结合至CD38和CD3的双特异性抗体制造技术

本发明专利技术涉及结合至CD38和CD3的双特异性抗体。本发明专利技术提供异二聚体蛋白质，所述异二聚体蛋白质包括结合至CD38和CD3的异二聚体抗体。本发明专利技术还涉及核酸组合物，包含所述核酸组合物的宿主细胞，制造所述异二聚体抗体的方法以及通过施用所述异二聚体抗体来治疗有需要的患者的方法。

【技术实现步骤摘要】
结合至CD38和CD3的双特异性抗体本申请是申请日为2015年3月30日，申请号为201580016659.9，专利技术名称为“结合至CD38和CD3的双特异性抗体”的专利技术专利的分案申请。相关申请的交叉引用本申请依据35U.S.C.§119要求2014年3月28日提交的美国临时专利申请号61/972,172、2014年7月7日提交的62/025,974及2014年7月17日提交的62/025,931的优先权，这些专利的全部内容在此以引用的方式并入本文中用于所有目的，并且确切地说，用于本文略述的附图、图例及数据。
本专利技术描述了同时共接合抗原的新型免疫球蛋白组合物，其中两种抗原都是单价结合的。所描述的新型免疫球蛋白优选利用异二聚体Fc区。本文还描述了使用所述新型免疫球蛋白组合物，特别是用于治疗目的的方法。专利技术背景基于抗体的治疗剂已经被成功地用于治疗多种疾病，包括癌症和自身免疫性/炎症性病症。不过仍需要针对此类药物进行改良，特别是增强其临床功效。所研究的一种方法是将另外的新型抗原结合位点工程改造至基于抗体的药物中，由此使单一免疫球蛋白分子共接合两种不同的抗原。此类接合两种不同抗原的非天然或替代性抗体形式通常称为双特异性抗体。由于抗体可变区(Fv)相当大的多样性使得有可能产生识别实际上任何分子的Fv，故产生双特异性抗体的典型方法是将新的可变区引入抗体中。已经针对双特异性抗体靶向研究多种替代性抗体形式(Chames&，2009，mAbs1[6]：1-9；Holliger&Hudson，2005，NatureBiotechnology23[9]：1126-1136；及Kontermann，2012MAbs4(2)：182，其全部以引用的方式明确地并入本文中)。起初，通过将分别产生单一单克隆抗体的两个细胞系融合来制备双特异性抗体(Milstein等人，1983，Nature305：537-540)。尽管由此得到的杂交的杂交瘤或四源杂交瘤确实产生了双特异性抗体，但其只是极少的一群，而且需要充分纯化以分离出期望的抗体。针对这一点的工程改造方法是使用抗体片段来产生双特异性抗体。由于这些片段缺乏全长抗体的复杂四级结构，使得可变轻链和重链可以连接于单一基因构建体中。已经产生许多不同形式的抗体片段，包括双功能抗体、串联scFv及Fab2双特异性抗体(Chames&Baty，2009，mAbs1[6]：1-9；Holliger&Hudson，2005，NatureBiotechnology23[9]：1126-1136；以引用的方式明确地并入本文中)。尽管这些形式可以在细菌中高水平表达，并且可能由于尺寸较小而具有有利的渗透益处，但其在体内迅速清除并且可能存在与其产量和稳定性有关的制造难题。造成这些缺点的主要原因是，抗体片段典型地缺乏抗体恒定区及其相关功能特性，包括较大的尺寸、高稳定性，及与各种Fc受体和配体结合以维持较长的血清半衰期(即，新生儿Fc受体FcRn)或用作纯化的结合位点(即，蛋白质A和蛋白质G)。近期的研究尝试通过将双重结合工程改造至类全长抗体形式中来解决基于片段的双特异性抗体的缺点(Wu等人，2007，NatureBiotechnology25[11]：1290-1297；USSN12/477,711；Michaelson等人，2009，mAbs1[2]：128-141；PCT/US2008/074693；Zuo等人，2000，ProteinEngineering13[5]：361-367；USSN09/865，198；Shen等人，2006，JBiolChem281[16]：10706-10714；Lu等人，2005，JBiolChem280[20]：19665-19672；PCT/US2005/025472；及Kontermann，2012MAbs4(2)：182，全部以引用的方式明确地并入本文中)。这些形式主要由于含有Fc区而克服了抗体片段双特异性抗体的一些问题。这些形式的一个重要缺点在于，由于其在同二聚体恒定链的顶部构造抗原结合位点，使得与新抗原的结合通常是二价的。对于在治疗性双特异性抗体形式中作为共同靶标而引起关注的许多抗原来说，期望的结合是单价而非二价的。对于许多免疫受体，细胞活化是通过单价结合相互作用的交联实现。交联机制典型地是由抗体/抗原免疫复合体，或经由效应细胞靶向细胞接合来介导。举例来说，低亲和力Fcγ受体(FcγR)，如FcγRIIa、FcγRIIb及FcγRIIIa单价结合至抗体Fc区。单价结合不能活化表达这些FcγR的细胞；不过，在形成免疫复合体或细胞与细胞接触之后，受体发生交联并且群集在细胞表面上，引起活化。对于负责介导细胞杀伤的受体，例如自然杀伤(NK)细胞上的FcγRIIIa来说，当效应细胞以特别期望的方式接合靶细胞时，发生受体交联和细胞活化(Bowles&Weiner，2005，JImmunolMethods304：88-99，以引用的方式明确地并入本文中)。类似地，在B细胞上，抑制性受体FcγRIIb只有在与细胞表面B细胞受体(BCR)接合成免疫复合体时才下调B细胞活化，这一机制是由可溶性IgG与BCR所识别的抗原形成免疫复合体所介导(Heyman2003，ImmunolLett88[2]：157-161；Smith和Clatworthy，2010，NatureReviewsImmunology10：328-343；以引用的方式明确地并入本文中)。在另一个实施例中，只有在T细胞相关T细胞受体(TCR)以特别期望的细胞-细胞突触方式接合抗原呈递细胞上载有抗原的MHC时，才发生T细胞的CD3活化(Kuhns等人，2006，Immunity24：133-139)。实际上，使用抗CD3抗体进行的CD3非特异性二价交联引起细胞因子风暴和毒性(Perruche等人，2009，JImmunol183[2]：953-61；Chatenoud&Bluestone，2007，NatureReviewsImmunology7：622-632；以引用的方式明确地并入本文中)。因此，对于实际临床应用来说，用于靶细胞重定向杀伤的优选的CD3共接合模式是单价结合，该结合只有在与共接合的靶接合后才引起活化。CD38，又称环腺苷二磷酸核糖水解酶，是具有长C末端细胞外结构域和短N末端细胞质结构域的II型跨膜糖蛋白。在造血细胞中，功能作用的分类被认为是CD38介导的信号传导的结果，包括淋巴细胞增殖、细胞因子释放、B细胞和骨髓细胞发育和存活的调控，以及树突状细胞成熟的诱导。CD38在许多造血系统恶性疾病中以及来源于各种造血系统恶性疾病的细胞系中失调，造血系统恶性疾病包括非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’slymphoma，NHL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’slymphoma，BL)、多发性骨髓瘤(MM)、B慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)、B和T急性礼拜那细胞白血病(ALL)、T细胞淋巴瘤(TCL)、急性骨髓性白血病(AML)、毛细胞白血病(H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种异二聚体抗体，包含：/na) 第一重链，包含：/ni) 第一可变Fc结构域；/nii) 结合CD3的单链Fv区(scFv)；及/nb) 第二重链，包含：/ni) 第二Fc可变Fc结构域；及/nii) 第一可变重链结构域；及/nc) 第一轻链，包含第一可变轻链结构域和第一恒定轻链结构域；/n其中所述第一可变重链结构域和所述第一可变轻链结构域结合至CD38。/n

【技术特征摘要】
20140328 US 61/972172;20140717 US 62/025931;2014071.一种异二聚体抗体，包含：
a)第一重链，包含：
i)第一可变Fc结构域；
ii)结合CD3的单链Fv区(scFv)；及
b)第二重链，包含：
i)第二Fc可变Fc结构域；及
ii)第一可变重链结构域；及
c)第一轻链，包含第一可变轻链结构域和第一恒定轻链结构域；
其中所述第一可变重链结构域和所述第一可变轻链结构域结合至CD38。


2.根据权利要求1所述的异二聚体抗体，其中所述异二聚体抗体是XENP13551，其中所述第一重链、所述第二重链及所述第一轻链具有图20或22中所描绘的序列。


3.根据权利要求1所述的异二聚体抗体，其中所述scFv具有了包含以下的序列：具有序列T-Y-A-M-Xaa1的vhCDR1，其中Xaa1是N、S或H(SEQIDNO:435)；具有序列R-I-R-S-K-Xaa1-N-Xaa2-Y-A-T-Xaa3-Y-Y-A-Xaa4-S-V-K-G的vhCDR2，其中Xaa1是Y或A，Xaa2是N或S，Xaa3是Y或A并且Xaa4是D或A(SEQIDNO:436)；具有序列H-G-N-F-G-Xaa1-S-Y-V-S-W-F-Xaa2-Y的vhCDR3，其中Xaa1是N、D或Q并且Xaa2是A或D(SEQIDNO:437)；具有序列Xaa1-S-S-T-G-A-V-T-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Y-A-N的vlCDR1，其中Xaa1是G、R或K，Xaa2是T或S，Xaa3是S或G并且Xaa4是N或H(SEQIDNO:438)；具有序列Xaa1-T-N-Xaa2-R-A-Xaa3的vlCDR2，其中Xaa1是G或D，Xaa2是K或N，并且Xaa3是P或S(SEQIDNO:439)；及具有序列Xaa1-L-W-Y-S-N-Xaa2-W-V的vlCDR3，其中Xaa1是A或L并且Xaa2是L或H(SEQIDNO:440)。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述scFv选自由H1.30_L1.47、H1.33_L1.47及H1.31_L1.47组成的组。


5.根据权利要求1或3所述的组合物，其中所述抗CD3可变区具有选自由以下组成的组的序列：
a)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
b)包含了具有SEQIDNO:412的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
c)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:414的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
d)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:417的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
e)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:418的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
f)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:421的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
g)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:422的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
h)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:427的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
i)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:428的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
j)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:431的vlCDR3的序列；
k)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
l)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:423的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:432的vlCDR3的序列；
m)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:424的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:432的vlCDR3的序列；
n)包含了具有SEQIDNO:412的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:417的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
o)包含了具有SEQIDNO:412的vhCDR1、具有SEQIDNO:414的vhCDR2、具有SEQIDNO:419的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
p)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:415的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
q)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:415的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
r)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:417的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
s)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:419的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列；
t)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:417的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:433的vlCDR3的序列；
u)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:413的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:433的vlCDR3的序列；及
v)包含了具有SEQIDNO:411的vhCDR1、具有SEQIDNO:434的vhCDR2、具有SEQIDNO:416的vhCDR3、具有SEQIDNO:420的vlCDR1、具有SEQIDNO:425的vlCDR2及具有SEQIDNO:430的vlCDR3的序列。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的异二聚体抗体，其中所述第一可变重链结构域和所述第一可变轻链结构域选自由以下组成的对：H1与L1；H1与L1.24；H1与L1.96；H1.77与L1.96；H1.77与L1.97；H1.72与L1.97；H1.71与L1.96；及H1.77与L1.24。

【专利技术属性】
技术研发人员：MJ伯內特，SY储，G摩尔，J德雅莱斯，
申请(专利权)人：XENCOR公司，
类型：发明
国别省市：美国;US