抗-EGFR抗体及抗体药物偶联物制造技术

本发明专利技术提供了可用于治疗癌症的抗‑EGFR抗体及抗体药物偶联物(ADC)，特别是特异性地结合EGFRvIII的抗‑EGFR抗体和抗体药物偶联物(ADC)，以及包含含有多种本文所述的ADC的ADC混合物和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明专利技术还提供了用于治疗患有癌症的受试者的方法，包括对受试者施用本文所述的药物组合物。

【技术实现步骤摘要】
抗-EGFR抗体及抗体药物偶联物本申请为国际申请PCT/US2015/021849进入中国国家阶段的中国专利申请(申请号为201580026453.4，申请日为2015年3月20日，专利技术名称为“抗-EGFR抗体及抗体药物偶联物”)的分案申请。相关申请本申请要求2014年3月21日提交的美国临时申请No.61/968,819的优先权权益。前述优先权申请的内容通过引用全文合并于此。序列表本申请包含以ASCII格式电子提交的并由此通过引用全文并入的序列表。2015年3月12日生成的所述ASCII拷贝名称为117813-06202_SL.txt且大小为110,863字节。
技术介绍
人表皮生长因子受体(也称为HER-1或Erb-B1，且在本文中称为“EGFR”)是由c-erbB原癌基因编码的170kDa跨膜受体，且表现出固有的酪氨酸激酶活性(Modjtahedi等人,Br.J.Cancer73：228-235(1996)；Herbst和Shin,Cancer94：1593-1611(2002))。SwissProt数据库登录项P00533提供了人EGFR的序列。EGFR通过酪氨酸激酶介导的信号转导途径调节多种细胞过程，包括但不限于控制细胞增殖、分化、细胞存活、凋亡、血管生成、有丝分裂发生和转移的信号转导途径的激活(Atalay等人,Ann.Oncology14：1346-1363(2003)；Tsao和Herbst,Signal4：4-9(2003)；Herbst和Shin,Cancer94：1593-1611(2002)；Modjtahedi等人,Br.J.Cancer73：228-235(1996))。EGFR的已知配体包括EGF、TGFA/TGF-α、双向调节因子、epigen/EPGN、BTC/β细胞素、表皮调节素/EREG和HBEGF/肝素结合EGF。通过EGFR的配体结合引发受体同二聚化和/或异二聚化及关键胞质残基的自体磷酸化。磷酸化的EGFR募集衔接蛋白如GRB2，其随之激活复杂的下游信号传导级联，包括至少以下主要下游信号传导级联：RAS-RAF-MEK-ERK、PI3激酶-AKT、PLCγ-PKC和STATs模块。这种自体磷酸化也通过几种其它蛋白质(其通过自身的磷酸酪氨酸结合SH2结构域与磷酸化酪氨酸结合)诱导下游激活和信号传导。这些下游信号传导蛋白启动几种信号转导级联，主要为MAPK、Akt和JNK途径，从而导致细胞增殖。通过EGFR的配体结合也可以激活NF-κ-B信号传导级联。配体结合也直接磷酸化其它蛋白质如RGS16，从而激活其GTP酶活性和潜在地将EGF受体信号传导与G蛋白偶联的信号传导偶联。配体结合也磷酸化MUC1并增加其与SRC和CTNNB1/β-连环蛋白的相互作用。EGFR的过表达已在许多人类恶性病症中报道，包括膀胱、脑、头和颈、胰腺、肺、乳腺、卵巢、结肠、前列腺和肾的癌症(Atalay等人，Ann.Oncology14：1346-1363(2003)；Herbst和Shin，Cancer94：1593-1611(2002)，及Modjtahedi等人，Br.J.Cancer73：228-235(1996))。在众多的这些病症中，EGFR的过表达与患者的不良预后相关或关联(Herbst和Shin，Cancer94：1593-1611(2002)，及Modjtahedi等人，Br.J.Cancer73：228-235(1996))。EGFR也在正常组织的细胞中表达，特别是皮肤、肝和胃肠道的上皮组织，虽然一般以低于恶性细胞中的水平表达(Herbst和Shin，Cancer94：1593-1611(2002))。包含EGFR基因的扩增(即，多个拷贝的EGFR基因)的大部分肿瘤也过度表达受体的截短形式(Wikstrand等人，(1998)J.Neurovirol.4，148-158)，称为de2-7EGFR、ΔEGFR、EGFRvIII或Δ2-7(在本文中可互换使用的术语)(Olapade-Olaopa等人，(2000)Br.J.Cancer.82，186-94)。de2-7EGFR中看到的重排导致缺乏跨外显子2-7的801个核苷酸的框内成熟mRNA(Wong等人，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89，2965-9；Yamazaki等人，(1990)Jpn.J.CancerRes.81，773-9；Yamazaki等人，(1988)Mol.Cell.Biol.8，1816-20，及Sugawa等人，(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87，8602-6)。相应的EGFR蛋白具有包含细胞外域的残基6-273的267氨基酸缺失及在融合接合处的新的甘氨酸残基(Sugawa等人，1990)。这种缺失与甘氨酸残基的插入一起在缺失界面处产生独特的接合肽(Sugawa等人，1990)。EGFRvIII已在多种肿瘤类型中报道，包括神经胶质瘤、乳腺肿瘤、肺肿瘤、卵巢肿瘤和前列腺肿瘤(Wikstrand等人，(1997)CancerRes.57，4130-40；Olapade-Olaopa等人，(2000)Br.J.Cancer.82，186-94；Wikstrand等人，(1995)CancerRes.55，3140-8；GarciadePalazzo等人，(1993)CancerRes.53，3217-20)。尽管这种截短的受体不结合配体，但其具有低组成性活性并对作为肿瘤异种移植物在裸鼠中生长的神经胶质瘤细胞赋予显著的生长益处(Nishikawa等人(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91，7727-31)和能够转化NIH3T3细胞(Batra等人，(1995)CellGrowthDiffer.6，1251-9)和MCF-7细胞。神经胶质瘤细胞中de2-7EGFR所利用的细胞机制并未完全确定，但被报道包括凋亡的降低(Nagane等人，(1996)CancerRes.56，5079-86)和小的增殖增强(Nagane等人，1996)。由于这种截短的受体的表达限于肿瘤细胞，其代表抗体疗法的高度特异性的靶标。抗体药物偶联物(ADC)代表一类新的治疗剂，其包含通过化学接头与细胞毒性药物偶联的抗体。ADC的治疗概念是将抗体的结合能力与药物相结合，其中抗体用于通过与靶表面抗原的结合递送药物到肿瘤细胞。因此，本领域中仍然存在对于可以用于癌症治疗的治疗性目的的抗-EGFR抗体和ADC的需要。
技术实现思路
在某些方面，本专利技术提供特异性地结合EGFRvIII的抗-EGFR抗体和抗体药物偶联物(ADC)。在一个实施方式中，本专利技术特征在于结合氨基酸序列CGADSYEMEEDGVRKC(SEQIDNO：45)内的表位或在竞争结合分析中与第二抗-hEGFR抗体竞争结合表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)(SEQIDNO：33)的抗-人受体表皮生长因子(抗-hEGFR)抗体或其抗原结合部分，其中该第二抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗-人表皮生长因子受体(抗-hEGFR)抗体或其抗原结合部分，其/na)结合氨基酸序列CGADSYEMEEDGVRKC(SEQ ID NO:45)内的表位或在竞争结合分析中与第二抗-hEGFR抗体竞争结合表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)(SEQ ID NO:33)，其中所述第二抗-EGFR抗体包含含有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链可变域和含有SEQID NO:5所示的氨基酸序列的轻链可变域；/nb)如通过表面等离子体共振测定的，以约1 x 10

【技术特征摘要】
20140321 US 61/968,8191.一种抗-人表皮生长因子受体(抗-hEGFR)抗体或其抗原结合部分，其
a)结合氨基酸序列CGADSYEMEEDGVRKC(SEQIDNO:45)内的表位或在竞争结合分析中与第二抗-hEGFR抗体竞争结合表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)(SEQIDNO:33)，其中所述第二抗-EGFR抗体包含含有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的重链可变域和含有SEQIDNO:5所示的氨基酸序列的轻链可变域；
b)如通过表面等离子体共振测定的，以约1x10-6M或更低的解离常数(Kd)结合EGFR(1-525)(SEQIDNO:47)；和
c)在体内人非小细胞肺癌(NSCLC)异种移植分析中相对于非EGFR特异性的人IgG抗体以至少约50％的肿瘤生长抑制％(TGI％)抑制肿瘤生长，其中所述人IgG抗体在所述NSCLC异种移植分析中以与所述抗-hEGFR抗体或其抗原结合部分相同的剂量和频率施用。


2.一种抗-人表皮生长因子受体(抗-hEGFR)抗体，包含：
含有SEQIDNO:12所示的氨基酸序列的重链CDR3域，含有SEQIDNO:11所示的氨基酸序列的重链CDR2域，和含有SEQIDNO:10所示的氨基酸序列的重链CDR1域；和
含有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的轻链CDR3域，含有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列的轻链CDR2域，和含有SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的轻链CDR1域。


3.一种抗-人表皮生长因子受体(抗-hEGFR)抗体，包含：
含有SEQIDNO:18所示的氨基酸序列的重链CDR3域，含有SEQIDNO:17所示的氨基酸序列的重链CDR2域，和含有SEQIDNO:16所示的氨基酸序列的重链CDR1域；和
含有SEQIDNO:25所示的氨基酸序列的轻链CDR3域，含有SEQIDNO:24所示的氨基酸序列的轻链CDR2域，和含有SEQIDNO:23所示的氨基酸序列的轻链CDR1域。


4.一种抗-人表皮生长因子受体(抗-hEGFR)抗体，包含：
含有SEQIDNO:19所示的氨基酸序列的重链CDR3域，含有SEQIDNO:17所示的氨基酸序列的重链CDR2域，和含有SEQIDNO:,6所示的氨基酸序列的重链CDR1域；和
含有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的轻链CDR3域，含有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列的轻链CDR2域，和含有SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的轻链CDR1域。


5.SEQIDNO:86和/或SEQIDNO:87的分离的核酸。


6.一种载体，包含SEQIDNO:86和/或SEQIDNO:87的核酸。


7.一种用于表达抗体重链氨基酸序列的前导序列，所述抗体重链氨基酸序列包含SEQIDNO:88所示的氨基酸序列。
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【专利技术属性】
技术研发人员：E·B·瑞利，A·C·菲利普斯，L·贝纳图尔，F·G·布查南，J·A·梅尔布洛克，谢仲明，J·佩雷斯，
申请(专利权)人：艾伯维公司，
类型：发明
国别省市：美国;US