抗CD123抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了抗CD123抗体及其制备方法和应用，该抗CD123抗体的重链可变区包括三个互补决定区CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3，轻链可变区包括三个互补决定区CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3。所述抗体对人源CD123蛋白具有高亲和力，可特异性识别肿瘤细胞上的CD123。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD123抗体及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体而言，涉及抗CD123抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
CD123蛋白的基因名称为IL3RA。CD123与IL-5受体和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)受体，形成为Betacommon(βc)的膜受体细胞因子亚家族，这三种受体共享共同的βc亚基信号。其中这三种受体中的每一个受体都是由细胞因子特异性α亚基和普通βc亚基组成的异二聚体，使得能够高亲和力结合和细胞信号传导。这三个细胞因子发挥多种生物学功能，在控制正常和恶性血细胞生成方面，原生的和适应性免疫以及炎症反应等方面起着重要的生物学作用。作为CD123陪体的IL-3是一种主要由活化T淋巴细胞产生的多效性细胞因子，其调节体内的造血功能和免疫细胞功能。IL-3最初称为多集落刺激因子(multi-CSF)因为其会刺激来自骨骼的广泛的造血细胞，包括嗜碱性粒细胞，嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞，巨噬细胞，红系细胞，巨核细胞和树突状细胞。IL-3的生物活性不仅仅体现在造血系统，同时也延伸到了造血系统内皮谱系，其中IL-3可以刺激内皮细胞增殖。如上所述，IL-3R是一种包含alpha和beta链的异二聚体。IL-3Rα链是糖蛋白由360个氨基酸残基组成的Ig样结构域,其中包含287个氨基酸残基的胞外结构域，两个FnIII结构域，跨膜30个氨基酸残基的域和一个53个残基的胞内结构域。最近的研究表明白细胞介素-3受体(IL-3RA或CD123)的α-链异常经常在一些白血病病症中观察到，并且可能有助于白血病细胞的增殖优势。很多研究分析了CD123在各种血液恶性肿瘤中过度表达，包括部分急性骨髓和B淋巴细胞白血病，突发性浆细胞样树突状肿瘤(BPDCN)和毛细胞白血病。鉴于正常造血干细胞上CD123的低表达或缺失，其可以针对这种受体试作为一种药物靶点进行临床前及临床水平上的开发。由于CD123是一种膜受体，因此有两种方式来针对CD123靶点来进行药物开发，其中包括天然配体或单克隆抗体等两种常用的药物开发方式。最近的报道显示了使用由偶联至截短白喉毒素的人IL-3组成的融合分子在BPDCN和AML患者中良好的抗肿瘤活性。
技术实现思路
本专利技术的目的包括但不限于提供抗CD123抗体及其制备方法和应用。本专利技术通过我们自己设计的鼠源的Fc标签的CD123抗原来免疫小鼠，利用杂交瘤技术，筛选分子水平与细胞水平和CD123亲和力最好的杂交瘤细胞株，利用我们自己构建的细胞功能性实验在亲和力高的细胞株里筛选功能性最好的杂交瘤细胞株并测定出抗体序列，并确定了其CDR区序列。相关实验结果显示，该抗CD123抗体具有与肿瘤细胞表面的CD123蛋白特异性结合识别的能力，具有较强的亲和力和特异性。该抗CD123抗体或其功能片段具有广阔的应用前景。本专利技术是这样实现的：第一方面，本专利技术提供了一种抗CD123抗体或其功能片段，所述抗CD123抗体或其功能片段具有重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包括三个互补决定区CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；所述轻链可变区包括三个互补决定区CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；CDR-H1的氨基酸序列选自由SEQIDNO.2、12、22、32、42、51、61、71、81、89、99和107组成的组中的任意一种，或者，CDR-H1的氨基酸序列为与SEQIDNO.2、12、22、32、42、51、61、71、81、89、99和107中的任意一种序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的氨基酸序列；CDR-H2的氨基酸序列选自由SEQIDNO.3、13、23、33、43、52、62、72、82、90和100组成的组中的任意一种，或者，CDR-H2的氨基酸序列为与SEQIDNO.3、13、23、33、43、52、62、72、82、90和100中的任意一种序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的的同一性的氨基酸序列；CDR-H3的氨基酸序列选自由SEQIDNO.4、14、24、34、44、53、63、73、83、91、101和108组成的组中的任意一种，或者，CDR-H3的氨基酸序列为与SEQIDNO.4、14、24、34、44、53、63、73、83、91、101和108中的任意一种序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的的同一性的氨基酸序列；CDR-L1的氨基酸序列选自由SEQIDNO.7、17、27、37、56、66、76、94、104和111组成的组中的任意一种，或者CDR-L1的氨基酸序列为与SEQIDNO.7、17、27、37、56、66、76、94、104和111中的任意一种序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的的同一性的氨基酸序列；CDR-L2的氨基酸序列选自由SEQIDNO.8、18、28、38、47、57、67、77、95和112组成的组中的任意一种，或者，CDR-L2的氨基酸序列为与SEQIDNO.8、18、28、38、47、57、67、77、95和112中的任意一种序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的的同一性的氨基酸序列；CDR-L3的氨基酸序列选自由SEQIDNO.9、19、29、39、48、58、68、78、86、96和113组成的组中的任意一种，或者，CDR-L3的氨基酸序列为与SEQIDNO.9、19、29、39、48、58、68、78、86、96和113中的任意一种序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的的同一性的氨基酸序列；所述CD123抗体或其功能片段具有与CD123蛋白的胞外区特异性结合的活性。在本专利技术的一些实施方案中，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.2、3和4所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.7、8和9所示；或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.12、13和14所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.17、18和19所示；或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗CD123抗体或其功能片段，其特征在于，所述抗CD123抗体或其功能片段具有重链可变区和/或轻链可变区；/n所述重链可变区包括三个互补决定区CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；/n所述轻链可变区包括三个互补决定区CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；/nCDR-H1的氨基酸序列选自由SEQ ID NO.2、12、22、32、42、51、61、71、81、89、99和107组成的组中的任意一种，或者，CDR-H1的氨基酸序列为与SEQ ID NO.2、12、22、32、42、51、61、71、81、89、99和107中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；/nCDR-H2的氨基酸序列选自由SEQ ID NO.3、13、23、33、43、52、62、72、82、90和100组成的组中的任意一种，或者，CDR-H2的氨基酸序列为与SEQ ID NO.3、13、23、33、43、52、62、72、82、90和100中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；/nCDR-H3的氨基酸序列选自由SEQ ID NO.4、14、24、34、44、53、63、73、83、91、101和108组成的组中的任意一种，或者，CDR-H3的氨基酸序列为与SEQ ID NO.4、14、24、34、44、53、63、73、83、91、101和108中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；/nCDR-L1的氨基酸序列选自由SEQ ID NO.7、17、27、37、56、66、76、94、104和111组成的组中的任意一种，或者CDR-L1的氨基酸序列为与SEQ ID NO.7、17、27、37、56、66、76、94、104和111中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；/nCDR-L2的氨基酸序列选自由SEQ ID NO.8、18、28、38、47、57、67、77、95和112组成的组中的任意一种，或者，CDR-L2的氨基酸序列为与SEQ ID NO.8、18、28、38、47、57、67、77、95和112中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；/nCDR-L3的氨基酸序列选自由SEQ ID NO.9、19、29、39、48、58、68、78、86、96和113组成的组中的任意一种，或者，CDR-L3的氨基酸序列为与SEQ ID NO.9、19、29、39、48、58、68、78、86、96和113中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；/n所述CD123抗体或其功能片段具有与CD123蛋白的胞外区特异性结合的活性。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】一种抗CD123抗体或其功能片段，其特征在于，所述抗CD123抗体或其功能片段具有重链可变区和/或轻链可变区；
所述重链可变区包括三个互补决定区CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；
所述轻链可变区包括三个互补决定区CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
CDR-H1的氨基酸序列选自由SEQIDNO.2、12、22、32、42、51、61、71、81、89、99和107组成的组中的任意一种，或者，CDR-H1的氨基酸序列为与SEQIDNO.2、12、22、32、42、51、61、71、81、89、99和107中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；
CDR-H2的氨基酸序列选自由SEQIDNO.3、13、23、33、43、52、62、72、82、90和100组成的组中的任意一种，或者，CDR-H2的氨基酸序列为与SEQIDNO.3、13、23、33、43、52、62、72、82、90和100中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；
CDR-H3的氨基酸序列选自由SEQIDNO.4、14、24、34、44、53、63、73、83、91、101和108组成的组中的任意一种，或者，CDR-H3的氨基酸序列为与SEQIDNO.4、14、24、34、44、53、63、73、83、91、101和108中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；
CDR-L1的氨基酸序列选自由SEQIDNO.7、17、27、37、56、66、76、94、104和111组成的组中的任意一种，或者CDR-L1的氨基酸序列为与SEQIDNO.7、17、27、37、56、66、76、94、104和111中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；
CDR-L2的氨基酸序列选自由SEQIDNO.8、18、28、38、47、57、67、77、95和112组成的组中的任意一种，或者，CDR-L2的氨基酸序列为与SEQIDNO.8、18、28、38、47、57、67、77、95和112中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；
CDR-L3的氨基酸序列选自由SEQIDNO.9、19、29、39、48、58、68、78、86、96和113组成的组中的任意一种，或者，CDR-L3的氨基酸序列为与SEQIDNO.9、19、29、39、48、58、68、78、86、96和113中的任意一种序列具有至少75％的同一性的氨基酸序列；
所述CD123抗体或其功能片段具有与CD123蛋白的胞外区特异性结合的活性。


根据权利要求1所述的抗CD123抗体或其功能片段，其特征在于，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.2、3和4所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.7、8和9所示；
或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.12、13和14所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.17、18和19所示；
或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.22、23和24所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.27、28和29所示；
或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.32、33和34所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.37、38和39所示；
或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.42、43和44所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.27、47和48所示；
或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.51、52和53所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.56、57和58所示；
或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.61、62和63所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.66、67和68所示；
或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.71、72和73所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.76、77和78所示；
或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.81、82和83所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.17、18和86所示；
或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.89、90和91所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.94、95和96所示；
或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.99、100和101所示，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.104、8和9所示；
或者，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁金鹰，郝锋，贺锋，张文娜，白兆帅，彭浩，
申请(专利权)人：康源博创生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11