抗前胃泌素单克隆抗体制造技术

本发明专利技术提供特异于前胃泌素的前胃泌素结合分子，其不结合胃泌素－１７（Ｇ１７）、胃泌素－３４（Ｇ３４）、甘氨酸延伸型胃泌素－１７（Ｇ１７－Ｇｌｙ）、或甘氨酸延伸型胃泌素－３４（Ｇ３４－Ｇｌｙ）。本发明专利技术还提供对胃泌素前体分子（前胃泌素）的Ｎ端和Ｃ端序列具有特异性的单克隆抗体（ＭＡｂ）以及产生这些ＭＡｂ的杂交瘤。还提供ＭＡｂ组，其用于在免疫检测和定量测定法中对前胃泌素和胃泌素激素类型进行检测和定量。这些测定法可用于诊断和监测胃泌素促发的疾病或病症或用于监测治疗过程中的进展。本发明专利技术还提供固相测定法，包括免疫组织化学（ＩＨＣ）和免疫荧光（ＩＦ）法，其适于检测和显示固体样品如活检样品或组织切片中的胃泌素类型。前胃泌素结合分子在治疗上可用于在前胃泌素促发的疾病或病症中针对前胃泌素进行被动免疫。还提供代用参照标准品（ＳＲＳ）分子，其是约１０个至约３５个氨基酸的肽链，所述ＳＲＳ分子包含至少两个存在于超过约５０个氨基酸的目的蛋白中的表位。此类ＳＲＳ分子可用作标准品以替代真正的目的蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及针对动物(尤其是人)体内的胃泌素激素前体(即前胃泌素(progastrin))的特定部位的抗体。本专利技术还进一步涉及这些单克隆抗体(MAb)在检测、诊断和监测胃泌素促发的疾病和病症方面的应用，以及使用本专利技术中的MAb对胃泌素促发的疾病和病症进行预防和治疗的方法。本专利技术还涉及代用品分子及其作为参照标准品在免疫测定，特别是用于肽激素的免疫测定中的用途。
技术介绍
人的前胃泌素原(preprogastrin)是一种具有101个氨基酸的肽，其是胃泌素基因的最初翻译产物，具有以下结构MQRLCVYVLI FALALAAFSE ASWKPRSQQP DAPLGTGANR DLELPWLEQQGPASHHRRQL GPQGPPHLVA DPSKKQGPWL EEEEEAYGWM DFGRRSAEDE N(SEQ ID NO1)。前胃泌素是通过自前胃泌素原裂解掉最前面的21氨基酸(构成信号肽)而形成的。80个氨基酸长的前胃泌素链经裂解和修饰酶的进一步加工而成为数个具有生物学活性的胃泌素激素形式，包括胃泌素-17(G17)、胃泌素-34(G34)、甘氨酸延伸型胃泌素-17(G17-Gly)、和甘氨酸延伸型胃泌素-34(G34-Gly)。成熟G17的氨基端和羧基端残基均经过修饰N-末端的谷氨酸被环化形成焦谷氨酸(pGlu)，而C-末端苯丙氨酸残基的游离羧基被肽基α-酰胺化单氧化酶(PAM)酰胺化形成C-末端Phe-NH2。成熟G34的C-末端被同样酰胺化形成C-末端Phe-NH2(见Dockray et al.，Ann.Rev.Physiol.(2001)63119-139)。人类“小”胃泌素的主要形式--成熟G17的氨基酸序列为pEGPWLEEEEEAYGWMDF-NH2(SEQ ID NO2)。在健康人体中发现的次要形式的“小”胃泌素G17-Gly是一种未加工完全的胃泌素，其氨基酸序列为pEGPWLEEEEEAYGWMDFG(SEQ ID NO3)。人类“大”胃泌素的主要形式--胃泌素-34的氨基酸序列为pELGPQGPPHLVADPSKKEGPWLEEEEEAYGWMDF-NH2(SEQ ID NO4)。甘氨酸延伸型胃泌素34(G34-Gly)具有C-末端甘氨酸残基，且其氨基酸序列为pELGPQGPPHLVADPSKKEGPWLEEEEEAYGWMDFG(SEQ ID NO5)。胃泌素由胃幽门窦-G细胞在胃泌素释放肽(GRP)的作用下分泌，受胃酸和几种多肽类激素(最主要的是生长激素抑制素)的旁分泌作用的抑制。人们很早已发现胃泌素肽能刺激健康人体胃的胃酸分泌，但是，直到最近才发现这些肽还控制着胃肠(GI)系统不同类型细胞的增殖、分化和成熟。前胃泌素通常被完全加工成胃泌素激素形式。当过量产生时，前胃泌素至少部分被加工成一或多种胃泌素激素，它们作用于胃肠道系统并可能促进形成胃泌素促发的肿瘤。在某些情况下，前胃泌素循环于血液中，并可在患有前胃泌素促发的疾病或病症的患者的尿中检测到。除在胃肠(GI)系统的局部作用外，G17、G17-Gly(更少些)，还被释放入血液中，并被发现在罹患胃肠道疾病(如胃癌、结肠直肠癌和胰腺癌)的患者的血清中有所增加。最近还发现这几种类型的胃泌素与其它与胃肠道无关的疾病相关，包括小细胞肺癌(SCLC)和肝转移瘤。实例参见“Gastrin and Colon Cancera unifying hypothesis”S.N.Joshi et al.，Digestive Diseases(1996)14334-344；和“Gastrin and Colorectal Cancer”Smith，A.M.and Watson，S.A.(2000)Alimentary Pharmacology andTherapeutics 14(10)1231-1247。抗体是医学、兽医学和其它领域所用的许多测定技术中的关键试剂。这类测试包括许多常规使用的免疫测定技术，例如酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射性免疫测定(RIA)、免疫组织化学(IHC)和免疫荧光(IF)测定法。抗胃泌素多克隆抗体已被证明可抑制胃泌素的活性(“Inhibition ofgastrin activity by incubation with antibodies to the C-terminal tetrapeptide ofgastrin”Jaffe et al.，Surgery(1969)65(4)633-639)，而且非人类抗胃泌素多克隆抗体已被用于治疗罹患Zollinger-Ellison综合征(在无进食刺激的情况下胃泌素过度分泌)的患者。见Hughes et al.，“Therapy with GastrinAntibody in the Zollinger-Ellison Syndrome”Hughes et al.，DigestiveDiseases(1976)21(3)201-204。但是，这些兔抗胃泌素抗体“最多能对患者起到短期治疗作用。”(Hughes，204页)。美国专利5,886,128和5,785,970揭示了一种通过使用胃泌素激素肽缀合物免疫对生长依赖于胃泌素激素或受胃泌素激素刺激的溃疡或肿瘤进行治疗的方法。直到现在，还未能获得能够自加工形式的胃泌素激素中灵敏检测出和准确分辨出前胃泌素的单克隆抗体(MAb)。而且，直至本专利技术为止，还无法准确测量生物学液体样品(例如生物学液体样品)中前胃泌素的含量。本专利技术的Mab可用于进行临床检验测定以准确地说明正常和患病情况下的前胃泌素的生物学。本专利技术中的单克隆抗体还能提供药学单克隆抗体成分以及预防和治疗胃泌素相关疾病和病症的方法。本专利技术还提供MAb组合物的制药用途以及用于预防和治疗前胃泌素促发的疾病和病症的方法。
技术实现思路
本专利技术提供前胃泌素结合分子，其选择性结合前胃泌素，其中所述分子不结合胃泌素-17(G17)、胃泌素-34(G34)、甘氨酸延伸型胃泌素-17(G17-Gly)、或甘氨酸延伸型胃泌素-34(G34-Gly)。所述前胃泌素结合分子可以是抗体分子，例如单克隆抗体、抗体结合区域、或单链抗体。在一个方面，本专利技术提供单克隆抗体(MAb)，其选择性地与前胃泌素结合于前胃泌素的氨基酸序列的1-9位内的表位，即SWKPRSQQP(SEQ ID NO6)。本专利技术还提供产生MAb的杂交瘤，所述MAb选择性地与前胃泌素结合于前胃泌素的氨基酸序列的1-9位内的表位，即SWKPRSQQP(SEQ ID NO6)。在另一个方面，本专利技术提供MAb，其选择性地与前胃泌素结合于氨基酸序列的6-14位内的表位，即SQQPDAPLG(SEQ ID NO7)。本专利技术还提供产生MAb的杂交瘤，所述MAb选择性地与前胃泌素结合于氨基酸序列的6-14位内的表位，即SQQPDAPLG(SEQ ID NO7)。在另一个方面，本专利技术提供MAb，其选择性地与前胃泌素结合于前胃泌素的氨基酸序列的72-80位内的表位，即GRRSAEDEN(SEQ IDNO8)。本专利技术还提供产生MAb的杂交瘤，所述MAb选择性地与前胃泌素结合于氨基酸序列的72-80位内的表位，即GRRSAEDEN(SEQ IDNO本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种前胃泌素结合分子，其选择性结合前胃泌素，其中所述分子不结合胃泌素－１７（Ｇ１７）、胃泌素－３４（Ｇ３４）、甘氨酸延伸型胃泌素－１７（Ｇ１７－Ｇｌｙ）、或甘氨酸延伸型胃泌素－３４（Ｇ３４－Ｇｌｙ）。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬格兰姆斯，
申请(专利权)人：受体生物技术公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]