本发明专利技术公开了一种检测唾液中滥用毒品的多联免疫层析试纸条及其制备方法，该试纸条是在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆有彩色胶乳、胶体金或胶体硒微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸而形成的反应膜条，所述包被膜上设有控制区，以及两个或两个以上的检测区，每个检测区包被有相应的毒品抗原，控制区包被抗鼠抗体。它具有操作安全、简便、适合单人／份检测和快速，可以同时对唾液中的毒品抗原进行多种检测等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学检验领域，涉及一种基于免疫层析原理对唾液中毒品进行快速多联检测 的免疫层析试纸条、系统及制备方法。
技术介绍
毒品犯罪是当今国际社会的一大公害。毒品滥用已成全球性的问题，被认为是当今世界 的瘟疫和社会的毒瘤。自改革开放以来，随着国门的打开，国际贩毒集团开始从我国边境进 行毒品渗透活动，90年代呈迅速蔓延之势，成为一个严重的社会问题。且对每种毒品需要单 项检测具有取材难，检测复杂，成本大等缺陷。在毒品的检测中，国内外主要采用免疫层析法、酶联免疫吸附法(ELISA)、 PCR、放射性 免疫等方法对尿液、血液、组织以及毛发等样本进行检测。相比于尿液、血液、组织以及毛发等来源的样本，唾液样本有其不可比拟的有点(1) 尿液样本涉及伦理与隐私，对于采样存在一定的困难和样本的保真性存在怀疑。(2) 血液样本涉及伦理与创伤，对于供样人存在一定的感染风险。(3) 组织和毛发样本前处理的程序负责，检测方法多为ELISA， GC/MS等大型仪器设 备，技术要求更高，不适合现场快速检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于检测唾液中滥用毒品的多联免疫层析试纸条，能发挥彩 色胶乳、胶体金或胶体硒标记层析检测技术快速、简便、操作方便的优点，避免现有尿液中 毒品检测的缺点和不足，从而实现对唾液中毒品快速检测的目的。本专利技术所述的检测唾液中滥用毒品的多联免疫层析试纸条，该试纸条是在底衬上顺次相 互搭接地粘贴样品垫、涂覆彩色胶乳、胶体金或胶体硒微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜 以及吸水纸而形成的反应膜条，所述包被膜上设有控制区，以及两个或两个以上的检测区， 每个检测区包被有相应的毒品抗原，控制区包被抗鼠抗体。本专利技术的另一目的在于提供一种检测唾液滥用毒品的多联免疫层析试纸条的制备方法。本专利技术所述的检测唾液滥用毒品的多联免疫层析试纸条的制备方法，按涂覆在玻璃纤维膜上的微粒的不同，可分为a涂覆彩色胶乳微粒和b涂覆胶体金或胶体硒微粒两种制备方法。 a、当采用彩色胶乳微粒涂覆时，反应膜条的制备包括以下步骤-A. 彩色胶乳的共价活化超声波处理彩色胶乳微球体30秒后，调节浓度为2% 10%彩 色胶乳微球活化浓度为1%， 8000xg离心1 5分钟，离心后收集沉淀物用蒸馏水或者 50mM 200MmpH6.0 7.0磷酸钠溶液溶解至初始体积，并超声波处理30秒；加入一定量的 20 100mg/mlEDC (碳二亚胺)，混匀；室温孵育30分钟后8000xg 、离心1 5分钟，沉淀 用20mM 100mM的pH5.0 6.0的柠檬酸缓冲液溶解至初始体积，放置于2 8i:环境中备 用，以标记蛋白质；B. 每种标记物的制备将上述活化后的彩色胶乳超声波处理30秒后，按照50ug 500ug 毒品-BSA (牛血清白蛋白，bovine serum albumin，)、单克隆抗体或毒品-OVA (卵白蛋白， Ovalbumin, OVA)单克隆抗体/ml活化彩色胶乳的比例加入需标记的单克隆抗体，混匀后室温搅拌反应1.5-3小时，24次离心洗涤，每次8000xg 、离心1 5分钟，沉淀用PBS-TBN (磷 酸盐缓冲液PB，含氯化钠NaCI,吐温Tween-20，牛血清白蛋白BSA，叠氮钠NaN3)溶解并 超声波处理25-35秒，用PBS-TBN恢复至标记前的体积，放置2 8'C备用；C. 涂覆有标记物的玻璃纤维膜的制备将标记的两个或两个以上的毒品抗原的单克隆抗体彩色微球标记物，按照效价试验匹配的结果，以1: 1: 1… 1: 5: 5…比例混和均匀，按照每毫升溶液铺20 60平方厘米涂覆玻璃纤维膜，25"C 4CTC干燥16小时，封袋，板贴备用;D. 包被膜的制备两种或两种以上毒品抗原和抗鼠抗体包被到硝酸纤维素膜上并封闭分别将对应的两种或两种以上毒品抗原和抗鼠lgG用包被缓冲液调节浓度，喷膜液量为 20ul/35cm，用包被缓冲液稀释抗鼠lgG，调节浓度为1.0 3.0mg/ml，用包被缓冲液分别稀 释毒品抗原，调节浓度为0.1 2.5mg/ml，并将两种或两种以上毒品抗原及抗鼠lgG分别喷到 硝酸纤维素膜上对应的检测区和控制区，保持区域之间的间隔均大于或等于3mm，室温凉干 20分钟；25""C 37'C在封闭液浸泡60分钟，取出后置25'C 37。C烘干处理2小时，封袋，得 到包被膜，以备贴板用；E. 在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆彩色胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包 被膜以及吸水纸，得到试纸板，按照要求切割成不同宽度的反应膜条；或(2)当采用胶体金或胶体硒微粒涂覆时，包括以下步骤A.胶体金或胶体硒标记蛋白的制备用0.1M碳酸钾调节胶体金或胶体硒pH值至7.0 8.0，按6 20ug毒品一BSA或毒品-OVA单克隆抗体/m胶体金或胶体硒加入一种毒品单克隆 抗体，混匀后静置，离心处理，弃去上清，将沉淀用标记洗涤液洗涤，将沉淀用十分之一初 始胶体金或胶体硒标记蛋白保存液溶解，置2。C 8。C备涂覆玻璃纤维膜用；试纸条上有多个检测区，要标记对应的多个毒品抗原的单克隆抗体；B. 涂覆有标记物的玻璃纤维膜的制备将制备好的两个或两个以上的胶体金或胶体硒标 记的毒品单克隆抗体根据效价试验匹配的结果，以1: 1: 1…. 15: 5…(省略的分别为 多个的1以及5)比例混和均匀，涂覆在玻璃纤维膜上，涂覆方法是将制备好的胶体金 或胶体硒标记的毒品单克隆抗体均匀的铺在玻璃纤维膜上，每毫升溶液铺8 40平方厘米，25'C 4(TC干燥16小时，封袋，以备板贴用；C. 包被膜的制备用包被膜缓冲液稀释各种毒品抗原和抗鼠lgG至浓度为0.1 2.5mg/ml， 把两种或两种以上毒品抗原和抗鼠lgG喷印在硝酸纤维素膜对应的检测区和控制区上，每个区 域之间的间隔为3-5mm，应细致均匀，凉干后在25'C 37'C封闭液中浸泡40-60分钟，取出 后于25'C 37'C烘干2小时，封袋，得到包被膜，以备贴板用；D.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆胶体金或胶体硒标记的毒品单克隆抗体的玻 璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，得到试纸板，按照要求切割成不同宽度的反应膜条。本专利技术的另一目的是提供一种检测唾液中滥用毒品的多联免疫层析系统。检测唾液中滥 用毒品的多联免疫层析系统包括塑料外壳，放置在塑料外壳中的上述多联免疫层析试纸条以 及唾液预处理试剂。所述唾液预处理试剂为含有(A)氢氧化钠水溶液，浓度为0. 01-10mol/L; (B)酒石酸和/或柠檬酸的水溶液，浓度为0. 01-3mol/L; (C)非离子表面活性剂和/或两性表面活性剂；成分(C)与成分(A)和(B)的至少一个混合，或可以与成分(A)和(B)分别提供，以及在成分(A)、 (B)和(C)的至少一个中含有选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、硫酸镁和硫酸锰的至少一种物质，含量为5-25重量％。本专利技术的检测原理是将不同直径范围0.01 u m 1 ii m的彩色胶乳、胶体金或胶体硒微 粒与含有羧基、氨基、羟基等酯类或其他生物大分子物质的毒品单克隆抗体共价结合，当检 测的唾液样本中含有的毒品浓度大于或等于Cut0ff值时，此彩色胶乳、胶体金或胶体硒标记的毒品单克隆抗体与唾液中足够的相应毒品抗原本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测唾液中滥用毒品的多联免疫层析试纸条，其特征是，该试纸条是在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆有彩色胶乳、胶体金或胶体硒微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸而形成的反应膜条，所述包被膜上设有控制区、以及两个或两个以上的检测区，每个检测区包被有相应的毒品抗原，控制区包被抗鼠抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王继华，
申请(专利权)人：广州万孚生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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