特异性结合人OX40的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种特异性结合人OX40的单克隆抗体及其应用，特异性结合人OX40(CD134)的单克隆抗体又名OX40抗体、抗OX40或抗OX40抗体，该抗体包括重链和轻链，其中重链的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示，轻链的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示。本发明专利技术提供的抗体能显著增加活化T细胞的增殖，对T细胞增殖的增强作用具有剂量依赖效应，可应用于制备治疗或延缓癌症、免疫疾病和T细胞功能障碍性疾病药物，具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
特异性结合人OX40的单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及抗体
，具体涉及一种特异性结合人OX40的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
OX40又名CD134，是表达于细胞毒性T细胞和Treg细胞(调节型T细胞)的活化受体，是肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF4)，为I型跨膜糖蛋白。OX40(CD134)是免疫反应调节的一个重要靶点，属于免疫共刺激通路(T细胞共刺激分子靶点)，该靶点可以增强抗肿瘤免疫反应。OX40信号可以激活下游的NF-κB、PI3K和PKB通路，这些通路的持续激活最终能够延长T细胞的存活时间，并扩展T细胞记忆，促进T细胞的细胞杀伤能力；另外，OX40还能通过抑制调节性T细胞(Treg)的分化和活性，改善肿瘤微环境中的免疫抑制作用，进一步增强效应T细胞的功能。临床前研究显示，OX40同时抑制Treg细胞的生成和功能，以增强T细胞的活化，OX40抗体或者OX40配体(OX40L)与OX40结合后，可以抑制细胞凋亡，导致T细胞增殖，对肿瘤细胞发起免疫攻击，有时候还会发生肿瘤特异性的治疗效应。目前全球尚未有抗OX40抗体药物获批上市。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种特异性结合人OX40(CD134)的单克隆抗体及其应用。该抗体能显著增加活化T细胞的增殖，对T细胞增殖的增强作用具有剂量依赖效应，可应用于制备治疗或延缓癌症、免疫疾病和T细胞功能障碍性疾病药物。本专利技术的目的可通过以下的技术方案来实现：本专利技术提供了一种特异性结合人OX40(CD134)的抗体，又称为OX40抗体、抗OX40或抗OX40抗体，该抗体包括重链(HC)和轻链(LC)；其中，重链为如下(A1)-(A3)任一：(A1)氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.1所示的蛋白质；(A2)将(A1)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；(A3)与(A1)-(A2)中任一所限定的氨基酸序列具有90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上或99％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；轻链为如下(B1)-(B3)任一：(B1)氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.2所示的蛋白质；(B2)将(B1)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；(B3)与(B1)-(B2)中任一所限定的氨基酸序列具有90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上或99％以上同一性且具有相同功能的蛋白质。本专利技术提供的SEQIDNo.1所示的蛋白质序列如下：LARPGASVKMSCKASGYTFTDYTIHWVKQRPGQGLEWIGYINPSSGYTEENQMFTDKTTLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARWAGYDYAFAMDYWGQGTSVTVS；SEQIDNo.2所示的蛋白质序列如下：MYASLGERVTITCKASQDINSYLNWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDVGIYYCLQYDEFPLTSGAGTKLE。抗体可由宿主细胞和分离的细胞所产生；优选地，宿主或分离的细胞是杂交瘤细胞或CHO细胞。本专利技术提供一种特异性结合人OX40(CD134)的抗体的制备方法，该抗体制备方法包括以下步骤：步骤a)：将人OX40Fc融合蛋白(可购自上海聿才生物科技有限公司；Lot：0331291)免疫Balb/C小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞；步骤b)：将步骤a)所得小鼠脾脏脾细胞，与骨髓瘤细胞混合，用50％PEG2000进行融合；步骤c)：将上述b)所得融合细胞，用HAT选择性培养基选择性培养，以筛选融合的杂交瘤细胞，采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养；步骤d)：将上述c)所得杂交瘤细胞，以5×106细胞/0.5ml/只腹腔注射免疫缺陷DKO小鼠三只。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。1周后用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。本专利技术提供的特异性结合人OX40的抗体能显著增加活化T细胞的增殖，对T细胞增殖的增强作用具有剂量依赖效应。本专利技术还保护包括上述抗体的药物组合物，药物组合物中还可以包括药学上可接受的载体或赋形剂。本专利技术提供了一种核酸，该核酸编码上述抗体的重链(HC)和/或轻链(LC)。核酸可以是人工合成序列，或是抗体重链或轻链可变区序列的分离的核酸。优选地，上述编码抗体重链的核酸为如下(C1)-(C3)任一：(C1)核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.3所示的核酸；(C2)在严格条件下与(C1)限定的核苷酸序列杂交且编码具有相同功能的核酸；(C3)与(C1)-(C2)中任一所限定的核苷酸序列具有90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上或99％以上同源性且编码具有相同功能的核酸；和/或编码抗体轻链的核酸为如下(D1)-(D3)任一：(D1)核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.4所示的核酸；(D2)在严格条件下与(D1)限定的核苷酸序列杂交且编码具有相同功能的核酸；(D3)与(D1)-(D2)中任一所限定的核苷酸序列具有90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上或99％以上同源性且编码具有相同功能的核酸。需要说明的是，本专利技术所述的严格条件可为如下：50℃，在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5MNaPO4和1mMEDTA的混合溶液中杂交，在50℃，2×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5MNaPO4和1mMEDTA的混合溶液中杂交，在50℃，1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5MNaPO4和1mMEDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.5×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5MNaPO4和1mMEDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5MNaPO4和1mMEDTA的混合溶液中杂交，在65℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；也可为：在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。抗体可由核酸序列编码，核酸编码如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的成熟的重链或轻链可变区序列的序列或其子序列。核酸序列包括SEQIDNO.3和SEQIDNO.4的简并序列。在具体方面中，核酸编码具有如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的重链或轻链可变区序列经一个或多个氨基酸残基取代、添加或缺失的氨基酸序列。核酸序列包括表达控制序列或载体。本专利技术还保护包含上述核酸的重组载体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合人OX40的抗体，其特征在于：/n所述抗体包括重链和轻链；/n其中，所述重链为如下(A1)-(A3)任一：/n(A1)氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示的蛋白质；/n(A2)将(A1)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；/n(A3)与(A1)-(A2)中任一所限定的氨基酸序列具有90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上或99％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；/n所述轻链为如下(B1)-(B3)任一：/n(B1)氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示的蛋白质；/n(B2)将(B1)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；/n(B3)与(B1)-(B2)中任一所限定的氨基酸序列具有90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上或99％以上同一性且具有相同功能的蛋白质。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合人OX40的抗体，其特征在于：
所述抗体包括重链和轻链；
其中，所述重链为如下(A1)-(A3)任一：
(A1)氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.1所示的蛋白质；
(A2)将(A1)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；
(A3)与(A1)-(A2)中任一所限定的氨基酸序列具有90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上或99％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；
所述轻链为如下(B1)-(B3)任一：
(B1)氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.2所示的蛋白质；
(B2)将(B1)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；
(B3)与(B1)-(B2)中任一所限定的氨基酸序列具有90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上或99％以上同一性且具有相同功能的蛋白质。


2.根据权利要求1所述的特异性结合人OX40的抗体，其特征在于：
所述抗体能显著增加活化T细胞的增殖，对T细胞增殖的增强作用具有剂量依赖效应。


3.一种包括权利要求1所述抗体的药物组合物。


4.一种核酸，其特征在于：所述核酸编码权利要求1所述抗体的重链和/或轻链。


5.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱蓓莉，翟伟华，张莹，李雪飞，李喆，杨俊杰，
申请(专利权)人：郑州航空港百桥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41