治疗恶性肿瘤的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种治疗恶性肿瘤的抗体及其应用。本发明专利技术提供了抗ROR2抗体包括下列至少之一：(1)具有CSASSSVTYTYWYQ、IYDTSNLAS和CQQWSSYPFTFGSG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTFTSYLMHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；与(1)相比，具有至少一个保守氨基酸取代的氨基酸序列。该抗ROR2抗体能够高特异性与ROR2抗原结合，从而用于靶向治疗癌症。

【技术实现步骤摘要】
治疗恶性肿瘤的抗体及其应用
本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及治疗恶性肿瘤的抗体及其应用，具体地涉及一种抗ROR2抗体及其应用。
技术介绍
酪氨酸激酶孤儿样受体ROR2是重要的发育相关调节蛋白，在胚胎发育早期，多种组织中均有较高的表达和对组织的增值，分化等具有重要的作用。妊娠中期后，ROR2的表达水平逐渐下降。除了在部分成骨细胞和子宫细胞之外，ROR2在成人组织中基本不表达。而目前研究表明，ROR2在许多肿瘤组织中高表达，包括骨肉瘤，黑色素瘤，结直肠癌和胃癌，乳腺癌，淋巴瘤，白血病等癌症。因此，许多学者认为ROR2是个疾病相关的基因，且可以作为理想的药物靶点。ROR2是一个在胚胎发育过程中大量表达并起重要作用的一个酪氨酸激酶孤儿受体，而在成体大多数的组织中很难检测到，最近几年的研究发现，虽然大多数正常组织不表达ROR2，但是许多恶性肿瘤细胞包括乳腺癌，肺癌，胰腺癌等细胞却高表达ROR2；并且，ROR2表达水平越高的癌细胞，其恶性程度越高，越容易发生转移，复发，预后越差。ROR2通常在分化程度很低的肿瘤细胞上可以检测到，这类肿瘤细胞具有很强的复发和转移能力。然而针对ROR2的药物研发还有待改进。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种抗ROR2抗体及其应用。本专利技术是基于专利技术人的如下研究所发现的：在肿瘤的研究过程中，作为肿瘤干细胞的表面标记物，例如CD133,CD44,CD24,ALDH1等，无论在肿瘤细胞还是在正常的成体组织中都有表达，致使针对这些表面分子开发的抗肿瘤干细胞的药物对正常组织也会造成一定的毒害。而ROR2在肿瘤干细胞也有丰富的表达，但是在正常细胞中却表达较少，因此开发出针对ROR2的治疗性抗体对正常组织的伤害会比较小。所以，ROR2是理想的药物靶点。而针对ROR2所开发出的药物可以用于肿瘤和癌症的治疗中，且对正常组织的损害会比较小。为此，本专利技术提供了一种抗ROR2抗体或者抗原结合片段，以及分离的核苷酸、表达载体、重组细胞等。利用本专利技术提供的抗ROR2抗体或抗原结合片段，能够高特异性和ROR2抗原结合，在较低浓度下，例如0.0001μg/ml浓度下就可以表现出较高的亲和力。将其应用于肿瘤的靶向性治疗，或者制成试剂盒特异性检测ROR2抗原等，具有重要的价值。根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种抗ROR2抗体或抗原结合片段，包括下列至少之一：具有CSASSSVTYTYWYQ、IYDTSNLAS和CQQWSSYPFTFGSG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTFTSYLMHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；与(1)相比，具有一个以上保守氨基酸取代的氨基酸序列。本专利技术所提供的抗体或抗原结合片段，能够特异性结合ROR2蛋白。根据本专利技术的实施例，以上所述抗ROR2抗体或抗原结合片段可以进一步包括如下技术特征：在本专利技术的一些实施例中，所述抗ROR2抗体或抗原结合片段包括下列至少之一：(a)具有SEQIDNO:1所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:2所示氨基酸序列的重链可变区；与(a)相比，具有一个以上保守氨基酸取代的氨基酸序列。在本专利技术的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段具有SEQIDNO:3所示的轻链和SEQIDNO:4所示的重链。在本专利技术的一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段的抗原表位为ROR2的胞外端的Kringle段。根据本专利技术的第二方面，本专利技术提供了一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码本专利技术第一方面所述的抗体或抗原结合片段。根据本专利技术的实施例，所述多核苷酸具有下列至少之一的核苷酸序列：SEQIDNO:5所示的轻链可变区核苷酸序列和SEQIDNO:6所示的重链可变区核苷酸序列；SEQIDNO:9所示的轻链核苷酸序列和SEQIDNO:10所示的重链核苷酸序列；与SEQIDNO:5所示的轻链可变区核苷酸序列相比，具有90％以上同源性的序列，任选具有95％以上同源性的序列，优选为具有98％以上同源性的序列，更优选为具有99％以上同源性的序列；与SEQIDNO:6所示的重链可变区核苷酸序列相比，具有90％以上同源性的序列，任选具有95％以上同源性的序列，优选为具有98％以上同源性的序列，更优选为具有99％以上同源性的序列；与SEQIDNO:9所示的轻链核苷酸序列相比，具有90％以上同源性的序列，任选具有95％以上同源性的序列，优选为具有98％以上同源性的序列，更优选为具有99％以上同源性的序列；与SEQIDNO:10所示的重链核苷酸序列相比，具有90％以上同源性的序列，任选具有95％以上同源性的序列，优选为具有98％以上同源性的序列，更优选为具有99％以上同源性的序列。根据本专利技术的第三方面，本专利技术提供了一种表达载体，包含本专利技术第二方面所述的多核苷酸。根据本专利技术的实施例，以上所述的表达载体进一步包括：控制元件，所述控制元件与所述多核苷酸可操作地连接，用于控制所述多核苷酸在宿主细胞中的表达。根据本专利技术的实施例，所述控制元件包括下列至少之一：启动子、增强子和终止子。根据本专利技术的实施例，所述宿主细胞为哺乳动物细胞。根据本专利技术的第四方面，本专利技术提供了一种重组细胞，包含本专利技术第三方面任一实施例所述的表达载体。根据本专利技术的第五方面，本专利技术提供了一种制备抗体或其抗原结合片段的方法，包括培养本专利技术第四方面所述的重组细胞，其中所述抗体或抗原结合片段为本专利技术第一方面所述的抗体或抗原结合片段。根据本专利技术的第六方面，本专利技术提供了一种抗体或抗原结合片段在制备药物中的用途，所述药物用于治疗癌症，所述抗体或抗原结合片段为本专利技术第一方面所述的抗体或抗原结合片段。根据本专利技术的第七方面，本专利技术提供了一种抗体或抗原结合片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于ROR2抗原的诊断检测。在本专利技术的一些实施例中，所述试剂盒用于免疫印迹、免疫沉淀、ELISA检测。根据本专利技术的第八方面，本专利技术提供了一种药物组合物，包括本专利技术第一方面任一实施例所述的抗体或抗原结合片段和药学上可接受的载体。根据本专利技术的第九方面，本专利技术提供了一种嵌合蛋白，包括：胞外区、跨膜区和胞内区，所述胞外区包括抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段为单链，所述抗体或抗原结合片段为本专利技术第一方面任一实施例所述抗体或抗原结合片段。根据本专利技术的第十方面，本专利技术提供了一种Car-T细胞，所述Car-T细胞表达本专利技术第九方面所述的抗ROR2的嵌合抗原受体。将本专利技术提供的抗体或抗原结合片段作为单链抗体与胞内信号域蛋白，例如免疫受体酪氨酸活化基序蛋白(通常为CD3ζ)在体外进行基因重组，生成重组质粒，再在体外通过转染技术转染到患者的T细胞，使患者T细胞表达肿瘤抗原受体，转染后经过纯化和大规模扩增后的T细胞，即为嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)。而表达CAR的T细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗ROR2抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括下列至少之一：/n(1)具有CSASSSVTYTYWYQ、IYDTSNLAS和CQQWSSYPFTFGSG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTFTSYLMHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；/n与(1)相比，具有至少一个保守氨基酸取代的氨基酸序列；/n任选地，包括下列至少之一：/n(a)具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的重链可变区；/n与(a)相比，具有至少一个保守氨基酸取代的氨基酸序列；/n任选地，所述抗体或抗原结合片段具有SEQ ID NO:3所示的轻链和SEQ ID NO:4所示的重链；/n任选地，所述抗体或抗原结合片段的抗原表位为ROR2的胞外端的Kringle段。/n

【技术特征摘要】
20181229 CN 201811647795X1.一种抗ROR2抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括下列至少之一：
(1)具有CSASSSVTYTYWYQ、IYDTSNLAS和CQQWSSYPFTFGSG所示氨基酸序列的轻链可变区，以及具有YTFTSYLMHWV、LEWIGYINPYNDGTKYNEKFKDKAT和CARSDVYYGVRFAYWGQG所示氨基酸序列的重链可变区；
与(1)相比，具有至少一个保守氨基酸取代的氨基酸序列；
任选地，包括下列至少之一：
(a)具有SEQIDNO:1所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:2所示氨基酸序列的重链可变区；
与(a)相比，具有至少一个保守氨基酸取代的氨基酸序列；
任选地，所述抗体或抗原结合片段具有SEQIDNO:3所示的轻链和SEQIDNO:4所示的重链；
任选地，所述抗体或抗原结合片段的抗原表位为ROR2的胞外端的Kringle段。


2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1所述的抗体或抗原结合片段；
任选地，所述多核苷酸具有下列至少之一的核苷酸序列：
SEQIDNO:5所示的轻链可变区核苷酸序列和SEQIDNO:6所示的重链可变区核苷酸序列；
SEQIDNO:7所示的轻链核苷酸序列和SEQIDNO:8所示的重链核苷酸序列；
与SEQIDNO:5所示的轻链可变区核苷酸序列相比，具有90％以上同源性的序列，任选具有95％以上同源性的序列，优选为具有98％以上同源性的序列，更优选为具有99％以上同源性的序列；
与SEQIDNO:6所示的重链可变区核苷酸序列相比，具有90％以上同源性的序列，任选具有95％以上同源性的序列，优选为具有98％以上同源性的序列，更优选为具有99％以上同源性的序列；
与SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：张素平，汤姆·科佩斯，吴柳风，张建超，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东;44