检测多种恶性肿瘤细胞的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种抗ROR2抗体及其应用。该ROR2抗体具有CSASSSVSYMHWYQ、IYDTSKLAS和CQQWSSNPPTFGAG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTITSYLMHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；或者具有CKASQNVGTNVAWFQ、IYLASYRYS和CQQYNSYPLTFGGG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTFTNYWIQWM、LEWIGEINPSNGRTDYNEKFKNRAT和CANYRPGYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区等。

【技术实现步骤摘要】
检测多种恶性肿瘤细胞的抗体及其应用
本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及检测多种肿瘤细胞的抗体及其应用，具体涉及一种抗ROR2抗体及其应用。
技术介绍
酪氨酸激酶孤儿样受体ROR2是重要的发育相关调节蛋白，在胚胎发育早期，多种组织中均有较高的表达和对组织的增值，分化等具有重要的作用。妊娠中期后，ROR2的表达水平逐渐下降。除了在部分成骨细胞和子宫细胞之外，ROR2在成人组织中基本不表达。而目前研究表明，ROR2在许多肿瘤组织中高表达，包括骨肉瘤，黑色素瘤，结直肠癌和胃癌，乳腺癌，淋巴瘤，白血病等癌症。因此，许多学者认为ROR2是个疾病相关的基因，且可以作为理想的药物靶点。ROR2是一个在胚胎发育过程中大量表达并起重要作用的一个酪氨酸激酶孤儿受体，而在成体大多数的组织中很难检测到，最近几年的研究发现，虽然大多数正常组织不表达ROR2，但是许多恶性肿瘤细胞包括乳腺癌，肺癌，胰腺癌等细胞却高表达ROR2；并且，ROR2表达水平越高的癌细胞，其恶性程度越高，越容易发生转移，复发，预后越差。ROR2通常在分化程度很低的肿瘤细胞上可以检测到，这类肿瘤细胞具有很强的复发和转移能力。然而针对ROR2的药物研发还有待改进。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种抗ROR2抗体及其应用。本专利技术是基于专利技术人的如下研究所发现的：在肿瘤的研究过程中，作为肿瘤干细胞的表面标记物，例如CD133,CD44,CD24,ALDH1等，无论在肿瘤细胞还是在正常的成体组织中都有表达，致使针对这些表面分子开发的抗肿瘤干细胞的药物对正常组织也会造成一定的毒害。而ROR2在肿瘤干细胞也有丰富的表达，但是在正常细胞中却表达较少，因此开发出针对ROR2的治疗性抗体对正常组织的伤害会比较小。所以，ROR2是理想的药物靶点。而针对ROR2所开发出的药物可以用于肿瘤和癌症的治疗中，且对正常组织的损害会比较小。为此，本专利技术的专利技术人通过研究开发了针对ROR2抗原的特异性抗体，利用本申请所提供的抗体能够高特异性的与ROR2抗原结合，从而应用于肿瘤的靶向治疗以及ROR2抗原的特异性诊断和检测。具体而言，本专利技术提供了如下技术方案：根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种抗ROR2抗体或抗原结合片段，包括下列至少之一：(1)具有CSASSSVSYMHWYQ、IYDTSKLAS和CQQWSSNPPTFGAG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTITSYLMHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；(2)具有CKASQNVGTNVAWFQ、IYLASYRYS和CQQYNSYPLTFGGG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTFTNYWIQWM、LEWIGEINPSNGRTDYNEKFKNRAT和CANYRPGYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；(3)具有CSASSSISYMYWYQ、IYDTSILAS和CQQWSSYPFTFGSG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTFTSYLIHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；与(1)～(3)相比，具有至少一个保守氨基酸取代的氨基酸序列。本文提供的抗体或抗原结合片段与ROR2抗原具有高亲和力，在0.0001μg/ml的浓度下，即表现出亲和性，可以用于多种和ROR2抗原相关的检测。而且，能够应用于肿瘤的治疗中，发挥靶向治疗作用。根据本专利技术的实施例，以上所述的抗体或抗原结合片段可以进一步包括如下技术特征：在本专利技术的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段，包括下列至少之一：(a)具有SEQIDNO:1所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:2所示氨基酸序列的重链可变区；(b)具有SEQIDNO:3所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:4所示氨基酸序列的重链可变区；(c)具有SEQIDNO:5所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:6所示氨基酸序列的重链可变区；与(a)～(c)相比，具有至少一个保守氨基酸取代的氨基酸序列。在本专利技术的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段，包括下列至少之一：具有SEQIDNO:7所示氨基酸序列的轻链和SEQIDNO:8所示氨基酸序列的重链；具有SEQIDNO:9所示氨基酸序列的轻链和SEQIDNO:10所示氨基酸序列的重链；具有SEQIDNO:11所示氨基酸序列的轻链和SEQIDNO:12所示氨基酸序列的重链。根据本专利技术的第二方面，本专利技术提供了一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码本专利技术第一方面任一实施例所述的抗体或抗原结合片段。根据本专利技术的实施例，所述多核苷酸包括下列至少之一：具有SEQIDNO:13所示的轻链可变区核苷酸序列和SEQIDNO:14所示的重链可变区核苷酸序列；具有SEQIDNO:15所示的轻链可变区核苷酸序列和SEQIDNO:16所示的重链可变区核苷酸序列；具有SEQIDNO:17所示的轻链可变区核苷酸序列和SEQIDNO:18所示的重链可变区核苷酸序列；具有SEQIDNO:19所示的轻链核苷酸序列和SEQIDNO:20所示的重链核苷酸序列；具有SEQIDNO:21所示的轻链核苷酸序列和SEQIDNO:22所示的重链核苷酸序列；具有SEQIDNO:23所示的轻链核苷酸序列和SEQIDNO:24所示的重链核苷酸序列；与所述任一轻链可变区核苷酸序列相比，具有90％以上同源性的序列，任选具有95％以上同源性的序列，优选为具有98％以上同源性的序列，更优选为具有99％以上同源性的序列；与所述任一的重链可变区核苷酸序列相比，具有90％以上同源性的序列，任选具有95％以上同源性的序列，优选为具有98％以上同源性的序列，更优选为具有99％以上同源性的序列；与上述任一轻链核苷酸序列相比，具有90％以上同源性的序列，任选具有95％以上同源性的序列，优选为具有98％以上同源性的序列，更优选为具有99％以上同源性的序列；与上述任一重链核苷酸序列相比，具有90％以上同源性的序列，任选具有95％以上同源性的序列，优选为具有98％以上同源性的序列，更优选为具有99％以上同源性的序列。根据本专利技术的第三方面，本专利技术提供了一种表达载体，包含本专利技术第二方面任一实施例所述的多核苷酸。在本专利技术的一些实施例中，以上所述表达载体进一步包括：控制元件，所述控制元件与所述多核苷酸可操作地连接，用于控制所述多核苷酸在宿主细胞中的表达。在本专利技术的一些实施例中，所述控制元件包括下列至少之一：启动子、增强子和终止子。在本专利技术的一些实施例中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞。根据本专利技术的第四方面，本专利技术提供了一种重组细胞，包含本专利技术第三方面任一实施例所述的表达载体。根据本专利技术的第五方面，本专利技术提供了一种制备抗ROR2抗体或其抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗ROR2抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括下列至少之一：/n(1)具有CSASSSVSYMHWYQ、IYDTSKLAS和CQQWSSNPPTFGAG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTITSYLMHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；/n(2)具有CKASQNVGTNVAWFQ、IYLASYRYS和CQQYNSYPLTFGGG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTFTNYWIQWM、LEWIGEINPSNGRTDYNEKFKNRAT和CANYRPGYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；/n(3)具有CSASSSISYMYWYQ、IYDTSILAS和CQQWSSYPFTFGSG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTFTSYLIHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；/n与(1)～(3)相比，具有至少一个保守氨基酸取代的氨基酸序列；/n任选地，包括下列至少之一：/n(a)具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的重链可变区；/n(b)具有SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的重链可变区；/n(c)具有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的重链可变区；/n与(a)～(c)相比，具有至少一个保守氨基酸取代的氨基酸序列；/n任选地，包括下列至少之一：/n具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的轻链和SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的重链；/n具有SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的轻链和SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的重链；/n具有SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的轻链和SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的重链。/n...

【技术特征摘要】
20181229 CN 20181164779451.一种抗ROR2抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括下列至少之一：
(1)具有CSASSSVSYMHWYQ、IYDTSKLAS和CQQWSSNPPTFGAG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTITSYLMHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；
(2)具有CKASQNVGTNVAWFQ、IYLASYRYS和CQQYNSYPLTFGGG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTFTNYWIQWM、LEWIGEINPSNGRTDYNEKFKNRAT和CANYRPGYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；
(3)具有CSASSSISYMYWYQ、IYDTSILAS和CQQWSSYPFTFGSG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTFTSYLIHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；
与(1)～(3)相比，具有至少一个保守氨基酸取代的氨基酸序列；
任选地，包括下列至少之一：
(a)具有SEQIDNO:1所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:2所示氨基酸序列的重链可变区；
(b)具有SEQIDNO:3所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:4所示氨基酸序列的重链可变区；
(c)具有SEQIDNO:5所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:6所示氨基酸序列的重链可变区；
与(a)～(c)相比，具有至少一个保守氨基酸取代的氨基酸序列；
任选地，包括下列至少之一：
具有SEQIDNO:7所示氨基酸序列的轻链和SEQIDNO:8所示氨基酸序列的重链；
具有SEQIDNO:9所示氨基酸序列的轻链和SEQIDNO:10所示氨基酸序列的重链；
具有SEQIDNO:11所示氨基酸序列的轻链和SEQIDNO:12所示氨基酸序列的重链。


2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1所述的抗体或抗原结合片段；
任选地，所述多核苷酸包括下列至少之一：
具有SEQIDNO:13所示的轻链可变区核苷酸序列和SEQIDNO:14所示的重链可变区核苷酸序列；
具有SEQIDNO:15所示的轻链可变区核苷酸序列和SEQIDNO:16所示的重链可变区核苷酸序列；
具有SEQIDNO:17所示的轻链可变区核苷酸序列和SEQIDNO:18所示的重链可变区核苷酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：张素平，汤姆·科佩斯，吴柳风，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东;44