一种抗PD-L1的抗体及其制药用途制造技术

本发明专利技术提供一种结合人PD‑L1的抗体分子或其抗原结合片段。本发明专利技术还提供所述抗体分子或其抗原结合片段在制备治疗肿瘤或癌症的药物中的用途。本发明专利技术提供的抗体与现有抗PD‑L1抗体相比，具有更优的对PD‑L1的亲和力和解离速率，更低的免疫原性，并且具有更好的抑瘤效果。

【技术实现步骤摘要】
一种抗PD-L1的抗体及其制药用途
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种新的抗PD-L1抗体或其功能性片段。本专利技术还涉及所述抗体或其功能性片段的应用。
技术介绍
PD-L1，其编码的基因又称之为CD274，是程序性死亡因子PD1的配体分子，经常表达在造血细胞和非造血细胞例如T细胞和B细胞上，以及各种类型的肿瘤细胞上。PD-L1归属为1类型的跨膜蛋白，其具有免疫球蛋白V样和C样结构域。当PD-L1作为配体与其受体分子PD-1相互作用时会抑制T细胞活化和细胞因子的产生。在正常组织感染或炎症期间，这种相互作用对于通过维持免疫反应的稳态来防止自身免疫是很重要的。同时，这种相互作用在诱导和维持对自身的免疫耐受方面发挥着至关重要的作用，而在肿瘤微环境中，通常会导致毒性T细胞失活，从而为肿瘤细胞提供免疫逃逸。该基因在肿瘤细胞中的表达被认为是许多类型的人类恶性肿瘤是否可以应用PD-1或PD-L1抗体药物的标准之一，这类恶性肿瘤包括黑色素瘤和非小细胞肺癌等。目前已有多个PD-L1单抗药物已经上市，例如罗氏旗下的GENETECH研发并出品的首个PD-L1单抗药物Atezolizumab(商品名Tecentriq)，用于治疗铂类化疗失败或者进展的晚期膀胱癌。2017年，美国食品药品监督管理局(FDA)加速批准了新药Bavencio，用于治疗成人和12岁儿童的默克尔细胞癌(MCC)。该药物主要成分为Avelumab，对转移性默克尔细胞癌(mMCC)具有持续缓解作用。在欧洲，治疗转移性尿路上皮癌的PD-L1抗体生物制剂的许可证申请也在接受FDA的优先审查。2018年3月阿斯利康也公布其免疫疗法药物Imfinzi(Durvalumab)已正式获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准，用于治疗不能手术切除的III期非小细胞肺癌(NSCLC)患者。然后，目前针对PDL1的单抗药物在亲和力及解离速度上还有提高的空间，而且根据临床试验数据来看Atezolizumab药物的免疫源性比较高，导致较多的抗抗体产生，极大的影响了该药物的治疗效果。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，通过杂交瘤筛选和人源化技术，获得特异性结合人PD-L1、特别是对人PD-L1具有高亲和力的抗体。针对上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种抗人PD-L1的抗体或其片段，并基于该抗体或其片段，提供其用途。本专利技术所述抗体分子的“片段”涵盖抗体的各种功能性片段，例如其抗原结合部分，如Fab、F(ab’)2或scFv片段。本专利技术提供以下技术方案。一方面，本专利技术提供一种抗体或其片段，所述抗体或其片段能够特异性结合PD-L1，特别是人PD-L1，其氨基酸序列参见SEQIDNO:3。根据本专利技术的具体实施方式，本专利技术的抗体为采用示于SEQIDNO:3的人PD-L1的胞外区作为免疫原而得到的鼠抗体，以及基于所述鼠抗体得到的嵌合抗体和人源化抗体。具体而言，本专利技术提供的抗体或其片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)包含选自以下的CDR组合(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)：(1)依次示于SEQIDNO:35(EYTFTNNWIA)、SEQIDNO:36(DIHPGGGFTNYNEKFKV)、SEQIDNO:37(SKTRDYDAWFAY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:38(KSSQSLLYTGNQKNYLA)、SEQIDNO:39(WASTRES)、SEQIDNO:40(QQYYTYRT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；(2)依次示于SEQIDNO:41(GYTFTNYVVH)、SEQIDNO:42(YVNPNNDGTIFNEKFKD)、SEQIDNO:43(SPFAH)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:44(SASESVDFYGTSLMQ)、SEQIDNO:45(TASNVDS)、SEQIDNO:46(HQTRKVPYT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；(3)依次示于SEQIDNO:47(GYIFTEYIIH)、SEQIDNO:48(WFYPGSDNIKYNEKFKD)、SEQIDNO:49(HETGYFFDY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:50(SASSSVSKMN)、SEQIDNO:51(DTSKLAS)、SEQIDNO:52(QQWSSNPLT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；(4)依次示于SEQIDNO:53(GYSFTGYNMN)、SEQIDNO:54(NIDPYYGVTHYNQKFKG)、SEQIDNO:55(GIPFYGLDY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:56(GASSSVSFMH)、SEQIDNO:51(DTSKLAS)、SEQIDNO:57(QQWNTNPFT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；(5)依次示于SEQIDNO:58(AFNIDDTYIH)、SEQIDNO:59(RIDPANGNTDYDPECQG)、SEQIDNO:60(GLRLPGLVY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:61(RASQDISNYLN)、SEQIDNO:62(YTSILYS)、SEQIDNO:63(QQGNTLPWT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；(6)依次示于SEQIDNO:64(GFNIEDTYLH)、SEQIDNO:65(RIDPANGNTYYDPKFQG)、SEQIDNO:66(GLRLPGFPY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:67(RASQDISNYLS)、SEQIDNO:68(YTSILHS)、SEQIDNO:63(QQGNTLPWT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；(7)依次示于SEQIDNO:69(GDSIISGYWN)、SEQIDNO:70(YISYTGSTYYNPSLKS)、SEQIDNO:71(RGEWLLHFDV)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:72(KSSQSLLYSSNQKNSLA)、SEQIDNO:39(WASTRES)、SEQIDNO:73(QQYYSYPLT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；(8)依次示于SEQIDNO:74(GFSLTGYGVN)、SEQIDNO:75(KIWGDGITDYNSALKS)、SEQIDNO:76(DVMDY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:77(SASSSISYMH)、SEQIDNO:51(DTSKLAS)、SEQIDNO:78(HHRSPYPT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；(9)依次示于SEQIDNO:74(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体或其片段，所述抗体或其片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)包含选自以下的CDR组合：/n(1)依次示于SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；/n(2)依次示于SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；/n(3)依次示于SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；/n(4)依次示于SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:57的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；/n(5)依次示于SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；/n(6)依次示于SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:63的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；/n(7)依次示于SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:73的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；/n(8)依次示于SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:78的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；/n(9)依次示于SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:76的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:80的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；/n(10)依次示于SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；/n(11)依次示于SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:78的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；/n(12)依次示于SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。/n...

【技术特征摘要】
1.一种抗体或其片段，所述抗体或其片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)包含选自以下的CDR组合：
(1)依次示于SEQIDNO:35、SEQIDNO:36、SEQIDNO:37的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(2)依次示于SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(3)依次示于SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(4)依次示于SEQIDNO:53、SEQIDNO:54、SEQIDNO:55的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:56、SEQIDNO:51、SEQIDNO:57的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(5)依次示于SEQIDNO:58、SEQIDNO:59、SEQIDNO:60的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:61、SEQIDNO:62、SEQIDNO:63的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(6)依次示于SEQIDNO:64、SEQIDNO:65、SEQIDNO:66的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:67、SEQIDNO:68、SEQIDNO:63的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(7)依次示于SEQIDNO:69、SEQIDNO:70、SEQIDNO:71的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:72、SEQIDNO:39、SEQIDNO:73的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(8)依次示于SEQIDNO:74、SEQIDNO:75、SEQIDNO:76的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:77、SEQIDNO:51、SEQIDNO:78的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(9)依次示于SEQIDNO:74、SEQIDNO:79、SEQIDNO:76的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:77、SEQIDNO:51、SEQIDNO:80的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(10)依次示于SEQIDNO:74、SEQIDNO:75、SEQIDNO:76的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:81、SEQIDNO:82、SEQIDNO:83的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(11)依次示于SEQIDNO:74、SEQIDNO:75、SEQIDNO:76的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:84、SEQIDNO:51、SEQIDNO:78的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(12)依次示于SEQIDNO:35、SEQIDNO:85、SEQIDNO:86的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQIDNO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。


2.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其特征在于，所述重链可变区包含选自以下的序列：
示于SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31或SEQIDNO:33的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和/或
所述轻链可变区包含选自以下的序列：
示于SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32或SEQIDNO:34的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。


3.根据权利要求1或2所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段包含的重链可变区和轻链可变区选自以下组合：
(1)示于SEQIDNO:9的氨基酸序列或与示于SEQIDNO:9的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，示于SEQIDNO:10的氨基酸序列或与示于SEQIDNO:10的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(2)示于SEQIDNO:11的氨基酸序列或与示于SEQIDNO:11的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，示于SEQIDNO:12的氨基酸序列或与示于SEQIDNO:12的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(3)示于SEQIDNO:13的氨基酸序列或与示于SEQIDNO:13的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，示于SEQIDNO:14的氨基酸序列或与示于SEQIDNO:14的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(4)示于SEQIDNO:15的氨基酸序列或与示于SEQIDNO:15的氨基酸序列具有至少7...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁金鹰，彭浩，郝锋，贺锋，
申请(专利权)人：康源博创生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11