双功能分子制造技术

本公开提供了包括PD

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双功能分子
专利

[0001]本公开总体涉及靶向免疫检查点分子(例如，PD
‑
L1)并且阻断抗肿瘤免疫抑制(ATIS)细胞因子(例如，IL
‑
1或TGFβ)的活性或刺激免疫的新型双功能分子。

技术介绍

[0002]程序性死亡1(PD
‑
1)及其配体PD
‑
L1和PD
‑
L2是T细胞介导的免疫应答的调节中的关键共抑制分子。PD
‑
1是一种在外周组织中的激活的T细胞的表面上表达的具有单个胞外免疫球蛋白超家族(IgSF)V
‑
集结构域(V
‑
set domain)的I型膜蛋白(Zhang X等人,《免疫力(Immunity)》,2004,20(3):337
‑
347)。PD
‑
L1和PD
‑
L2通常在树突状细胞和巨噬细胞上表达，并且它们的胞外结构域由膜远端IgSF V
‑
集结构域和膜近端IgSF C
‑
set结构域构成(Latchman Y等人,《自然免疫学(Nature Immunology)》,2001,2(3):261
‑
268)。PD
‑
1与其两个配体的连接通过PD
‑
1的含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序和基于免疫受体酪氨酸的开关基序的细胞质结构域启动共抑制信号传导，从而引起SHP磷酸酶的激活，所述激活通过去磷酸化参与信号传导的效应分子来下调TCR信号传导(Chemnitz J M等人,《免疫学杂志(J.Immunol.)》,2004,173(2):945
‑
954)。因此，PD
‑
1信号传导可防止过度或有害的炎症并将对自身抗原的免疫耐受性维持在正常条件下(Collins A V等人,《免疫力》,2002,17(2):201
‑
210)。
[0003]PD
‑
L1还通过与另一种受体B7.1(也称为B7
‑
1或CD80)相互作用来负调节T细胞功能。PD
‑
L1/PD
‑
1和PD
‑
L1/B7.1复合物的形成负调节T细胞受体信号传导，从而导致随后下调T细胞激活并抑制抗肿瘤免疫活性(Butte M J等人,《免疫力》,2007,27(1):111
‑
122)。
[0004]PD
‑
L1在不同的肿瘤中经常过度表达并且其与T细胞上的PD
‑
1相互作用使癌细胞能够避开T细胞介导的免疫应答(Okazaki T等人,《自然免疫学》,2013,14(12):1212
‑
1218)。因此，阻断PD
‑
1/PD
‑
L1相互作用可以恢复T细胞激活和抗肿瘤应答(Callahan M K等人,《免疫力》,2016,44(5):1069
‑
1078)。基于抗体的PD
‑
1/PD
‑
L1阻断疗法如阿特珠单抗(atezolizumab)(Rittmeyer A等人,《柳叶刀(The Lancet)》,2017,389(10066):255
‑
265)、阿维鲁单抗(avelumab)(Hamilton G等人,《生物治疗专家观点(Expert Opinion on Biological Therapy)》,2017,17(4):515
‑
523)和德瓦鲁单抗(durvalumab)(Brower V,《柳叶刀肿瘤学(The Lancet Oncology)》,2016,17(7):e275)的成功意味着在对抗人类癌症，尤其是实体瘤方面取得了突破性进展。尽管已显示肿瘤细胞和/或浸润性免疫细胞表达PD
‑
L1与对PD
‑
1/PD
‑
L1靶向疗法的临床应答之间存在关联，但这种关联并非完美无缺(Herbst,R.等人,《自然》515,563
–
567(2014)；Taube J M等人,《临床癌症研究(Clinical cancer research)》,2014,20(19):5064
‑
5074)。只有少数PD
‑
L1阳性肿瘤对这些治疗有应答，然而某些PD
‑
L1阴性肿瘤仍对治疗有应答。这增加了另外的因素控制患者对PD
‑
1/PD
‑
L1靶向疗法的应答的可能性，并且必须鉴定另外的预测性生物标志物以改善这些药剂的临床使用。
[0005]Mariathasan S等人发现缺乏应答与成纤维细胞中转化生长因子β(TGF
‑
β)信号传
导的特征相关(Mariathasan S等人,《自然》,2018,554(7693):544
‑
548)。David JM等人还发现，作为一种已知诱导上皮间充质转化(EMT)并抑制抗肿瘤免疫的多效性细胞因子，TGF
‑
β可以上调多种上皮NSCLC细胞系中的肿瘤PD
‑
L1表达，并且上调与作为TGF
‑
β信号传导的关键下游效应子的Smad2的磷酸化有关(David J M等人,《肿瘤免疫学(Oncoimmunology)》,2017,6(10):e1349589)。在小鼠中，治疗性施用TGF
‑
β阻断抗体和抗PD
‑
L1减少了基质细胞中的TGF
‑
β信号传导，促进T细胞渗透到肿瘤中心，并激发强烈的抗肿瘤免疫和肿瘤消退(Mariathasan S等人,《自然》,2018,554(7693):544
‑
548)。
[0006]然而，抗PD
‑
L1抗体的低亲和力仍然对实现高治疗功效和低毒副作用提出了挑战。
[0007]因此，需要具有对PD
‑
L1具有高结合亲和力、改善的治疗功效和减少的毒副作用的治疗分子。

技术实现思路

[0008]在整个本公开中，本文使用的冠词“一个”、“一种”和“所述”是指冠词的语法宾语中的一个或多于一个(即，至少一个)。举例来说，“一种抗体”意指一种抗体或多于一种抗体。
[0009]在一个方面，本公开提供了一种双功能分子，其包括与免疫检查点分子结合的第一部分和阻断白细胞介素
‑
1(IL
‑
1)的活性的第二部分。
[0010]在某些实施例中，所述第一部分包括免疫刺激性检查点分子的激动剂，任选地，所述免疫刺激性检查点分子选自由以下组成的组：CD27、CD70、CD28、CD80(B7
‑
1)、CD86(B7
‑
2)、CD40、CD40L(C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双功能分子，其包括与免疫检查点分子结合的第一部分和阻断白细胞介素
‑
1(IL
‑
1)活性的第二部分。2.根据权利要求1所述的双功能分子，其中所述第一部分包括免疫刺激性检查点分子的激动剂，任选地，所述免疫刺激性检查点分子选自由以下组成的组：CD27、CD70、CD28、CD80(B7
‑
1)、CD86(B7
‑
2)、CD40、CD40L(CD154)、CD122、CD137、CD137L、OX40(CD134)、OX40L(CD252)、GITR、ICOS(CD278)和ICOSLG(CD275)、CD2、ICAM
‑
1、LFA
‑
1(CD11a/CD18)、CD30、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160和CD83。3.根据权利要求1所述的双功能分子，其中所述第一部分包括免疫抑制性检查点分子的拮抗剂，任选地，所述免疫抑制性检查点分子选自由以下组成的组：A2AR、B7
‑
H3(CD276)、B7
‑
H4(VTCN1)、BTLA(CD272)、CTLA
‑
4(CD152)、IDO1、IDO2、TDO、KIR、LAG3、NOX2、PD
‑
1、PD
‑
L1、PD
‑
L2、TIM
‑
3、VISTA、SIGLEC7(CD328)、TIGIT、PVR(CD155)、SIGLEC9(CD329)、CD160、LAIR1、2B4(CD244)、CD47、B7
‑
H5。4.根据权利要求3所述的双功能分子，其中所述免疫检查点分子是PD
‑
L1。5.根据前述权利要求中任一项所述的双功能分子，其中所述第一部分包括针对PD
‑
L1的抗体或其抗原结合片段，并且所述第二部分包括IL
‑
1结合部分或IL
‑
1受体(IL
‑
1R)结合部分。6.根据权利要求5所述的双功能分子，其中所述IL
‑
1结合部分包括IL
‑
1R或其片段或变体、或针对IL
‑
1的抗体或其抗原结合片段。7.根据权利要求6所述的双功能分子，其中所述针对IL
‑
1的抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区和/或轻链可变区来自选自由以下组成的组的抗IL
‑
1α抗体：XB2001、鲁吉珠单抗、LY2189102和贝迈奇单抗，或者来自选自由以下组成的组的抗IL
‑
1β抗体：SSGJ
‑
613、CDP484、卡那单抗和吉伏组单抗。8.根据权利要求6所述的双功能分子，其中所述针对IL
‑
1的抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包括：包括SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:112的序列的HCDR1；包括SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:113的序列的HCDR2；和包括SEQ ID NO:106或SEQ ID NO:114的序列的HCDR3，所述轻链可变区包括：包括SEQ IDNO:107或SEQ ID NO:115的序列的LCDR1；包括SEQ ID NO:108或SEQ ID NO:116的序列的LCDR2；和包括SEQ ID NO:109或SEQ ID NO:117的序列的LCDR3。9.根据权利要求6所述的双功能分子，其中所述针对IL
‑
1的抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包括：包括SEQ ID NO:104的序列的HCDR1；包括SEQ ID NO:105的序列的HCDR2；和包括SEQ ID NO:106的序列的HCDR3，所述轻链可变区包括：包括SEQ ID NO:107的序列的LCDR1；包括SEQ ID NO:108的序列的LCDR2；和包括SEQ ID NO:109的序列的LCDR3。10.根据权利要求6所述的双功能分子，其中所述针对IL
‑
1的抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包括：包括SEQ ID NO:112的序列的HCDR1；包括SEQ ID NO:113的序列的HCDR2；和包括SEQ ID NO:114的序列的HCDR3，所述轻链可变区包括：包括SEQ ID NO:115的序列的LCDR1；包括SEQ ID NO:116的序列的LCDR2；和包括SEQ ID NO:117的序列的LCDR3。11.根据权利要求6所述的双功能分子，其中所述针对IL
‑
1的抗体或其抗原结合片段包
括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:110和与其具有至少80％序列同一性的同源序列，所述轻链可变区包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:111和与其具有至少80％序列同一性的同源序列。12.根据权利要求6所述的双功能分子，其中所述针对IL
‑
1的抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:102和与其具有至少80％序列同一性的同源序列，所述轻链可变区包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:103和与其具有至少80％序列同一性的同源序列。13.根据权利要求6所述的双功能分子，其中所述针对IL
‑
1的抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:110和与其具有至少80％序列同一性的同源序列，所述轻链可变区包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:111和与其具有至少80％序列同一性的同源序列。14.根据权利要求5所述的双功能分子，其中所述IL
‑
1R结合部分包括白细胞介素
‑
1受体拮抗剂或其片段或变体、或针对IL
‑
1R的抗体或其抗原结合片段。15.根据权利要求14所述的双功能分子，其中所述针对IL
‑
1R的抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区和/或轻链可变区来自选自由以下组成的组的抗体：司柏索利单抗、艾特利单抗、伊姆西多单抗、AMG 108、迈瑞利单抗、尼达利单抗、MEDI8968、REGN6490、HB0034和CSC012。16.一种双功能分子，其包括与PD
‑
L1结合的第一部分和a)阻断免疫抑制性细胞因子的活性或b)刺激免疫的第二部分，其中所述第一部分包括针对PD
‑
L1的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变(VH)区和/或轻链可变(VL)区，其中所述重链可变区包括：a)HCDR1，所述HCDR1包括DYYMN(SEQ ID NO:1)或与DYYMN具有至少80％序列同一性的同源序列，b)HCDR2，所述HCDR2包括DINPNNX1X2TX3YNHKFKG(SEQ ID NO:19)或与DINPNNX1X2TX3YNHKFKG具有至少80％序列同一性的同源序列，以及c)HCDR3，所述HCDR3包括WGDGPFAY(SEQ ID NO:3)或与WGDGPFAY具有至少80％序列同一性的同源序列，和/或其中所述轻链可变区包括：d)LCDR1，所述LCDR1包括选自由KASQNVX4X5X6VA(SEQ ID NO:20)或与KASQNVX4X5X6VA具有至少80％序列同一性的同源序列组成的组的序列，e)LCDR2，所述LCDR2包括选自由SX7SX8RYT(SEQ ID NO:21)或与SX7SX8RYT具有至少80％序列同一性的同源序列组成的组的序列，以及f)LCDR3，所述LCDR3包括选自由QQYSNYPT(SEQ ID NO:6)或与QQYSNYPT具有至少80％序列同一性的同源序列组成的组的序列；其中X1是G或A，X2是G或D或Q或E或L，X3是S或M或Q或L或V，X4是G或P或K，X5是A或G，X6是A或I，X7是A或N或R或V，并且X8是N或H或V或D。17.根据权利要求16所述的双功能分子，其中所述重链可变区包括：a)HCDR1，所述HCDR1包括SEQ ID NO:1的序列，
b)HCDR2，所述HCDR2包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:2、SEQID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18，以及c)HCDR3，所述HCDR3包括SEQ ID NO:3的序列，和/或轻链可变区，所述轻链可变区包括：d)LCDR1，所述LCDR1包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:4、SEQID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9，e)LCDR2，所述LCDR2包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:5、SEQID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12，以及f)LCDR3，所述LCDR3包括SEQ ID NO:6的序列。18.根据权利要求17所述的双功能分子，其中所述重链可变区选自由以下组成的组：a)包括以下的重链可变区：包括SEQ ID NO:1的序列的HCDR1、包括SEQ ID NO:2的序列的HCDR2和包括SEQ ID NO:3的序列的HCDR3；b)包括以下的重链可变区：包括SEQ ID NO:1的序列的HCDR1、包括SEQ ID NO:13的序列的HCDR2和包括SEQ ID NO:3的序列的HCDR3；c)包括以下的重链可变区：包括SEQ ID NO:1的序列的HCDR1、包括SEQ ID NO:14的序列的HCDR2和包括SEQ ID NO:3的序列的HCDR3；d)包括以下的重链可变区：包括SEQ ID NO:1的序列的HCDR1、包括SEQ ID NO:15的序列的HCDR2和包括SEQ ID NO:3的序列的HCDR3；以及e)包括以下的重链可变区：包括SEQ ID NO:1的序列的HCDR1、包括SEQ ID NO:17的序列的HCDR2和包括SEQ ID NO:3的序列的HCDR3。19.根据权利要求17或18所述的双功能分子，其中所述轻链可变区选自由以下组成的组：a)包括以下的轻链可变区：包括SEQ ID NO:4的序列的LCDR1、包括SEQ ID NO:5的序列的LCDR2和包括SEQ ID NO:6的序列的LCDR3；b)包括以下的轻链可变区：包括SEQ ID NO:9的序列的LCDR1、包括SEQ ID NO:5的序列的LCDR2和包括SEQ ID NO:6的序列的LCDR3；c)包括以下的轻链可变区：包括SEQ ID NO:8的序列的LCDR1、包括SEQ ID NO:5的序列的LCDR2和包括SEQ ID NO:6的序列的LCDR3；d)包括以下的轻链可变区：包括SEQ ID NO:4的序列的LCDR1、包括SEQ ID NO:12的序列的LCDR2和包括SEQ ID NO:6的序列的LCDR3；以及e)包括以下的轻链可变区：包括SEQ ID NO:4的序列的LCDR1、包括SEQ ID NO:11的序列的LCDR2和包括SEQ ID NO:6的序列的LCDR3。20.根据权利要求16到19中任一项所述的双功能分子，其中所述针对PD
‑
L1的抗体或其抗原结合片段进一步包括重链HFR1、HFR2、HFR3和HFR4中的一个或多个，和/或轻链LFR1、LFR2、LFR3和LFR4中的一个或多个，其中：a)所述HFR1包括QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYX9FT(SEQ ID NO:40)或与QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYX9FT具有至少80％序列同一性的同源序列，b)所述HFR2包括WVRQAPGQX
10
LEWMG(SEQ ID NO:41)或与WVRQAPGQX
10
LEWMG具有至少
80％序列同一性的同源序列，c)所述HFR3序列包括RVTX
16
TVDX
11
SISTAYMELSRLRSDDTAVYYCX
12
X
13
(SEQ ID NO:42)或与RVTX
16
TVDX
11
SISTAYMELSRLRSDDTAVYYCX
12
X
13
具有至少80％序列同一性的同源序列，d)所述HFR4包括WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:25)或与WGQGTLVTVSS具有至少80％序列同一性的同源序列，e)所述LFR1包括DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:26)或与DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC具有至少80％序列同一性的同源序列，f)所述LFR2包括WYQQKPGKX
14
PKLLIY(SEQ ID NO:43)或与WYQQKPGKX
14
PKLLIY具有至少80％序列同一性的同源序列，g)所述LFR3包括GVPX
15
RFSGSGSGTDFTX
17
TISSLQPEDIATYYC(SEQ ID NO:44)或与GVPX
15
RFSGSGSGTDFTX
17
TISSLQPEDIATYYC具有至少80％序列同一性的同源序列，并且h)所述LFR4包括FGQGTKLEIK(SEQ ID NO:29)或与FGQGTKLEIK具有至少80％序列同一性的同源序列，其中X9是T或V，X
10
是G或S，X
11
是T或K，X
12
是A或V，X
13
是R或K，X
14
是A或S，X
15
是S或D，X
16
是M或V，并且X
17
是F或L。21.根据权利要求20所述的双功能分子，其中：所述HFR1包括选自由SEQ ID NO:22和30组成的组的序列，所述HFR2包括选自由SEQ ID NO:23和31组成的组的序列，所述HFR3包括选自由SEQ ID NO:24和32
‑
35组成的组的序列，所述HFR4包括SEQ ID NO:25的序列，所述LFR1包括来自由SEQ ID NO:26组成的组的序列，所述LFR2包括选自由SEQ ID NO:27和36组成的组的序列，所述LFR3包括选自由SEQ ID NO:28和37
‑
38、39、45组成的组的序列，并且所述LFR4包括SEQ ID NO:29的序列。22.根据权利要求16到21中任一项所述的双功能分子，其中所述重链可变区包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60和与其具有至少80％序列同一性的其同源序列。23.根据权利要求16到22中任一项所述的双功能分子，其中所述轻链可变区包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和与其具有至少80％序列同一性的其同源序列。24.根据权利要求16所述的双功能分子，其中所述针对PD
‑
L1的抗体或其抗原结合片段包括选自由以下组成的组的一对重链可变区和轻链可变区序列：SEQ ID NO:49/54、50/54、51/54、52/54、49/55、50/55、51/55、52/55、58/62、58/63、58/64、58/65、59/62、59/63、59/64、59/65、60/62、60/63、60/64和60/65。25.根据权利要求16到24中任一项所述的双功能分子，其中所述针对PD
‑
L1的抗体或其抗原结合片段进一步包括一个或多个氨基酸残基取代或修饰，但仍保留对PD
‑
L1的特定结合特异性和/或亲和力。
26.根据权利要求25所述的双功能分子，其中所述取代或修饰中的至少一个取代或修饰在所述CDR序列中的一个或多个CDR序列中和/或在所述VH或VL序列的非CDR区中的一个或多个非CDR区中。27.根据权利要求16到26中任一项所述的双功能分子，其中所述针对PD
‑
L1的抗体或其抗原结合片段进一步包括免疫球蛋白恒定区，任选地人Ig的恒定区，或任选地人IgG的恒定区。28.根据权利要求27所述的双功能分子，其中所述恒定区包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc区。29.根据权利要求28所述的双功能分子，其中所述恒定区包括Fc变体，所述Fc变体相对于对应野生型Fc区具有降低的效应子功能。30.根据权利要求29所述的双功能分子，其中所述Fc变体包括选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基取代：220S、226S、228P、229S、233P、234V、234G、234A、234F、234A、235A、235G、235E、236E、236R、237A、237K、238S、267R、268A、268Q、269R、297A、297Q、297G、309L、318A、322A、325L、328R、330S、331S和其任何组合，其中所述Fc区中的残基的编号为如Kabat中的EU索引的编号。31.根据权利要求29到30中任一项所述的双功能分子，其中所述Fc变体包括选自由以下组成的组的突变的组合：a)K322A、L234A和L235A；b)P331S、L234F和L235E；c)L234A和L235A；c)N297A；d)N297Q；e)N297G；f)L235E；g)L234A和L235A(IgG1)；h)F234A和L235A(IgG4)；i)H268Q、V309L、A330S和P331S(IgG2)；j)V234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S和P331S(IgG2)，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱雪明，李红俊，滕菲，郭欢欢，顾怡，
申请(专利权)人：苏州创胜医药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：