基于单链抗体融合蛋白的夹心抗体芯片检测系统的构建方法技术方案

本发明专利技术公开了一种基于单链抗体融合蛋白的夹心抗体芯片检测系统的构建方法。本发明专利技术首先是单链抗融合蛋白Ｚ１８６－Ｌ－ＳＢＰ和Ｚ１６３－Ｌ－ＳＢＰ表达载体的构建，设计上下游引物，双链两端分别为ＮｏｔＩ和ＢａｍＨＩ限制性酶切位点，连接产物；其次是单链抗体融合蛋白Ｚ１６３－Ｆｃ表达载体的构建。通过夹心ＥＬＩＳＡ方法筛选用于夹心抗体芯片配对的单链抗体融合蛋白，并在此基础上建立了特异性和灵敏度更高的夹心抗体芯片检测系统，该系统的模式不仅适合朊病毒的检测，还适用于其他疾病的病原检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因融合和蛋白芯片
，更具体地涉及一种，采用基因融合技术构建单链抗体融合蛋白用于夹心抗体芯片；建立两种基于单链抗体融合蛋白的夹心抗体芯片检测系统。该系统的模式不仅可用于朊病毒的检测，还适用于其他疾病的病原检测，该模式在病原检测领域具有很好的应用价值。
技术介绍
将抗体分子片段与其它蛋白融合，可以得到具有抗体活性和其它生物活性或功能的抗体融合蛋白，抗体融合蛋白能改善免疫分析、免疫治疗和抗体纯化。抗体融合蛋白的构建形式主要有两种，即根据其抗体的可变片段和恒定片段的两大功能进行分别利用，使抗体融合蛋白具有抗体的某项特性，形成两大类抗体融合蛋白。一类是将功能蛋白和抗体的可变片段融合，另一类是将功能蛋白和抗体的恒定片段融合。以前的抗体融合蛋白的构建是采用化学交联的方法，但这样的抗体交联蛋白组成不均一，性能不稳定，分子大，穿透能力低，免疫源性大。随着基因工程和基因工程抗体技术的迅速发展，特别是90年代以来噬菌体抗体技术的发展，不仅使抗体片段的筛选和制备越来越方便，而且由于基因工程抗体片段的分子小、功能强、稳定性高、易于基因融合的特点，抗体融合蛋白的构建也越来越方便。采用基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于单链抗体融合蛋白的夹心抗体芯片检测系统的构建方法，该系统包括下列步骤：Ａ、构建三种单链抗体融合蛋白Ｚ１６３－Ｌ－ＳＢＰ、Ｚ１８６－Ｌ－ＳＢＰ和Ｚ１６３－Ｆｃ：首先是单链抗体融合蛋白Ｚ１６３－Ｌ－ＳＢＰ和Ｚ１８６－Ｌ－ＳＢＰ表 达载体的构建，利用上游引物ＳＢＰ１５’ＡＴＡＴＡＧＣＧＧＣＣＧＣＴＴＣＧＡＧＣＴＣＡＧＧＡＧ３’和下游引物ＳＢＰ２　５’ＴＧＡＣＣＧＧＡＴＣＣＴＧＧＴＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＣＴＴ３’扩增Ｎ端带Ｌｉｎｋｅｒ的ＳＢＰ片段，双链两端分别为Ｎｏｔ Ｉ和ＢａｍＨＩ限制性酶切位点，然后双链序列与经ＮｏｔＩ和ＢａｍＨＩ双酶切的线性化质粒ｐＯＰＥ１０１－２１５片...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张先恩，张吉斌，周亚凤，毕利军，张治平，汪世华，陈媛媛，郭永超，文继开，喻子牛，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]