一种抗CD20单链抗体的植物种子表达系统技术方案

本发明专利技术公开了一种抗CD20单链抗体的植物种子表达系统，它是按VL-VH-Linker-hIgG1Fc顺序，在基因的5’端有编码大麦α-Amylase信号肽序列的核苷酸序列，设计并人工合成了抗CD20单链抗体基因，将基因插入植物种子特异表达载体p1301b中，通过农杆菌介导法转化植株；将带有种子特异性启动子，抗CD20单链抗体基因和终止子的表达框整合进植物基因组中；筛选和培养出了带有上述基因的植株，进一步通过筛选和扩繁得到了纯合植株，该纯合植株所产生的种子中含有所述的抗CD20单链抗体；重组蛋白定向表达在液泡内；表达的抗CD20单链抗体具有生物学活性，对Daudi细胞的ADCC杀伤能力与Rituxan无显著差异。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属基因工程
，具体涉及抗CD20单链抗体基因及利用植物种子特异性表达启动子在植物种子中高效表达抗CD20单链抗体的方法。
技术介绍
    根据《2012中国肿瘤登记年报》显示，目前我国每年新发癌症病例约312万，因癌症死亡超过200万。恶性肿瘤已经成为我们城乡居民的第一位死亡原因。非霍奇金氏淋巴瘤（Non Hodgkin’s lymphoma, NHL）是最常见的淋巴系统恶性肿瘤，其中绝大多数为B细胞淋巴瘤。CD20抗原是一种B细胞分化抗原，位于B细胞的表面，仅存在于成熟B细胞和B细胞前体中，在正常组织中不表达，而在95%以上的B细胞淋巴瘤中均有过量表达。这也使CD20成为了治疗B细胞淋巴瘤的一个理想靶点。Rituxan（Rituximab，美罗华）为美国罗氏公司产品，是一种人鼠嵌合抗体。Rituxan于1997年获得FDA批准上市，是第一个被批准用于治疗恶性肿瘤的单克隆抗体。目前用于治疗低恶度、滤泡型B细胞淋巴瘤。 随着对Rituxan治疗其他一些自身免疫性疾病研究的深入，Rituxa本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗CD20单链抗体基因，它包括：轻链可变区‑重链可变区‑连接肽‑人免疫球蛋白G的Fc片段，并且在其5’端加入了编码大麦α‑Amylase的信号肽序列。

【技术特征摘要】
1.抗CD20单链抗体基因，它包括：轻链可变区-重链可变区-连接肽-人免疫球蛋白G的Fc片段，并且在其5’端加入了编码大麦α-Amylase的信号肽序列。
2.根据权利要求1所述的抗CD20单链抗体基因，其特征在于：它的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种植物表达载体质粒，它是在植物表达载体中插入了权利要求1所述的抗CD20单链抗体基因。
4.根据权利要求3所述的一种植物表达载体质粒，其特征在于：所述的植物表达载体为植物种子特异表达载体p1301b。
5.根据权利要求4所述的一种植物表达载体质粒，其特征在于：所述的植物种子特异表达载体p1301b，是由下述方法构建的：人工合成了β-phaseolin的启动子和终止子序列，并在启动子两端分别添加Xho I和Nco I酶切位点，在终止子两端分别添加Hind III和Kpn I...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜潮，李校堃，王德仲，李海燕，刘秀明，姚娜，金立波，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22