺乏氨基酸的细胞培养基中加入精氨酸、赖氨酸和脯氨酸，将它们均匀混合并静置一段时间；（3）蛋白质的提取：通过将上述细胞添加至上述培养基中，使它们进行分裂增殖，再对部分细胞进行收集，之后从其中提取蛋白质；（4）蛋白质的处理：将蛋白质提取物分别经过蛋白质变性，蛋白质还原和烷基化过程处理，之后再对蛋白质进行酶解处理；（5）产物的标记：对酶解处理后的产物进行同位素标记，且分别采用轻标记试剂和重标记试剂进行同位素标记；（6）产物的处理：将两种不同试剂标记的产物在反应后进行冻干，再经液质联用分析后，即可进行蛋白质的定量研究。实施例一：一种蛋白质标记方法，其标记方法包括如下步骤：（1）细胞的培养：首先从淋巴因子或生长因子中提取细胞因子，再选取培养基将细胞置于其中进行培养；（2）培养基的制备：向缺乏氨基酸的细胞培养基中加入精氨酸、赖氨酸和脯氨酸，将它们均匀混合并静置一段时间；（3）蛋白质的提取：通过将上述细胞添加至上述培养基中，使它们进行分裂增殖，再对部分细胞进行收集，之后从其中提取蛋白质，所收集的细胞是经过分裂增殖6次以上的细胞，且在培养时将培养基等量分为三份，以提高试验数据的精确性，提取的蛋白质是源自单克隆抗体、双特异性抗体、鼠抗体、嵌合抗体、人抗体或人源化抗体中的任意一种；（4）蛋白质的处理：将蛋白质提取物分别经过蛋白质变性，蛋白质还原和烷基化过程处理，之后再对蛋白质进行酶解处理；（5）产物的标记：对酶解处理后的产物进行同位素标记，且分别采用轻标记试剂和重标记试剂进行同位素标记；（6）产物的处理：将两种不同试剂标记的产物在反应后进行冻干，再经液质联用分析后，即可进行蛋白质的定量研究。实施例二：一种蛋白质标记方法，其标记方法包括如下步骤：（1）细胞的培养：首先从淋巴因子或生长因子中提取细胞因子，再选取培养基将细胞置于其中进行培养；（2）培养基的制备：向缺乏氨基酸的细胞培养基中加入精氨酸、赖氨酸和脯氨酸，将它们均匀混合并静置一段时间；（3）蛋白质的提取：通过将上述细胞添加至上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋白质标记方法，其特征在于：其标记方法包括如下步骤：/n细胞的培养：首先从淋巴因子或生长因子中提取细胞因子，再选取培养基将细胞置于其中进行培养；/n培养基的制备：向缺乏氨基酸的细胞培养基中加入精氨酸、赖氨酸和脯氨酸，将它们均匀混合并静置一段时间；/n蛋白质的提取：通过将上述细胞添加至上述培养基中，使它们进行分裂增殖，再对部分细胞进行收集，之后从其中提取蛋白质；/n蛋白质的处理：将蛋白质提取物分别经过蛋白质变性，蛋白质还原和烷基化过程处理，之后再对蛋白质进行酶解处理；/n产物的标记：对酶解处理后的产物进行同位素标记，且分别采用轻标记试剂和重标记试剂进行同位素标记；/n产物的处理：将两种不同试剂标记的产物在反应后进行冻干，再经液质联用分析后，即可进行蛋白质的定量研究。/n

【技术特征摘要】
1.一种蛋白质标记方法，其特征在于：其标记方法包括如下步骤：
细胞的培养：首先从淋巴因子或生长因子中提取细胞因子，再选取培养基将细胞置于其中进行培养；
培养基的制备：向缺乏氨基酸的细胞培养基中加入精氨酸、赖氨酸和脯氨酸，将它们均匀混合并静置一段时间；
蛋白质的提取：通过将上述细胞添加至上述培养基中，使它们进行分裂增殖，再对部分细胞进行收集，之后从其中提取蛋白质；
蛋白质的处理：将蛋白质提取物分别经过蛋白质变性，蛋白质还原和烷基化过程处理，之后再对蛋白质进行酶解处理；
产物的标记：对酶解处理后的产物进行同位素标记，且分别采用轻标记试剂和重标记试剂进行同位素标记；
产物的处理：将两种不同试剂标记的产物在反应后进行冻干，再经液质联用分析后，即可进行蛋白质的定量研究。


2.根据权利要求1所述的一种蛋白质标记方法，其特征在于：所述步骤（3）中，所收集的细胞是经过分裂增殖6次以上的细胞，且在培养时将培养基等量分为三份，以提高试验数据的精确性。


3.根据权利要求1所述的一种蛋白质标记方法，其特征在于：所述步骤（3）中，提取的蛋白质是源自单克隆抗体、双特异性抗体、鼠抗体、嵌合抗体、人抗体或人源化抗体中的任意一种。


4.根据权利要求1所述的一种蛋白质标记方法，其特征在于：所述步骤（4）中，整个过程在碳酸氢铵水溶液中进行，且溶解的蛋白混合物它们的质量比不同，烷基化过程加入的试剂为二硫苏糖醇或碘乙酰胺中的任意一种。

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【专利技术属性】
技术研发人员：葛峰，洪斌，杨明坤，洪雨欣，余澹台，付帅，
申请(专利权)人：湖北普罗金科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42