一种稀有肿瘤细胞富集方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种稀有肿瘤细胞的富集方法，包括如下步骤，用粘附剂包被细胞分离载体，将待富集的样品加入包被后的载体中，将加样后的多孔培养板进行富集处理，吸附于底部粘附剂包被层的为稀有肿瘤细胞。本发明专利技术利用包被的粘附剂层形成粘性界面，而且肿瘤细胞表面粘附性蛋白的表达量较白细胞高，粘附能力较白细胞更强，在同等条件下，肿瘤细胞先被粘附，白细胞未粘附而被去除，从而达到富集目的。本发明专利技术还公开了用于富集循环肿瘤细胞的试剂盒。本发明专利技术所述的富集方法操作简单，富集效果好，白细胞去除率和肿瘤细胞回收率高，有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种稀有肿瘤细胞富集方法及试剂盒
本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种稀有肿瘤细胞富集方法、富集用试剂盒以及牛血清白蛋白在制备该试剂盒中的应用。
技术介绍
恶性肿瘤在播散、侵袭、转移的过程中常伴有肿瘤细胞进入体液，如血液、胸水、腹水、脑脊液等。因此，在此类样本中对肿瘤细胞进行检测是判定肿瘤存在、转移的关键，具有重要的临床意义。例如，循环肿瘤细胞(circulatingtumorcells,CTCs)主要指为自发或因诊疗操作脱离实体瘤原发灶或转移灶而进入外周血循环的肿瘤细胞。透过基底膜进入血液后，少数CTCs能逃避机体的免疫杀伤而存活下来，部分肿瘤细胞团也可以直接从原发灶脱离并进入循环系统，形成循环肿瘤微栓。血中的CTCs不仅具有循环的特性，还保留了原始肿瘤细胞的生物学特性，包括细胞体积、表面蛋白及糖蛋白、电荷等特性。这些CTCs和CTM随血液播散后可在其他部位形成新的转移灶，与肿瘤的转移和复发密切相关。因而CTCs的检测及分析在微转移灶早期发现、疗效评估与个体化治疗等方面具有重要临床应用价值。但是，这类样本中的肿瘤细胞通常数量非常稀本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种稀有肿瘤细胞富集方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1.包被：用粘附剂包被细胞分离载体，形成包被层；/nS2.加样：将待富集的样品加入包被后的载体中；/nS3.富集：将载体中的样品进行富集处理，吸附于底部粘附剂包被层的为稀有肿瘤细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种稀有肿瘤细胞富集方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.包被：用粘附剂包被细胞分离载体，形成包被层；
S2.加样：将待富集的样品加入包被后的载体中；
S3.富集：将载体中的样品进行富集处理，吸附于底部粘附剂包被层的为稀有肿瘤细胞。


2.根据权利要求1所述的稀有肿瘤细胞富集方法，其特征在于，所述方法还包括步骤S4：弃去上层液体，获得富集的循环肿瘤细胞；优选地，粘附剂选自牛血清白蛋白(BSA)，多聚赖氨酸，Fn纤维连接蛋白、胶原蛋白中的至少一种。


3.根据权利要求1或2所述的稀有肿瘤细胞富集方法，其特征在于，所述循环肿瘤细胞为来源于肺癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、骨肉瘤、间质瘤、胶质瘤中一种或两种以上的肿瘤细胞；优选地，所述载体为多孔培养板、酶标板、细胞离心管、玻片、PDMS芯片、仿生生物膜、玻璃芯片、纸芯片、细胞培养微流控芯片等中的一种。


4.根据权利要求1-3任一项所述的稀有肿瘤细胞富集方法，其特征在于，所述步骤S1为将粘附剂溶于无菌水，配成溶液，加至多孔培养板中，干燥至表面无液体流动；
优选地，所述步骤S1所述粘附剂溶液质量浓度为0.1％-75％；
优选地，所述粘附剂溶液的使用量为每孔2-5μL。


5.根据权利要求1-4任一项所述的循环肿瘤细胞富集方法，其特征在于，所述步骤S2中样品为血液、细胞悬浮液、胸水、腹水、脑脊液中的一种；
优选地，所述步骤S2包括将全血加入红细胞裂解液后重...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑磊，司徒博，叶昕怡，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：广东;44