本发明专利技术公开了一种高密度脂蛋白胆固醇分数酯化速率的测定方法，包括ａ）在新鲜全血样本中加入卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性抑制剂；ｂ）加入沉淀剂得到只含有高密度脂蛋白的样品；ｃ）将样品分成两份，一份加入卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性恢复剂，一份不加，同时在３７℃温育１小时；ｄ）利用高效液相色谱分别测定两份样品的高密度脂蛋白游离胆固醇，计算两者之差，差值除以测得的未加入卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性恢复剂的样品高密度脂蛋白游离胆固醇的百分数即为高密度脂蛋白胆固醇分数酯化速率。本发明专利技术公开的方法，具有简单、安全、费用低廉且样品可以贮存的特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于检测领域，更具体地，本专利技术属于一种脂蛋白胆固醇分数酯化 速率的测定方法。
技术介绍
卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)是循环中胆固醇酯化的主要酶，它转移卵 磷脂sn-2位的脂肪酰基至胆固醇，生成胆固醇和溶血卵磷脂，LCAT与高密度 脂蛋白(HDL)结合，故胆固醇酯化主要发生于HDL。 LCAT在HDL代谢和胆 固醇逆转运中发挥重要作用(Glomset JA. The plasma lecithin:cholesterol acyltransferase reaction. J Lipid Res, 1968, 9: 155-167; ， Sviridov D, Nestel P. Dynamics of reverse cholesterol transport: protection against atherosclerosis-Atherosclerosis, 2002, 161: 245-254.)。研究LCAT活性的方法有多种，其中一种 是测定胆固醇酉旨化速率(Pritchard PH. Measurement and clinical significance of lecithin:cholesterol acyltransferase. In: Rifai N, ^A^arnick GR, Dominiczak MH, eds. Handbook of Lipoprotein Testing. 2nd ed. AACC Press: Washington DC, 2000. 507-520)，其原理为血浆(或血清)在适当温度下温育，由于LCAT的作用，血 浆游离胆固醇降低，胆固醇酯等幅升高，游离胆固醇降低或胆固醇酯升高速率 可在一定程度上指示LCAT活性(Pritchard PH. Measurement and clinical significance of lecithin:cholesterol acyltransferase. In: Rifai N, Warnick GR,Dominiczak MH， eds. Handbook of Lipoprotein Testing. 2nd ed. AACC Press: Washington DC, 2000. 507-520.Yen FT, Nishida T. Rapid labeling of lipoproteins in plasma with radioactive cholesterol. Application for measurement of plasma cholesterol esterification. J Lipid Res. 1990 , 31:349-53.)。由于底物(脂蛋白上的游离胆固醇、卵磷脂等)性质等因素，体外胆固醇 酯化速率呈非线性变化，故采用初始酯化速率，如37"C下30min内的游离胆固 醇下降，并认为在此期间游离胆固醇浓度呈线性变化。酯化速率可用单位时间、 单位血桨体积内被酯化的胆固醇摩尔数(摩尔酯化速率，MER)表示(如 pmol/L/h)，也可用单位时间内被酯化胆固醇的百分数(分数酯化速率，FER) 表示(如。/。/h)。由于胆固醇在上述假设的线性范围内的变化很小，准确测定有 困难，故迄今为止胆固醇酯化速率测定几乎都使用少量放射性同位素标记的胆 固醇作示踪齐U ( Pritchard PH. Measurement and clinical significance of lecithin:cholesterol acyltransferase. In: Rifai N, Warnick GR， Dominiczak MH, eds. Handbook of Lipoprotein Testing. 2nd ed. AACC Press: Washington DC, 2000. 507-520; Yen FT, Nishida T. Rapid labeling of lipoproteins in plasma with radioactive cholesterol. Application for measurement of plasma cholesterol esterification. J Lipid Res. 1990 ， 31:349-53; Stokke, K. T., and K. R. Norum.. Determination of lecithin:cholesterol acyltransferase in human blood plasma. 1971, Scand. J. Clin. Lab. Invest. 2E 21-27; Ohta T, Saku K, Takata K， et al. Fractional esterification rate of cholesterol in high density lipoprotein (HDL) can predict the particle size of low density lipoprotein and HDL in patients with coronary heartdisease. Atherosclerosis, 1997, 135: 205-212; Dobiasova M, Stribrna J， Sparks DL, et al. Cholesterol esterification rates in very low density lipoprotein- and low density lipoprotein-depleted plasma: relation to high density lipoprotein subspecies, sex, hyperlipidemia， and coronary artery disease. Arterioscler Thromb， 1991， 11: 64-70。) 测定过程一般是先将血浆样品与少量放射性同位素标记的胆固醇在低温下温 育，使放射性胆固醇与内源胆固醇平衡，再在较高温度(37°C)下温育一定时 间(一般30或60 min)，提取脂类物质，用薄层色谱分离胆固醇和胆固醇酯， 测定放射性在胆固醇和胆固醇酯中的分布，计算酯化速率。由于测定结果受样品中各种脂蛋白浓度和性质的影响，显然上述方法不能 测定真正LCAT活性水平。理论上，LCAT只酯化HDL上的胆固醇，分布在其 他脂蛋白上的放射性胆固醇与LCAT接触的机会与HDL上的放射性胆固醇会有 不同，血浆胆固醇水平不同，放射性胆固醇与内源性胆固醇的比例也会不同， 因此由此法测定的无论MER或FER都会出现偏差。此法己出现多年，除在有 关研究中由若干应用外，其临床应用可能仅限于不同LCAT缺乏疾病的鉴别诊 断(Pritchard PH. Measurement and clinical significance of lecithin:cholesterol acyltransferase. In: Rifai N， W本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高密度脂蛋白胆固醇分数酯化速率的测定方法，包括以下步骤：ａ）在新鲜全血样本中加入卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性抑制剂；ｂ）加入沉淀剂得到只含有高密度脂蛋白的样品；ｃ）将样品分成两份，一份加入卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性恢复剂，一份不加，同时在３７℃温育１小时；ｄ）利用高效液相色谱分别测定两份样品的高密度脂蛋白游离胆固醇，计算两者之差，差值除以测得的未加入卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性恢复剂的样品高密度脂蛋白游离胆固醇的百分数即为高密度脂蛋白胆固醇分数酯化速率。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈文祥，董军，彭涛，王抒，国汉邦，李红霞，满永，
申请(专利权)人：卫生部北京医院，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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