小反刍兽疫病毒H蛋白抗体iELISA检测方法及应用技术

本发明专利技术以筛选的小反刍兽疫病毒(Peste Des Petits Ruminants Virus,PPRV)H蛋白B细胞表位为基础，选择其中反应原性较好的4个抗原表位肽串联后合成作为包被抗原，建立针对PPRV H蛋白抗体的iELISA方法，多表位抗原肽的最佳包被量为1.5×10

【技术实现步骤摘要】
小反刍兽疫病毒H蛋白抗体iELISA检测方法及应用
本专利技术涉及动物疫病检测
，尤其是一种小反刍兽疫病毒H蛋白抗体iELISA检测方法及应用。
技术介绍
小反刍兽疫(Pestedespetitsruminants，PPR)是由麻疹病毒属副黏病毒的科成员小反刍兽疫病毒(PPRvirus,PPRV)所引起的(Gibbsetal.,1979)一种对小反刍类动物具有高度致死性的病毒病，主要通过直接接触经呼吸系统传播，亦可通过精液、胚胎和乳汁等传播，是一种高度接触性传染病。PPRV主要宿主为小反刍类动物如山羊和绵羊，此外还可感染如骆驼、牛和水牛等大型反刍动物(Balamuruganetal.,2014；Maillardetal.,2008；Zakianetal.,2016)，感染后临床症状主要表现为早期动物食欲下降，发热，口鼻分泌物增多，呼出气体恶臭等；急性期高热(40℃以上)，呼吸障碍和口腔黏膜出血、眼结膜潮红等；后期表现舌、颊部以及下颚等出现坏死性病灶和水样腹泻(Jagtapetal.,2012；Thangetal.,2014)，其发病率和死本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小反刍兽疫病毒H蛋白抗体iELISA检测方法，其特征在于，包括表位肽抗原、小反刍兽疫标准阴性血清、小反刍兽疫标准阳性血清、酶标板、酶标二抗稀释液、包被液、底物显色液、封闭液、血清稀释液、终止液；/n所述表位肽抗原的制备方法为：/n选择与PPRV特异性抗体具有较好反应原性的B细胞抗原表位片段，然后将其串联进行多肽合成，以合成的多肽作为包被抗原。/n

【技术特征摘要】
1.一种小反刍兽疫病毒H蛋白抗体iELISA检测方法，其特征在于，包括表位肽抗原、小反刍兽疫标准阴性血清、小反刍兽疫标准阳性血清、酶标板、酶标二抗稀释液、包被液、底物显色液、封闭液、血清稀释液、终止液；
所述表位肽抗原的制备方法为：
选择与PPRV特异性抗体具有较好反应原性的B细胞抗原表位片段，然后将其串联进行多肽合成，以合成的多肽作为包被抗原。


2.根据权利要求1所述的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体iELISA检测方法，其特征在于，利用IEDB、ImmunomedicineGroup以及BepiPred三种生物信息学软件对H蛋白的B细胞抗原表位进行预测，共得到27条抗原表位肽并合成这些多肽片段，然后利用免疫学方法对其与PPRV阳性血清的反应原性进行鉴定，发现B细胞表位片段H123、H138、H185、H362、H368、H487、H569、H585具有抗原反应原性；选取其中反应原性最好的片段H123、H185、H362、H487串联合成该肽段。


3.一种小反刍兽疫病毒H蛋白抗体iELISA检测方法，其特征在于，将合成的表位肽用包被液稀释后包被96孔酶标板，放于4℃过夜孵育；取出酶标板，PBST洗板3-5次后甩干，加入封闭液，置于37℃温箱中孵育1h；取出酶标板，PBST洗板3-5次后甩干，加入经1:100稀释...

【专利技术属性】
技术研发人员：窦永喜，钱榜，李彦敏，朱学亮，张志东，张学燕，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62