本发明专利技术提供了一种特异性识别并结合FAIM3的全人源抗体，其特征在于，其为重组免疫球蛋白，结构形式为scFv‑Fc，scFv指的是单链抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：3，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，Fc指的是恒定区。特异性识别FAIM3的全人源抗体的序列为SEQ ID NO：4。该抗体能够特异性地识别并结合人FAIM3受体。
【技术实现步骤摘要】
一种特异性识别FAIM3受体的全人源单抗
本专利技术属于生物医药
，涉及一种抗FAIM3受体的单克隆抗体及其制备方法。具体而言本专利技术公开了一种能够特异识别FAIM3受体的单克隆抗体。
技术介绍
Fasapoptoticinhibitorymolecule3(FAIM3)是IgM的特异性受体（FcμR），在人B,T,NK细胞中广泛表达[1]。FAIM3是由390个氨基酸组成的I型跨膜唾液酸糖蛋白,分子质量为60kD。FAIM3（FcμR）特异性地结合IgM,参与维护IgM的内环境稳定[2，3]。参考文献：1.KubagawaH,OkaS,KubagawaY,etal.IdentityoftheelusiveIgMFcreceptor(FcμR)inhumans.JExpMed,2009,206:2779–27932.OuchidaR,MoriH,OhnoH,etal.FcμR(Toso/Faim3)isnotaninhibitorofFas-mediatedcelldeathinmouseTandBcells.Blood,2013,121:2368–23703.OuchidaR,MoriH,HaseK,etal.CriticalroleoftheIgMFcreceptorinIgMhomeostasis,B-cellsurvival,andhumoralimmuneresponses.ProcNatlAcadSciUSA,2012,109:15989–15990
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能特异性识别FAIM3(FcμR)的单克隆抗体或抗体片段及其制备方法，该抗体或抗体片段可以识别结合FAIM3盒。为了达到上述目的，本专利技术提供了一种特异性识别FAIM3的全人源单克隆抗体，其特征在于，其为重组免疫球蛋白，结构为scFv-Fc，scFv指的是单链抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：3，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：2，Fc指的是恒定区。特异性识别FAIM3的全人源抗体的序列为SEQIDNO：4。所述的重链可变区氨基酸序列包括SEQIDNO：3或与SEQIDNO：3中的氨基酸至少有80％同源性的氨基酸序列。所述的轻链可变区氨基酸序列包括SEQIDNO：2或与SEQIDNO：2中的氨基酸至少有80％同源性的氨基酸序列。所述的特异性识别FAIM3的全人源抗体特异结合FAIM3抗原的胞外区部分的1～124氨基酸之间。本专利技术还提供了一种基因工程抗体，其特征在于，其与上述的特特异性识别FAIM3的全人源抗体的单链抗体具有30％以上的同源序列。所述的基因工程抗体包含Fab片段，F(ab’)2片段，F(ab)’片段，Fd片段，Fv片段，scFc片段和Fc片段中的一种，上述各片段中两种以上的组合，或上述各片段中的至少一种与其它蛋白或肽链形成的衍生物。所述的基因工程抗体的重链CDR1区序列为GGTLSGY，重链CDR2区序列为IPTFEE，重链CDR3区序列为STILDDWYAMDV，轻链CDR1区序列为RSSQSLLNSNGYNFLD，轻链CDR2区序列为LGSNRAS，轻链CDR3区序列为MQPLQTPTT。所述的基因工程抗体的重链和轻链的CDR1,CDR2,CDR3序列内一个或少数几个氨基酸突变的序列。少数几个氨基酸突变一般指抗体CDR区3个以内的氨基酸随机突变。本专利技术还提供了一种编码特异性识别FAIM3的全人源抗体的核苷酸序列，其序列为SEQIDNO：1。所述的核苷酸序列编码上述的特异性识别FAIM3的全人源抗体。本专利技术提供的单克隆抗体是一种单链抗体，通过筛选全人源单链抗体噬菌体库得到，命名为Anti-FAIM3-Fc，经过检测该单链抗体对FAIM3选择性结合。单独使用该抗体的免疫印迹即可特异性检测出人源FAIM3胞外片段。附图说明图1.FAIM3抗原表达纯化SDS-PAGE结果图；图2.FAIM3抗体ELISA结果图；图3.FAIM3抗体表达纯化SDS-PAGE结果图；图4.FAIM3抗体免疫印记结果图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1、FAIM3胞外段抗原的表达纯化1、所用材料：(1)人FAIM3基因ORF全长cDNA（购自北京义翘神州科技有限公司，货号HG13556-G）。（2）真核表达载体pTT5-6xHis为公司自备。（3）BamH1和XbaI限制性内切酶购自NEB公司。（4）FreeStyle培养基购自赛默飞公司。（5）质粒抽提试剂盒购自Qiagen公司。（6）Ni-NTA-Agarose购自Qiagen公司。（7）293Fectin转染试剂(Invitrogen公司，货号12347500)。(8)Nanodrop(赛默飞公司，型号Nano200)。2、实验方法：1)以人源FAIM3基因cDNA为模板进行PCR扩增FAIM3胞外段序列（1-124aa）。扩增出的基因片段经限制性内切酶BamH1和XbaI酶切后连接至pTT5-6xHis载体。通过测序验证载体构建正确。2)将293Fectin转染试剂与上述获得的真核抗原表达载体质粒按照体积质量比30微升：15微克的比例混合后加入30毫升的293F悬浮细胞后，37℃，200rpm摇96小时后，离心并收集上清，采用Ni-NTA-Agarosebeads亲和纯化，在蛋白纯化仪上对FAIM3-Ecto抗原进行凝胶层析纯化，最后用紫外吸光法检测抗原浓度，经SDS-PAGE检测其纯度（如图1所示）。实施例2、全人源单链抗体库构建及筛选1、所用材料：(1)高吸附酶联免疫反应微孔板购自康宁公司。（2）Nanodrop(赛默飞公司，型号Nano200)。（3）Ni-ChargedMagbeads的磁珠购自南京金斯瑞公司,货号L00295。（4）GelRed核酸染料购自赛默飞公司。(5)Anti-M13HRP抗体购自赛默飞公司。(6)M13辅助噬菌体购自LifeTechnologies，货号18311019。(7)XL1-Blue细菌购自AgilentTechnologies，货号200228。(8)显影液ABTS溶液购自赛默飞公司，货号002024。（9）质粒抽提试剂盒购自Qiagen公司。（10）SfiI限制性内切酶购自NEB公司。（11）pFUSE-IgG1表达载体购自Invivogen公司。(12)pComb3载体购自Addgene(Plasmid#63888)。（13）SOC培养基购自生工公司。2、实验方法：1)本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种特异性识别并结合FAIM3受体的全人源单抗，其特征在于，其为重组免疫球蛋白，结构为scFv-Fc，scFv指的是单链抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：3，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，Fc指的是恒定区。/n
【技术特征摘要】
1.一种特异性识别并结合FAIM3受体的全人源单抗，其特征在于，其为重组免疫球蛋白，结构为scFv-Fc，scFv指的是单链抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：3，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：2，Fc指的是恒定区。
2.如权利要求1所述的特异性结合FAIM3受体的全人源单抗，其特征在于，所述的恒定区包括CH2恒定区和CH3恒定区。
3.如权利要求1所述的特异性结合FAIM3受体的全人源单抗，其特征在于，其序列为SEQIDNO：4。
4.如权利要求1所述的特异性结合FAIM3受体的全人源单抗，其特征在于，所述的特异性结合FAIM3受体的全人源单抗特异识别FAIM3抗原的胞外区部分的1-124氨基酸之间。
5.一种基因工程抗体，其特征在于，其与权利要求1-3中任一项所述的特异性结合FAIM3受体的全人源单抗的单链抗体具有30％以上的同源序列，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：汤化，李晓曦，魏庄，
申请(专利权)人：上海米地生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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