一种白细胞介素-2突变蛋白制造技术

本发明专利技术提供了一种白细胞介素

【技术实现步骤摘要】
一种白细胞介素
‑
2突变蛋白


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体而言，本专利技术涉及白细胞介素
‑
2突变 蛋白及其应用。

技术介绍

[0002]白细胞介素
‑
2(Interleukin
‑
2，IL
‑
2)又名T细胞生长因子，是主要由 活化的CD4+和CD8+T细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子。
[0003]IL
‑
2具有抗肿瘤活性，抗肿瘤机理主要有：刺激T细胞的增殖和分化， 增强T细胞对肿瘤细胞的杀伤活性；刺激单核巨噬细胞的杀伤活性；刺激 NK细胞的增殖，增强NK细胞的杀瘤活性；刺激抗体的生成而发挥抗肿 瘤作用。IL
‑
2扩增和激活先天性和适应性效应细胞的能力是其抗肿瘤活性的 基础，因此很多研究者在开发与挖掘其作为抗肿瘤药物的潜力；同时IL
‑
2 作为可以防止过度免疫反应和自身免疫的调节因子，其也可以促进CD25+ 与CD4+阳性的调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的增殖与扩增。
[0004]IL
‑
2通过与细胞表面表达的白细胞介素
‑
2受体(Interleukin
‑
2receptor， IL
‑
2R)特异性结合，触发信号级联反应，发挥免疫调节作用。T细胞、NK 细胞、B细胞及单核
‑
巨噬细胞等的表面均可表达IL
‑
2受体。通常认为，IL<br/>‑
2R 至少有三种不同的亚基，即α链、β链、γ链，参与构成IL
‑
2R复合物。IL
‑
2 与受体α链结合的亲和力是其与受体β链、γ链结合亲和力的50倍左右，IL
‑
2 结合受体β链和γ链后会引起其信号传导，而结合受体α链后并不会引起信 号传导。受体β链和γ链表达在NK细胞、单核细胞、巨噬细胞以及CD4+ 和CD8+阳性的T细胞上。
[0005]通常认为，由于调节性T淋巴细胞(Treg细胞)IL
‑
2Rα链的表达量高 于效应细胞(Teff细胞)，而IL
‑
2与IL
‑
2Rα链的亲和力又远高于其与β链 和γ链的亲和力，因此IL
‑
2与调节性T淋巴细胞(Treg细胞)结合的亲和 力高于与效应细胞(Teff细胞)结合的亲和力，从而诱导其增殖，因而在抗 肿瘤作用中产生负面影响。同时，由于IL
‑
2作为生命活动中非常重要的细胞 因子，其通过结合受体β链和γ链而诱导信号传导及激活先天性和适应性效 应细胞的功能非常强，临床中的一些试验已经体现出其表现出的额外的毒副 作用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种新的白细胞介素
‑
2(IL
‑
2)突变蛋白。相比于野 生型IL
‑
2，该突变蛋白与IL
‑
2Rα链的亲和力降低，从而与调节性T淋巴细 胞(Treg细胞)结合的亲和力降低，使其诱导调节性T淋巴细胞(Treg细 胞)增殖的能力减弱，从而避免在抗肿瘤作用中产生负面影响；同时，该突 变蛋白与IL
‑
2Rβ链的亲和力降低，从而其激活先天性和适应性效应细胞的 功能减弱，由此降低其作为药物的毒副作用。
[0007]本专利技术的技术方案如下。
[0008]一方面，本专利技术提供一种白细胞介素
‑
2(IL
‑
2)突变蛋白，所述IL
‑
2突 变蛋白在对应于SEQ ID NO.32所示野生型IL
‑
2的氨基酸序列的以下氨基 酸位点中的一个或多个处具
有氨基酸突变：16、20、23、26、42、43、45、 61、62、72、82、83、84、95、126。
[0009]优选地，与SEQ ID NO.32所示野生型IL
‑
2的氨基酸序列相比较，所 述IL
‑
2突变蛋白的氨基酸序列具有以下氨基酸突变中的一个或多个： H16A，D20S，D20A，M23R，N26Q，F42S，F42A，K43E，K43A，K43R， Y45A，E61R，E61A，E61D，E62K，E62A，E62R，L72G，P82E，R83E， D84R，D84A，D84K，D84C，E95D，Q126A。
[0010]更优选地，所述IL
‑
2突变蛋白的氨基酸序列具有所述氨基酸突变中的 1个、2个、3个、4个、5个或6个。
[0011]根据本专利技术的具体实施方式，与SEQ ID NO.32所示野生型IL
‑
2的氨 基酸序列相比较，所述IL
‑
2突变蛋白的氨基酸序列具有如下氨基酸突变： (1)H16A，F42S，K43E，E61R，E62K，D84R；(2)D20S，F42S，K43E， E61R，E62K；(3)H16A；(4)D20A；(5)F42A；(6)K43A；(7)E61A；(8)E62A； (9)D84A；(10)Q126A；(11)K43E；(12)D84R；(13)K43R；(14)E61D；(15) E95D；(16)E62R；(17)E61R；(18)K43E，E62R；(19)K43E；(20)K43A， E62A；(21)F42A，Y45A，L72G，D84R；(22)R83E；(23)P82E；(24)M23R； (25)E62A，D84R；(26)N26Q；D84R；(27)E62A，D84K；(28)N26Q，D84K； 或(29)D84C。
[0012]根据本专利技术的具体实施方式，本专利技术提供的IL
‑
2突变蛋白包含SEQ IDNO.1至SEQ ID NO.29中任一个所示的氨基酸序列。
[0013]另一方面，本专利技术提供一种核酸分子，所述核酸分子包含编码所述IL
‑
2 突变蛋白的核苷酸序列。
[0014]再一方面，本专利技术提供包含所述核酸分子的载体。所述载体可以为真核 表达载体、原核表达载体、人工染色体及噬菌体载体等。
[0015]又一方面，本专利技术提供包含所述核酸分子或载体的宿主细胞，或者被所 述核酸分子或载体转化或转染的宿主细胞。所述宿主细胞可以是任何原核或 真核细胞，例如细菌或昆虫、真菌、植物或动物细胞。
[0016]还一方面，本专利技术提供一种融合蛋白，所述融合蛋白包含本专利技术提供 的IL
‑
2突变蛋白以及与其融合的第二部分，所述第二部分为抗体或其抗原 结合片段。优选地，所述抗体为单克隆抗体或单链抗体。优选地，所述抗 原结合片段为scFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv片段。
[0017]根据本专利技术的具体实施方式，所述融合蛋白为抗体构建体，所述抗体构 建体包含抗体的重链和轻本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种白细胞介素
‑
2(IL
‑
2)突变蛋白，与SEQ ID NO.32所示野生型IL
‑
2的氨基酸序列相比较，所述IL
‑
2突变蛋白的氨基酸序列具有以下氨基酸突变中的一个或多个：H16A，D20S，D20A，M23R，N26Q，F42S，F42A，K43E，K43A，K43R，Y45A，E61R，E61A，E61D，E62K，E62A，E62R，L72G，P82E，R83E，D84R，D84A，D84K，D84C，E95D，Q126A。2.根据权利要求1所述的IL
‑
2突变蛋白，其特征在于，所述IL
‑
2突变蛋白的氨基酸序列具有如下氨基酸突变：(1)H16A，F42S，K43E，E61R，E62K，D84R；(2)D20S，F42S，K43E，E61R，E62K；(3)H16A；(4)D20A；(5)F42A；(6)K43A；(7)E61A；(8)E62A；(9)D84A；(10)Q126A；(11)K43E；(12)D84R；(13)K43R；(14)E61D；(15)E95D；(16)E62R；(17)E61R；(18)K43E，E62R；(19)K43E；(20)K43A，E62A；(21)F42A，Y45A，L72G，D84R；(22)R83E；(23)P82E；(24)M23R；(25)E62A，D84R；(26)N26Q；D84R；(27)E62A，D84K；(28)N26Q，D84K；或(29)D84C；优选地，所述IL
‑
2突变蛋白包含SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.29中任一个所示的氨基酸序列。3.一种核酸分子，所述核酸分子包含编码根据权利要求1或2所述的IL
‑
2突变蛋白的核苷酸序列。
4.一种载体，所述载体包含权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁金鹰，彭浩，郝锋，贺锋，吴国进，
申请(专利权)人：康源博创生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：