一种抗CD3的人源化抗体及其在制备双特异性抗体中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗CD3抗体。本发明专利技术提供的抗CD3抗体对抗原CD3的亲和力降低，而在将其与针对其他抗原的抗体一起构建成双特异性抗体后，仍能在肿瘤细胞部位有效地募集T细胞，实现良好的治疗作用。因此，本发明专利技术提供的抗CD3抗体或其片段可以用于构建多特异性、特别是双特异性抗体，发挥结合T细胞表面CD3的作用以有效募集T细胞且同时不过度刺激T细胞。募集T细胞且同时不过度刺激T细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种抗CD3的人源化抗体及其在制备双特异性抗体中的应用
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本专利申请要求于2021年12月31日提交的申请号为CN202111670032.9的中国专利技术专利申请的优先权权益，在此将其全部内容引入作为参考。


[0003]本专利技术属于生物医药领域，具体而言，本专利技术涉及一种抗人CD3的人源化抗体或其功能片段，以及所述抗体或其功能片段的应用。

技术介绍

[0004]CD3分子主要分布于成熟T淋巴细胞表面，是T细胞膜上的重要分化抗原。研究表明，CD3分子至少由gamma(γ)、delta(δ)、epsilon(ε)、zeta(ζ)、Eta(η)这五条多肽链组成；其中CD3
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epsilon与CD3
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gamma、CD3
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delta和CD3
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zeta以及T细胞受体alpha/beta和gamma/delta的异源二聚体共同构成T细胞受体(TCR)
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CD3复合物。TCR
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CD3复合物在将抗原识别耦合到细胞内信号转导通路中起着重要作用：TCR
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CD3复合物的一部分存在于T淋巴细胞表面，当抗原呈现细胞(APC)激活TCR时，TCR介导的信号通过CD3分子的CD3
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delta、CD3
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epsilon、CD3
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gamma和CD3
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zeta在细胞膜上传输，而所有CD3分子在其细胞质域中含有免疫感受器酪氨酸激活结构域(ITAM)，在TCR参与后，这些结构域被src家族蛋白酪氨酸激酶LCK和FYN磷酸化，导致下游信号通路的激活。
[0005]目前有很多激活性CD3抗体在临床或者药品市场上销售，这些激活性CD3抗体普遍存在着用药剂量偏低的现象，这是因为CD3抗体药物如果剂量过高会存在过度激活T细胞从而产生细胞因子风暴的现象，存在相当大的安全性风险。因此目前抗体药物的研发已经倾向于寻求对抗原或靶标具有合适亲和力的抗体，以确保药物的安全性与疗效。
[0006]因此，本领域仍需要提供一种对CD3具有合适亲和力的抗体。

技术实现思路

[0007]针对上述问题，本专利技术的目的在于提供一种新型的对CD3、特别是人T细胞表面的CD3具有适当亲和力的抗体。本专利技术的另一个目的是提供这种抗CD3抗体或其包含的功能区域(例如重链可变区和轻链可变区)在制备抗体药物中的应用。
[0008]本专利技术提供以下技术方案。
[0009]一方面，本专利技术提供一种抗体或其片段，所述抗体或其片段能够特异性结合CD3，特别是人T细胞表面的CD3。
[0010]具体而言，本专利技术提供的抗体或其片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)包含以下CDR组合(HCDR
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1、HCDR
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2、HCDR
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3；LCDR
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1、LCDR
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2、LCDR
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3)：包含示于SEQ ID NO:22的氨基酸序列(TYAMN)的HCDR
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1、包含示于SEQ ID NO:23的氨基酸序列(RIRSKYNNYATYYADSVKD)的HCDR
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2、包含示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列(HGNFGNSYVSYFAY)的HCDR
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3；和，包含示于SEQ ID NO:25的氨基酸序列
(RSSTGAVTTSNYAN)的LCDR
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1、包含示于SEQ ID NO:26的氨基酸序列(GTNKRAP)的LCDR
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2、包含示于SEQ ID NO:27的氨基酸序列(ALWYSNLWV)的LCDR
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3。
[0011]在本专利技术的上下文中，所提供的轻重链CDR的组合来自本专利技术具体实施方式中具体描述的抗CD3抗体的重链和轻链氨基酸序列，本领域技术人员可以常规地确定在该抗体的重链和轻链中包含的CDR。例如，上文提供的轻重链CDR的组合为采用KABAT定义方法而得到的。
[0012]在本专利技术提供的抗体或其片段中，优选地，所述重链可变区包含示于SEQ ID NO:7的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和/或，所述轻链可变区包含示于SEQ ID NO:8的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
[0013]在本专利技术的上下文中，“至少75％同一性”为75％至100％之间的任何百分比数字的同一性，例如75％、80％、85％、90％，甚至91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至100％同一性。
[0014]在本专利技术的上下文中，“重链可变区”和“轻链可变区”均包括上述CDR组合以及间隔的框架区(framework region)，各个结构域的排列方式为：FR1
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CDR1
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FR2
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CDR2
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FR3
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CDR3
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FR4。进一步可选地，所述“至少75％同一性”导致的氨基酸序列上的至多25％差异可存在于重链可变区或轻链可变区中的任意框架区中，或者存在于重链可变区和轻链可变区以外的任意结构域或序列中。所述差异可以由任何位置的氨基酸缺失、添加或置换产生。
[0015]就抗原而言，本专利技术的抗体或其片段为抗CD3的抗体或其片段；优选地，所述抗体为鼠抗、兔抗、单克隆抗体、嵌合抗体、部分或全部人源化的抗体等任意形式，或者，所述片段为半抗体或者抗体或半抗体的抗原结合片段，例如scFv、BsFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv；更优选地，所述抗体为IgG。根据本专利技术的具体实施方式，本专利技术提供特异性地结合CD3、特别是人T细胞表面的CD3的经分离和结构表征的人抗体，例如人单克隆抗体。
[0016]除了可变区之外，本专利技术提供的抗体或其片段还包含恒定区，例如人或鼠的恒定区，优选包含人或鼠的重链恒定区(CH)和/或轻链恒定区(CL)；优选地，所述抗体或其片段包含重链和轻链；更优选地，所述抗体或其片段包含IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的重链恒定区和/或κ或λ型轻链恒定区。
[0017]根据本专利技术的具体实施方式，所述抗体为单克隆抗体，优选为鼠、嵌合或人源化的单克隆抗体。优选地，所述单克隆抗体的重链恒定区为IgG1或IgG4亚型，轻链恒定区为κ型。优选地，所述单克隆抗体的重链恒定区包含示于SEQ ID NO:17的氨基酸序列或者与示于SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链恒定区包含示于SEQ ID NO:18的氨基酸序列或者与示于SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体或其片段，所述抗体或其片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)包含以下CDR组合(HCDR
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1、HCDR
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2、HCDR
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3；LCDR
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1、LCDR
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2、LCDR
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3)：包含示于SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HCDR
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1、包含示于SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HCDR
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2、包含示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HCDR3；和，包含示于SEQ ID NO:25的氨基酸序列的LCDR
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1、包含示于SEQ ID NO:26的氨基酸序列的LCDR
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2、包含示于SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LCDR
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3。2.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其特征在于，所述重链可变区包含示于SEQ ID NO:7的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和/或，所述轻链可变区包含示于SEQ ID NO:8的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段为抗CD3的抗体或其片段；优选地，所述抗体为鼠抗、兔抗、单克隆抗体、嵌合抗体、部分或全部人源化的抗体等任意形式；或者，所述片段为半抗体或者抗体或半抗体的抗原结合片段，例如scFv、BsFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv；更优选地，所述抗体为IgG。4.一种核酸分子，其包含编码权利要求1至3中任一项所述的抗体或其片段中包含的重链CDR、轻链CDR、轻链可变区、重链可变区、重链或轻链的核苷酸序列。5.一种载体，其包含权利要求4所述的核酸分子。6.一种宿主细胞，其包含权利要求4所述的核酸分子和/或权利要求5所述的载体。7.一种组合物，其包含权利要求1至3中任一项所述的抗体或其片段、权利要求4所述的核酸分子、权利要求5所述的载体和/或权利要求6所述的宿主细胞；优选地，所述组合物为药物组合物，其还包含任选的药学上可接受的辅料。8.权利要求1至3中任一项所述的抗体或其片段、权利要求4所述的核酸分子、权利要求5所述的载体、权利要求6所述的宿主细胞和/或权利要求7所述的组合物在制备用于募集并激活T细胞的试剂中的用途。9.多肽1和多肽2的组合在制备多特异性抗体构建体中的用途，其中所述多肽1包含示于SEQ ID NO:22的氨基酸序列、示于SEQ ID NO:23的氨基酸序列、示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列；和，所述多肽2包含示于SEQ ID NO:25的氨基酸序列、示于SEQ ID NO:26的氨基酸序列、示于SEQ IDNO:27的氨基酸序列。10.多肽1和多肽2的组合在制备用于募集T细胞的试剂中的用途，其中所述多肽1包含示于SEQ ID NO:22的氨基酸序列、示于SEQ ID NO:23的氨基酸序列、示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列；和，所述多肽2包含示于SEQ ID NO:25的氨基酸序列、示于SEQ ID NO:26的氨基酸序列、示于SEQ ID NO:27的氨基酸序列。11.根据权利要求9或10所述的用途，其特征在于，所述多肽1包含示于SEQ ID NO:7的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列，所述多肽2包含示于SEQ ID NO:8的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；优选地，在所述多特异性...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁金鹰，彭浩，郝锋，贺锋，
申请(专利权)人：康源博创生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：