缩胆囊素-B/胃泌素受体的免疫原性组合物以及治疗肿瘤的方法技术

本发明专利技术涉及用于治疗胃泌素依赖性肿瘤的免疫原、免疫原性组合物以及方法。免疫原包含与间隔臂以及免疫原性载体偶联的来自ＣＣＫ－Ｂ／胃泌素受体的肽。免疫原能在体内诱导出抗体，该抗体与肿瘤细胞中的ＣＣＫ－Ｂ／胃泌素受体结合，从而阻止刺激生长的肽激素与受体结合，并抑制了肿瘤细胞生长。免疫原还包含用于被动免疫的针对ＣＣＫ－Ｂ／胃泌素受体的抗体。本发明专利技术还涉及用本发明专利技术抗体来检测在体内或来自组织活检的胃泌素依赖性肿瘤的诊断方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
激素胃泌素通过其5′羧基末端的氨基酸与胃泌素/缩胆囊素(CCK)-B受体以高亲和力结合。CCK-B/胃泌素受体是一种细胞质膜蛋白，它通过G蛋白与细胞内信号转导通道相连，进而再来控制各种基因的表达。胃泌素是一种肽激素，其以两种形式存在，三十四胃泌素(G34)和十七胃泌素(G17)，由位于胃窦处的专一化细胞G细胞合成和分泌。激素分泌到循环血液中并与胃中的特异性细胞(即间接或直接影响胃酸产生的肠嗜铬样(ECL)细胞和壁细胞)结合。在组织学上，已将胃泌素激素与胃酸分泌的刺激相关联(Edkins，J.S.1905)。(本文引用的全部文献的全部引证见权利要求前的参考文献部分。)在最近几年，越来越多的证据表明，胃泌素可能在肠胃道内作为一种营养因子(Johnson，L.1997)起作用，且它会促进肠胃道癌(Watson等人，1989，Dickinson，C.J.1995)以及非肠胃道癌(包括小细胞肺瘤)(Rehfeld等人，1989)的生长。在胃泌素的翻译后加工时，它是“成熟的”羧基酰胺化形式，其通过羧基末端结合胃泌素/CCK-B受体(Kopin等人，1992)。已经表明，几种肿瘤(例如结肠直肠、胃、胰和肝细胞腺癌)在其质膜上具有CCK-B/胃泌素受体，并且以高度细胞增殖对胃泌素反应(Rehfeld，J.F.1972，Upp等人，1989和Watson等人，1993)。另外，更近时期，发现这些癌细胞有许多也分泌胃泌素，因此影响了自主增殖通道(Van-Solinge等人，1993，Nemeth等人，1993和Seva等人，1994)。CCK-B/胃泌素受体属于G蛋白偶联受体家族，具有7个跨膜结构域，对CCK和胃泌素的亲和力相同(Soll等人，1984)。该受体命名为CCK-B型受体，因为它主要见于脑中(Wank等人，1992)。随后发现该受体与胃壁细胞和ECL细胞中的外周CCK/胃泌素受体相同(Nakata等人，1992)。已经在许多正常组织(Fourmy等人，1984，Grider等人，1990)和肿瘤组织(Singh等人，1990，Watson等人，1993)中明确鉴定出该受体，并用大鼠胰腺癌细胞系AR42J作了深入的研究(Scemama等人，1987)。AR42J CCK-B/胃泌素受体的cDNA已经被克隆和测序，其与大鼠和人脑中的CCK-B/胃泌素受体的DNA序列同源性大于90％，与犬壁细胞CCK-B/胃泌素受体cDNA的序列同源性大于84％(Wank，S.A.1995)，这证明即使在物种之间的序列同源性也很高。肽激素G17和G34结合正常细胞细胞膜上的CCK-B/胃泌素受体。然而，已经发现，G17(不是G34)刺激了胃泌素依赖性癌细胞的生长。尤其是血清伴随的G17，它具有以受肿瘤细胞中CCK-B/胃泌素受体介导的内分泌方式(Watson等人，1993)刺激结肠直肠肿瘤生长的潜在能力。胃泌素-17看来特别涉及刺激结肠直肠腺癌的生长，这可能是由于它对肿瘤细胞上的CCK-B/胃泌素受体的亲和力高于其它胃泌素激素种类(Rehfeld1972和1993)。发现CCK-B/胃泌素受体在56.7％的人原代结肠直肠肿瘤上以高亲和力形式表达(Upp等人，1989)。已经假设由于这些肿瘤内源性产生胃泌素前体肽，可能也存在潜在的自分泌环(Van-Solinge等人，1993和Nemeth等人，1993)。所得G17配体/受体复合物通过调节细胞功能的第二信使刺激细胞生长(Ullrich等人，1990)。G17和CCK-B/胃泌素受体的结合导致激活磷脂酰肌醇分解、激活蛋白激酶C，从而导致细胞内钙离子浓度增加和通过促分裂素激活蛋白激酶诱导c-fos和c-jun基因(这已经涉及细胞增殖的调节)(Tadisco等人，1995)。另外，胃泌素与CCK-B/胃泌素受体的结合还伴随了随后酪氨酸激酶pp125FADK(粘着斑激酶，它在促有丝分裂信号传递中也起作用)的磷酸化增加(Tanaguchi等人，1994)。在许多实验性肠胃癌中，已经从体外和体内治疗上评价了许多高亲和力CCK-B/胃泌素受体拮抗剂。例如，丙谷胺，一种谷氨酸衍生物(Seva等人，190；Harrison等人，1990和Watson等人，1991a)；苯唑普(Benzotript)，一种色氨酸的N酰基衍生物；L-365，260，一种阿斯普西林(Aspercillin)的衍生物(Bock等人，1989)，以及CI-988，一种模拟CCK C端五肽序列的分子(Hughes等人，1990)，这些分子已表明可有效中和外源性胃泌素对体外和体内肠胃肿瘤生长的作用(Watson等人和Romani等人，1994)。然而，这些拮抗剂有严重的毒副作用，并缺乏特异性，因为它们封闭正常细胞中受体(如G34和CCK)的所有潜在配体的作用。最近，还描述了高效选择性CCKB/胃泌素受体拮抗剂如YM022(Yuki等人，1997)和YF476(Takinami等人，1997)。丙谷胺和苯唑普已经在临床前研究中作了广泛评价。这些化合物的主要问题是它们缺乏潜力，代替G17所需的浓度相对较高(Watson等人，1992a；Watson等人，1992b)。尽管如此，丙谷胺和苯唑普还是抑制了许多细胞系的基础性增殖和胃泌素刺激的增殖(Seva等人，1990；Watson等人，1991a)。另外，丙谷胺还增加了携带胃泌素敏感性小鼠结肠肿瘤MC26的异种移植小鼠的存活，从对照动物的25天到受治疗动物的39天。由于此类针对胃泌素/CCKB受体的胃泌素拮抗剂的特异性很低，因此，用胃泌素拮抗剂可能不能有效地控制肿瘤生长的抑制。另外，识别并结合胃泌素的细胞受体并不结合所有的测试抑制物(Seva等人，1994)。因此，如果在自分泌生长级联反应中不能完全抑制胃泌素与受体的结合，那么胃泌素拮抗剂可能就不能阻断促进肿瘤生长的这一机制。专利技术概述本专利技术提供治疗胃泌素依赖性肿瘤的免疫原性组合物和免疫方法。该方法包括用抗CCK-B/胃泌素受体免疫原或抗CCK-B/胃泌素受体抗体主动或被动免疫患者。该免疫原产生的抗体对肿瘤细胞上的CCK-B/胃泌素受体有特异性，并且阻断了胃泌素对受体的生长促进效应。该抗体阻止了肽激素与胃泌素依赖性肿瘤细胞上的CCK-B/胃泌素受体的结合；因此，肿瘤生长停滞。另外，令人惊奇的是，对该受体NH2-末端有特异性的抗体在结合受体时被内化并迅速转座到肿瘤细胞的细胞质中和细胞核中。该内化作用可发生于早至细胞接触抗体后10秒时。抗体/受体复合物的迅速内化接着引起受影响的肿瘤细胞经历凋亡或自杀。本专利技术的免疫原包含从人CCK-B/胃泌素受体衍生获得的天然的或合成的肽，作为免疫原的免疫模拟(immunomimic)部分。此免疫原还可包含与免疫模拟肽一个末端相连的间隔臂肽序列。免疫原还可与蛋白载体，如白喉类毒素、破伤风类毒素、牛血清白蛋白等偶联。在一个实例中，针对CCK-B/胃泌素受体的免疫接种方法包括主动免疫，其中用本专利技术的免疫原免疫患者。该免疫原刺激产生针对肿瘤细胞上CCK-B/胃泌素受体的抗体。抗CCK-B/胃泌素受体免疫原产生的抗体结合肿瘤细胞上的CCK-B/胃泌素受体并有效地阻止肽激素与受体结合，从而抑制了肿本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫原，它包含与免疫原性载体偶联的来自ＣＣＫ－Ｂ／胃泌素受体的肽。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：D米凯利，M卡普林，SA沃森，S格兰姆斯，
申请(专利权)人：埃弗顿有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]