试验肿瘤细胞对于抗癌药剂敏感性的方法技术

从给予了抗癌药剂（Ｅ７０７０及类似的化合物）的癌症病人取出肿瘤细胞，然后测定列举于表３和表４中基因的表达量。按另一种方式是，用抗癌药剂处理从癌症病人取出的肿瘤细胞，然后测定列举于表３和表４中基因的表达量。在列举于表３中基因的表达量增加，或者列举于表４中基因的表达量减少的情况下，可判定此相应的肿瘤细胞对相应的抗癌药剂是敏感的。因此，可检测肿瘤细胞对于抗癌药剂的敏感性。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于试验肿瘤细胞对于抗癌药剂是否敏感的一种方法。
技术介绍
在抗癌药剂的传统临床研究中，首先是在I期临床研究中确定该药剂的毒性概况和最大推荐剂量，然后在II期临床研究中应用肿瘤缩小率作为效力标准，根据反应率对该药剂作为药物进行评价。与此同时，随着近几年来癌生物学的研究进展，具有抑制细胞内信号转导系统和血管形成等新颖作用机理的药物正处于被积极地探索和开发的过程中。对于这些新颖的抗癌药剂，有可能不必要给予接近毒性剂量的最大推荐剂量。并且预计，通过应用与肿瘤生长抑制有关的QOL(生命质量)改善或生命延长而不是用肿瘤缩小作为指标，可以更恰当地判断药效。在这种情况下，为了更合理更明确地证实其药效，理想的是利用与肿瘤生长抑制机制密切相关的生物标志的改变作为一种替代性标志。总的来说，在抗癌治疗的过程中，当给予一种抗癌药剂时，生命机体的反应性主要取决于作为药剂靶标的肿瘤细胞对该药剂的敏感性。肿瘤细胞对药物的这种敏感性，对于各种类型的肿瘤细胞通常都有明显的改变。这种敏感性的差异可归因于药物靶分子或与这些分子相关的因子的数量或者质量差异，以及药物抗性的获得等因素。考虑到这种基本情况，如果当作为靶标的肿瘤细胞表现出对某种药物的敏感性而特异性引起的肿瘤细胞改变，可以通过使用由活组织检查等方法得到的肿瘤组织来测定，将是非常有用的，因为通过应用这种改变作为替代性标志，使较早地确定药效、建立治疗方法或者选择新的治疗方法等成为可能。而且，如果在治疗前从按常规方式通过活组织检查等方法得到的肿瘤组织分离出肿瘤细胞，然后用药物处理，并根据上述替代性标志的改变确定这种肿瘤细胞是否对该药物敏感，这样就有可能初步预测使用该药物的治疗是否有效，这在临床实践中是十分有用的。重要的是这种替代性标志的改变对于抗肿瘤作用应该是特异性的，并且对这种改变足以进行高灵敏度的检测。更具体地说，定量测定对药物抗肿瘤作用具有特异性的基因表达改变，分析与基因表达改变同时发生的蛋白质量的改变，以及分析与这些改变相关的功能性改变等都可以被用作替代性标志。E7070(N-(3-氯-7-吲哚基)-1，4-苯二磺酰胺)是一种以细胞周期G1期为靶标的，具有抗肿瘤作用的化合物，正在被临床开发研究中(Takashi Owa，Hiroshi Yoshino，Tatsuo Okauchi，KentaroYoshimatsu，Yoichi Ozawa，Naoko Hata Sugi，Takeshi Nagasu，Nozomu Koyanagi and Kyosuke Kitoh，医学化学杂志1999，42，3789-3799)。这种化合物对不同肿瘤细胞生长抑制作用的强度频谱与任何现存的抗癌药剂都不同，预期这种化合物具有作为抗癌药剂的作用，并具有一种新颖的作用机制。为了加速对这种药物的临床开发研究并尽快地建立一种临床治疗方法，以及根据所确定的治疗方法，通过有效地促进治疗来帮助改善病人的QOL，期望发现和应用一种可以被特定地用于该药物给药的替代性标志。在最近几年，已经建立了使用不同的DNA微阵列(microarrays)同时测定大量基因表达水平的方法并广泛地被应用(schena M，shalonD，Davis RW，Brown PO，科学1995，270，467-70；Lockhart，D.J.，Dong H.，Byren M.C.，Follettie M.T.，Gallo M.V.，Chee M.S.，Mittmann M.，Wang C.，Kobayashi，M.，Horton H.，Brown E.L.，自然生物技术，1996，14，1675-1680)。在癌症研究领域，应用此类DNA微阵列的研究也正在积极地进行。例如，在通过使用DNA微阵列的表达分析对扩散性大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)进行的研究中，根据基因表达表观的差异，DLBCL已被分类成二种不同的类型，并且表明，这种分类可指导对预后的推测(Alizadeh AA，Eisen MB，Davis RE，Ma C，Lossos IS，RosenwaldA，Boldrick JC，Sabet H，Tran T，Yu X，Powell Ji，Yang l，MartiGE，Moore T，Hudson J Jr，Lu L，Lewis DB，Tibshirani R，SherlockG，Chan WC，Greiner TC，Weisenburger DD，Armitage JO，WarnkeR，Staudt LM，等，自然，2000，403，503-11)。此外，在一篇报导中通过分析来自美国国家癌症研究所的60种类型癌细胞系的一种镶嵌板(panel)的基因表达表观，对这些细胞系作了重新分类，并且检测了它们的特征(Ross DT，Scherf U，Eisen MB，Perou CM，ReesC，Spellman P，Iyer V，Jeffrey SS，Van de Rijn M，Waltham M，Pergamenschikov A，Lee JC，Lashkari D，Shalon D，Myers TG，Weinstein JN，Botstein D，Brown PO，自然遗传，2000，24，227-35)，另一篇报导论述了这60种类型癌细胞系镶嵌板的基因表达表观的相互关系，以及每个细胞系对不同抗癌药剂的敏感性(Scherf U，Ross Dt，Waltham M，Smith LH，Lee JK，Tanabe L，Kohn KW，Reinhold WC，Myers TG，Andrews DT，Scudiero DA，Eisen MB，Sausville EA，Pommier Y，Botstein D，Brown PO，Weinstein JN，自然遗传，2000，24，236-44)，还有其它报导。并且还有几篇报导，通过类似地使用一种DNA微阵列(部分是使用滤膜的大型阵列)检测了使抗癌药剂对肿瘤细胞起作用时出现的基因表达改变(Rhee CH，Ruan S，Chen S，Chenchik A，Levin VA，YungAW，Fuller GN，Zhang W，肿瘤学报导，1999，6，393-401；Zimmermann J，Erdmann D，Lalande，Grossenbacher R，NooraniM，Furst P，癌基因，2000，19，2913-20；Kudoh K，Ramanna M，Ravatn R，Elkahloun AG，Bittner ML，Meltzer PS，Trent JM，Dalton WS，Chin KV，癌研究，2000，4161-6)。这些报导表明，在比较二个或更多细胞群的特征时，以及在以分子水平综合研究药物治疗等因素引起的细胞生物学改变时，分析基因表达变异是非常有用的。
技术实现思路
本专利技术的目的是，在使E7070及其相关化合物对肿瘤细胞起作用的情况下，为这些化合物的抗肿瘤作用提供替代性标志。本专利技术人借助于DNA微阵列法，分析了在使E7070及其相关化合物作用于对这些抗癌药剂敏感的肿瘤细胞时引起的基因表达改变，并发现了由这些抗癌药剂共同引起的基因表达改变。进而他们还发现，在这些基因中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种试验肿瘤细胞对于抗癌药剂敏感性的方法，它包括：１）测定肿瘤细胞中选自列举于表３和表４中的一种或多种基因的表达水平，该肿瘤细胞是从以如下通式（Ⅰ）表示的抗癌药剂治疗的癌症病人采集的：＊＊＊（Ⅰ）其中Ａ代表单环或双环芳香族环，它可被取代，Ｂ代表６元不饱和烃环，或者是含有１个氮原子作为杂原子的６元不饱和杂环，此二种环都可被取代，Ｃ代表含有１个或２个氮原子的５元杂环，它可被取代，Ｗ代表一个单键或－ＣＨ＝ＣＨ－，Ｘ代表－Ｎ（Ｒ↑［１］）－或氧原子，Ｙ代表碳原子或氮原子，Ｚ代表－Ｎ（Ｒ↑［２］）－或氮原子，以及Ｒ↑［１］和Ｒ↑［２］可以相同或者不同，各代表一个氢原子或低级烷基，以及２）与用该抗癌药剂治疗前从癌症病人采集的肿瘤细胞中基因的表达水平相比较，当列举于表３中的一种或多种基因的表达水平提高时，或者当列举于表４中的一种或多种基因的表达水平降低时，可确定该肿瘤细胞对此抗癌药剂是敏感的，条件是所述一种或多种基因不包含线粒体ＮＡＤ（Ｐ）↑［＋］依赖性苹果酸酶。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：大和隆志，横井晃，黑光淳郎，河合隆利，加藤弘之，长洲毅志，
申请(专利权)人：卫材RD管理有限公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]