本发明专利技术为一种人ＡＤ７Ｃ－ＮＴＰ抗原决定簇多肽、抗体及其在诊断试剂盒上的应用。本发明专利技术的ＡＤ７Ｃ－ＮＴＰ抗原决定簇多肽，为序列表ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１至ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．６所述的多肽片段之一。本发明专利技术的ＡＤ７Ｃ－ＮＴＰ抗体，是由本发明专利技术的任一种ＡＤ７Ｃ－ＮＴＰ抗原决定簇多肽制备而成。本发明专利技术的ＡＤ７Ｃ－ＮＴＰ抗体可应用于制备ＡＤ７Ｃ－ＮＴＰ体外诊断试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及人AD7C-NTP抗原决定簇多肽、相应的抗体及其在制 备人AD7C-NTP体外诊断试剂盒上的应用。技术背景在人口老龄化日益加剧的今天，以神经退行性变为主要特征的老 年病的发病率呈现逐年上升趋势。在我国老龄化问题尤为严峻，2006 年2月23日，全国老龄办在发布的《中国人口老龄化发展趋势预测 研究报告》中指出，中国已于1999年进入老龄社会。许多发达国家 65岁以上人口比重由5%上升到7%—般要经历50-80年，而我国从 1982年的4. 9%上升到2000年的7. 2%只用了 18年，说明我国人口 老龄化速度远超过发达国家。第五次全国人口普查结果表明，目前我 国65岁以上人口为8811万人，占全国总人口的6.96%; 60岁以上人 口已经达到1.43亿，占总人口的10.97%;在2010年后我国50、 60 年代高生育期出生的人将陆续进入老年，届时人口老龄化的发展更为 迅速，预计2015年老年人口将达到2.02亿，2027年将超过3亿， 从2040年起，中国60岁以上的人口将达到3.97亿，还将有1亿80 岁以上的老人，比目前全球80岁以上的老人总数还多。2044年前后 可能突破4亿，老年人的数量居世界之首。人口老龄化是我国乃至世界各国在二十一世纪将面临最大的挑战。神经退行性疾病是由于神经元进行性变性、死亡导致的、以中枢 神经系统损害为主的神经系统疾病，严重危害人类身体健康，但其病 因不清，发病机理复杂，缺乏有效的治疗措施。引起神经退行性变的 原因很多，如遗传性疾病、代谢性疾病、血管性疾病及某些原因不明 的疾病，其致命危害就是造成神经元的不可逆损伤。除人们熟知的老年性痴呆(Alzheimer' s disease,以下简称AD)、帕金森氏病 (Parkinson' s disease,简称PD)等，在人群中发病率日趋增高、 且发病年龄日趋下降的糖尿病晚期并发症，如肾脏微血管病变、视网 膜病变，均以神经退行性变为首发因素。由于神经退行性变病的发病 机理不清，缺乏有效的早期诊断措施，给治疗、护理带来了一系列实 实在在的问题，同时给社会和家庭造成了沉重的经济负担和精神压 力。我国65岁以上老人中痴呆患病率为4%-7%，其中2/3为阿尔茨 海默病(Alzheimer' s Disease, AD,即老年性痴呆，又称早老性痴 呆Alzheimer's dementia),目前约有500万左右的患者，预计到2050 年我国老年痴呆患者将达到2000万人。如果政府和家庭对每一位AD 病人花费的医疗费、护理费和家庭成员的误工费等平均每年1万元， 那么到2050年我国对老年痴呆患者每年将付出2000亿元的费用。如 此之重的经济负担将严重阻碍我国的经济发展，并可能引发社会问 题。故研究神经退行性变发病机理和延缓、阻断其发展的干预手段， 有着至关重要的意义。作为引起老年痴呆最常见的病因，阿尔茨海默病临床上表现为智力水平的慢性削弱及记忆的慢性丢失。随着全球人口的老龄化，AD 发病率也与日俱增，因此，AD的及时诊断与治疗必将越来越受到重视。但是，迄今为止，AD的早期诊断十分困难，原因如下l.需做 脑脊液检査，取材不便；2.虽然脑脊液中磷酸化的Tau蛋白和其它骨 架蛋白增加，但并无特异性，在其它神经系统疾病中也有变化；而 Ae42在AD早期无变化，随病情加重而减少，不便于测定；3.其它 各种蛋白质包括酶的测定对诊断无指导意义。故有关AD早期诊断方 面虽有百余篇报道，但只限于描述性研究，由于缺乏有效的生化指标， 并无实用价值。1992年，麻省总医院的Suzanne de la Monte和Jack Wands博 士首先在AD脑中发现大量的神经丝蛋白(neural thread protein, NTP)与神经元纤维缠结(neuronal fibril tangle, NFT)有关，表明 其在AD的病理改变过程中可能发挥一定作用；1996年，同一研究小 组成功克隆出一种41KDa的、与AD相关的NTP，命名为AD7C-NTP。AD7C-NTP由375个氨基酸组成，分子量41, 718Da，等电点9. 89, 富含丝氨酸(ll. 7%)和脯氨酸(8. 8%)，包括15个氨基酸的信号肽和7 个可能的跨膜区。AD7C-NTP存在于神经细胞发出的轴突中；并且大 量存在于AD患者脑中的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles, NFT)中。AD7C-NTP参与脑神经元的修补与再生，AD患者脑中AD7C-NTP 基因表达水平异常增高。AD7C-NTP现已被确定为诊断AD的生化指标， 在AD患者的脑组织和脑脊液中都选择性升高。最新的研究发现，AD患者尿样或血清中AD7C-NTP水平的检测与CSF(脑脊液)中AD7C-NTP 的检测具有同样的意义。这一无创性的检查更易被病人接受，也易于 在临床上推广。因此，监测脑脊液和尿液、血清中AD7C-NTP水平可作为早期AD 的初筛试验，协助AD或有记忆障碍症状及体征患者的早期临床诊断。而监测AD7C-NTP最理想的方法即是免疫测定，但前提是必须制 备针对AD7C-NTP的特异性抗体，因此寻找合适的具有免疫原性的 AD7C-NTP多肽片段，就成了研究的重点。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于针对AD诊断和治疗的现状，提供具有 免疫原性的AD7C-NTP多肽片段，即提供人AD7C-NTP抗原决定簇多肽。本专利技术的第二个目的在于利用本专利技术的人AD7C-NTP抗原决定簇 多肽制备抗体，提供能与人AD7C-NTP抗原决定簇多肽特异性结合的 抗体。本专利技术的第三个目的在于将本专利技术的人AD7C-NTP抗体应用于制 备人AD7C-NTP体外诊断试剂盒。本专利技术的人AD7C-NTP抗原决定簇多肽，为如下多肽片段之一(1) Asn-Pro-Gly-Ser-Ser-Asp-Ser-Pro-Ala—Ser-Ala-Ser-Pro， 即序列表中SEQ ID NO. 1所述的氨基酸序列；(2) Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn， 即序列表中SEQ ID NO. 2所述的氨基酸序列；本专利技术的多肽片段(1)是人AD7C-NTP蛋白N端的一段13个氨基酸的残基，在该肽段的N端、C端分别加上Tyr则组成多肽片段(3)、 多肽片段(4)，如下(3) Tyr-Asn-Pro-Gly-Ser-Ser-Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro，即序列表中SEQ ID NO. 3所述的氨基酸序列；(4) Asn-Pro-Gly-Ser-Ser-Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Tyr，即序列表中SEQ ID NO. 4所述的氨基酸序列。多肽片段(1)在N端或C端加Tyr是为了通过BDB (双偶氮联 苯胺二氯化物Bis-diazotizedbenzidine dichloride)交联到血兰 蛋白(KLH)上作为抗原制备抗体，Tyr加在N端产生抗多肽C端抗 体，Tyr加在C端，产生抗多肽N端抗体。本专利技术的多肽片段(2)是人AD7C-NTP蛋白C端的一段8个氨基 酸残基，在该肽段的N端、C端分别加上Tyr则组成多肽片段(5)、 多本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人ＡＤ７Ｃ－ＮＴＰ抗原决定簇多肽，为如下两种多肽片段之一： （１）Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ； （２）Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｓｎ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：盛树力，王蓉，姬志娟，朱建安，
申请(专利权)人：首都医科大学宣武医院，深圳市安群生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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