与OX40L非竞争结合的抗OX40抗体制造技术

本发明专利技术为与OX40L非竞争结合的抗OX40抗体，提供一种能够特异性结合OX40的抗体，所述抗体与OX40配体OX40L为非竞争结合关系，因此与OX40L具有协同激活作用。此外，本发明专利技术提供编码所述抗体的核酸序列，包含所述核酸序列的载体以及用所述载体转化或转染的宿主细胞。更进一步地，本发明专利技术提供所述抗体的制药用途。

【技术实现步骤摘要】
与OX40L非竞争结合的抗OX40抗体
本专利技术涉及抗体药物领域，具体而言，本专利技术涉及一种抗OX40抗体及其用途。
技术介绍
OX40是1型跨膜糖蛋白，近30年前作为一个激活的T细胞表达的细胞表面抗原得到报道。自发现以来，它被证实是T细胞和肿瘤坏死因子受体家族成员的共刺激分子，也称为“肿瘤坏死因子受体超家族成员4”或CD134，基因的名称为TNFRSF4。OX40的分子量为50kD，具有胞质尾、跨膜结构域和胞外区。目前OX40只有一个已知配体，即OX40L(CD252)，其表达在活化的APC细胞上，OX40与其配体的结合会共刺激T细胞增殖和细胞因子的产生。OX40对T细胞的刺激是通过胞浆内细胞信号传导实现的，如NF-κB以及T细胞活化核因子(NFAT)的激活，后者可以提高如survivin、细胞周期蛋白依赖性激酶、Bcl-2抗凋亡分子、细胞因子和细胞因子受体的表达。OX40是长期T细胞免疫的共刺激分子，同时在CD4+T细胞应答和T细胞依赖B细胞增殖分化中起着积极的促进作用。发现OX40在小鼠T细胞表面的表达通常发生在同源抗原识别后的24小时和96小时之间。使用激活性的OX40抗体，直接促进了不同的效应T细胞亚群增加生存。此外，OX40在肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的表达已经有了不同深入的研究，如在乳腺癌、黑色素瘤、淋巴瘤、头颈部肿瘤中。另外发现OX40在结肠癌肿瘤组织中高表达，在肠系膜淋巴结或在浸润性边缘淋巴的OX40的表达与整体生存率相关。正是因为OX40对T细胞具有激活作用，其涉及多种疾病，并可应用于肿瘤免疫治疗及器官移植的抗排异等多个领域。因此，共刺激分子OX40属于下一代目前在肿瘤学早期临床试验中检测的免疫治疗靶点。目前国内外已有一些公司或者机构针对OX40开始了一些研究，包括开发针对该靶点的激动剂，例如小分子及生物大分子抗体的药物开发。几种OX40单克隆抗体目前正在进行早期癌症临床试验。但是，目前的数据显示，此类激动剂大都和OX40L有对OX40结合的竞争关系，因此在此类激动剂激活OX40的同时也失去了天然配体对OX40的激活作用。例如，国际上现有的OX40抗体大都与OX40L竞争性结合OX40，即抗体与OX40的结合位点和OX40L与OX40的结合位点有部分重合，所以当抗体作为激动剂激活了OX40及其下游信号通路时，却失去了OX40L作为天然配体也同时激活OX40的功能。因此，本领域仍然存在对新型抗OX40抗体的需要。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，提供一种新型抗OX40抗体，所述抗体对OX40具有高亲和力，能有效激活OX40蛋白及其下游的信号通路，同时所述抗体与OX40配体OX40L为非竞争结合关系，因此与OX40L具有协同激活作用，从而克服现有抗OX40抗体的不足。针对上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种新型抗OX40抗体或其功能性片段，并基于该新型OX40抗体或片段，提供其用途。本专利技术的技术方案如下：本专利技术的专利技术人以OX40蛋白的胞外区与小鼠IgG2aFC标签构建的融合蛋白作为免疫原，免疫小鼠，利用杂交瘤技术，筛选在分子水平和细胞水平上与OX40亲和力最好的杂交瘤细胞株，利用HT1080-OX40稳转细胞在亲和力高的细胞株里采用ELISA方法筛选激活功能最好的杂交瘤细胞株并测定抗体序列。一方面，本专利技术提供一种能够特异性结合OX40的抗体，所述抗体与OX40的天然配体结合OX40的不同表位。换言之，本专利技术提供的抗体与OX40的天然配体OX40L没有与OX40结合的竞争关系，在结合、进而激活OX40时仍不影响天然配体对OX40的结合、激活作用。检测本专利技术的抗体与OX40的结合，发现本专利技术的抗体以2-15nM、优选4-6nM的亲和力与OX40结合。所述亲和力通过本申请实施例9中所述的BIACORE实验测得。所述抗体包含重(H)链和/或轻(L)链，其中：所述重链在其重链可变区(VH)中包含H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，H-CDR1具有如SEQIDNO:1、4、7或10所示的氨基酸序列，H-CDR2具有如SEQIDNO:2、5、8或11所示的氨基酸序列，H-CDR3具有如SEQIDNO:3、6、9或12所示的氨基酸序列；和/或，所述轻链在其轻链可变区(VL)中包含L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中L-CDR1具有如SEQIDNO:13、16、19或22所示的氨基酸序列，L-CDR2具有如SEQIDNO:14、17、20或23所示的氨基酸序列，L-CDR3具有如SEQIDNO:15、18、21或24所示的氨基酸序列。优选地，关于本专利技术的抗体：所述重链在其重链可变区中包含选自以下的H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3的组合：(1)具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的H-CDR1、具有如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的H-CDR2和具有如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的H-CDR3；(2)具有如SEQIDNO:4所示的氨基酸序列的H-CDR1、具有如SEQIDNO:5所示的氨基酸序列的H-CDR2和具有如SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的H-CDR3；(3)具有如SEQIDNO:7所示的氨基酸序列的H-CDR1、具有如SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的H-CDR2和具有如SEQIDNO:9所示的氨基酸序列的H-CDR3；和(4)具有如SEQIDNO:10所示的氨基酸序列的H-CDR1、具有如SEQIDNO:11所示的氨基酸序列的H-CDR2和具有如SEQIDNO:12所示的氨基酸序列的H-CDR3；和/或所述轻链在其轻链可变区中包含选自以下的L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3的组合：(1)具有如SEQIDNO:13所示的氨基酸序列的L-CDR1、具有如SEQIDNO:14所示的氨基酸序列的L-CDR2和具有如SEQIDNO:15所示的氨基酸序列的L-CDR3；(2)具有如SEQIDNO:16所示的氨基酸序列的L-CDR1、具有如SEQIDNO:17所示的氨基酸序列的L-CDR2和具有如SEQIDNO:18所示的氨基酸序列的L-CDR3；(3)具有如SEQIDNO:19所示的氨基酸序列的L-CDR1、具有如SEQIDNO:20所示的氨基酸序列的L-CDR2和具有如SEQIDNO:21所示的氨基酸序列的L-CDR3；和(4)具有如SEQIDNO:22所示的氨基酸序列的L-CDR1、具有如SEQIDNO:23所示的氨基酸序列的L-CDR2和具有如SEQIDNO:24所示的氨基酸序列的L-CDR3。优选地，所述重链可变区包含如SEQIDNO:25、26、27或28所示的氨基酸序列或者包含与如SEQIDNO:25、26、27或28所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种能够特异性结合OX40的抗体，所述抗体与OX40的天然配体结合OX40的不同表位，所述抗体在其重链可变区和轻链可变区中包含：/n(1)如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的H-CDR1、如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的H-CDR2和如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的H-CDR3；和，如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列的L-CDR1、如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列的L-CDR2和如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列的L-CDR3；/n(2)如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的H-CDR1、如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的H-CDR2和如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的H-CDR3；和，如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列的L-CDR1、如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的L-CDR2和如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列的L-CDR3；或/n(3)如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的H-CDR1、如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列的H-CDR2和如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列的H-CDR3；和，如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的L-CDR1、如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的L-CDR2和如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的L-CDR3。/n...

【技术特征摘要】
1.一种能够特异性结合OX40的抗体，所述抗体与OX40的天然配体结合OX40的不同表位，所述抗体在其重链可变区和轻链可变区中包含：
(1)如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的H-CDR1、如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的H-CDR2和如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的H-CDR3；和，如SEQIDNO:13所示的氨基酸序列的L-CDR1、如SEQIDNO:14所示的氨基酸序列的L-CDR2和如SEQIDNO:15所示的氨基酸序列的L-CDR3；
(2)如SEQIDNO:7所示的氨基酸序列的H-CDR1、如SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的H-CDR2和如SEQIDNO:9所示的氨基酸序列的H-CDR3；和，如SEQIDNO:19所示的氨基酸序列的L-CDR1、如SEQIDNO:20所示的氨基酸序列的L-CDR2和如SEQIDNO:21所示的氨基酸序列的L-CDR3；或
(3)如SEQIDNO:10所示的氨基酸序列的H-CDR1、如SEQIDNO:11所示的氨基酸序列的H-CDR2和如SEQIDNO:12所示的氨基酸序列的H-CDR3；和，如SEQIDNO:22所示的氨基酸序列的L-CDR1、如SEQIDNO:23所示的氨基酸序列的L-CDR2和如SEQIDNO:24所示的氨基酸序列的L-CDR3。


2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体以2-15nM、优选4-6nM的亲和力与OX40结合。


3.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体包含以下重链可变区和轻链可变区的组合：
(1)包含如SEQIDNO:25所示的氨基酸序列或者包含与如SEQIDNO:25所示的氨基酸序列具有75％、优选80％、更优选85％、进一步优选至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和
包含如SEQIDNO:29所示的氨基酸序列或者包含与如SEQIDNO:29所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
(2)包含如SEQIDNO:27所示的氨基酸序列或者包含与如SEQIDNO:27所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和
包含如SEQIDNO:31所示的氨基酸序列或者包含与如SEQIDNO:31所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(3)包含如SEQIDNO:28所示的氨基酸序列或者包含与如SEQIDNO:28所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和
包含如SEQIDNO:32所示的氨基酸序列或者包含与如SEQIDNO:32所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
优选地，所述抗体在其重链中还包含小鼠源重链恒定区；和/或，在其轻链中还包含小鼠源轻链恒定区；
进一步优选地，所述抗体包含以下重链和轻链的组合：
(1)包含如SEQIDNO:33所示的氨基酸序列或者包含与如SEQIDNO:33所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁金鹰，郝锋，贺锋，宁明萱，
申请(专利权)人：康源博创生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11