三特异性结合剂制造技术

本发明专利技术涉及一种三特异性抗体构建体，其包含(i.)第一结合结构域(A)，其能够特异性结合第一靶标(A

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】三特异性结合剂


[0001]本专利技术涉及一种三特异性抗体构建体，其包含(i.)第一结合结构域(A)，其能够特异性结合第一靶标(A
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)，所述第一靶标(A
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)为免疫效应细胞表面上的CD16A；(ii.)第二结合结构域(B)，其能够特异性结合第二靶标(B
’
)，所述第二靶标(B
’
)是免疫效应细胞表面上的另一种抗原；和(iii.)第三结合结构域(C)，其能够特异性结合第三靶标(C
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)，所述第三靶标(C
’
)是靶细胞表面上的抗原。本专利技术还涉及相关的核酸分子、载体、宿主细胞、产生抗体构建体的方法、药物组合物、医学用途和试剂盒。

技术介绍

[0002]WO 2006/125668和Reusch等人，MABS，2014，6：3：728
‑
739描述了一种抗原结合蛋白——双特异性串联(tandam)双抗体——用于接合CD16A，及其用于自然杀伤(NK)细胞疗法的用途。WO 2019/198051和Ellwarger等人，mAbs 2019描述了一种多特异性抗原结合蛋白，其用于接合NK细胞上的CD16A(FcγRIIIA)，通过该接合触发NK细胞的细胞毒性。
[0003]自然杀伤细胞是细胞毒性的，产生IFN
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γ和TNF
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α的先天淋巴样细胞被认为是针对病毒感染的细胞和癌细胞的第一道防线(Cerwenka和Lanier 2001)。通过将NK细胞裂解重定向至肿瘤细胞并刺激在NK细胞表面上表达的活化受体CD16A(也称为FcγRIIIA)，NK细胞的细胞毒性潜力可以用于癌症免疫疗法中。CD16A活化促进NK细胞增殖和针对癌细胞的记忆样细胞毒性(Pahl等人2018 Cancer Immunol Res；6(5)，517
‑
27；DOI：10.1158/2326
‑
6066.CIR
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17
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0550)。通过经由与CD16A多价结合而增加亲合力，例如使用具有与CD16A的二价结合的构建体(WO2019/198051 Affifmed GmbH)，NK细胞的细胞毒性活性可被增强。
[0004]使用多特异性抗体指导NK细胞裂解肿瘤细胞被认为是有效的免疫治疗方法，并且提供了增加特异性、效力和利用新的作用机制的机会。例如，抗原结合部分中的每一个可以选自单链双抗体(scDb)、双抗体(Db)、单链Fv(scFv)或Fab片段。已经开发了由结合CD16A的一个臂和结合肿瘤相关抗原(例如CD19)的另一个臂组成的双特异性抗体(Kellner等人2011 Cancer Lett.303(2)：128
‑
139)。
[0005]NK细胞在其表面具有多种活化和抑制受体，共同调节NK细胞的活化和效应子功能的触发。这些受体中的几种对NK细胞介导的癌细胞的识别和杀伤发挥关键作用。正在开发交联两个不同的NK细胞受体以募集和活化NK细胞的双或多特异性抗体或结合蛋白。在一种方法中，多功能结合蛋白通过结合NKp46和CD16A以及结合癌细胞上的抗原而结合NK细胞。在另一种方法中，双特异性抗体已掺入了用于NKG2D的一个抗原结合位点和用于肿瘤相关抗原的另一个抗原结合位点。这种抗体形式含有Fc结构域，其可以结合NK细胞的CD16A。在第三种方法中，使用了多特异性NK细胞接合子(engager)，其用一个抗原结合位点靶向NKp30，用第二抗原结合位点靶向肿瘤相关抗原。
[0006]NK细胞自相残杀(fratricide)的缺乏是高亲和力、至少二价和/或多特异性免疫细胞接合子形式的重要特征，所述接合物形式的特征在于更长的细胞保留时间，并且用于接合内源性NK细胞或与NK细胞治疗方法组合(WO 2019/198051 AffifMed GmbH)。因此，预
期NK细胞与NK细胞或其它免疫细胞的交联会降低NK细胞接合的治疗效力。最重要的是，NK细胞与一个或多个NK细胞或其它免疫细胞通过与FcRγ或与第二免疫细胞抗原(例如NKG2D、NKp30、SLAMF7、CD38)组合的二价或多价相互作用的交联可引起免疫细胞活化。这可能导致诱导靶细胞驱动的自相残杀或免疫细胞杀伤(例如NK
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NK细胞裂解)，最终导致体内有效的NK细胞耗竭，如先前对于CD16
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定向的鼠IgG抗体(3G8)、CD38
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定向的抗体daratumumab和其它方法所描述的(Choi等人2008 Immunology 124(2)215
‑
22；DOI：10.111l/j.l365
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2567.2007.02757.x；Yoshida 2010 Front.Microbiol 1：128 DOI：10.3389/fmicb.2010.00128；Wang等人2018 Clin Cancer Res，24(16)：4006
‑
4017；DOI：10.1158/1078
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0432.CCR
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17
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3117；His等人2008；Nakamura 2013 PNAS；110(23)9421
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9426；DOI：10.1073/pnas.1300140110；Breman等人2018 Front Immunol，12(9)2940；DOI：10.3389/fimmu.2018.02940)。
[0007]现有的免疫肿瘤疗法使用通过结合CD16以及第二NK细胞抗原诱导NK细胞活化的多特异性结合蛋白，仅在一定程度上对大多数肿瘤适应症有效。迫切需要进一步改进多特异性结合蛋白，同时充分减少免疫细胞自相残杀。本专利技术解决了如本文所指出的这种需要。
附图说明
[0008]图1：抗体构建体2Fab
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scFc
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1scDb(左)和2Fab
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scFc
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1scFv(右)的示意图。第一结合结构域(A)对CD16A是特异性的，第二结合结构域(B)对免疫效应细胞(IC)表面上的另一个靶标是特异性的，第三结合结构域(A)对靶细胞表面上的抗原(TAA)是特异性的。
[0009]图2：抗体构建体2Fab
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1scDb
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AFc(左)和2Fab
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1scFv
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AFc(右)的示意图。
[0010]图3：抗体构建体1Fab
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1scDb
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AFc的示意图。
[0011]图4：抗体构建体2scDb
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AFc(左)和1scDb
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1scFv
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AFc(右)的示意图。
[0012]图5：抗体构建体2tascFv
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AFc(左本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种三特异性抗体构建体，其包含(i)第一结合结构域(A)，其能够特异性结合第一靶标(A
’
)，所述第一靶标(A
’
)是免疫效应细胞表面上的CD16A；(ii)第二结合结构域(B)，其能够特异性结合第二靶标(B
’
)，所述第二靶标(B
’
)是免疫效应细胞表面上的另一种抗原，其中所述抗原选自CD56、NKG2A、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80、DNAM
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1、SLAMF7、OX40、CD47/SIRPα、CD89、CD96、CD137、CD160、TIGIT、nectin
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4、PD
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1、PD
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L1、LAG
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3、CTLA
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4、TIM
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3、KIR2DL1
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5、KIR3DL1
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3、KIR2DS1
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5和CD3；以及(iii)第三结合结构域(C)，其能够特异性结合第三靶标(C
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)，所述第三靶标(C
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)是靶细胞表面上的抗原，其中所述第一结合结构域(A)包含抗体的VH和VL结构域。2.根据权利要求1所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)结合CD16A上是生理学Fcγ受体结合结构域C
‑
端的表位，所述表位优选地包含SEQ ID NO：449的Y158。3.根据权利要求1或2所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)和所述第二结合结构域(B)以减少或优选地防止两个免疫效应细胞的同时结合的方式彼此定位。4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述抗体构建体同时结合靶细胞和一个免疫效应细胞。5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其进一步包含第四结构域(D)，所述第四结构域(D)包含半衰期延长结构域。6.根据权利要求5所述的抗体构建体，其中所述半衰期延长结构域包含CH2结构域，其中所述Fcγ受体结合结构域是被沉默的。7.根据权利要求5或6所述的抗体构建体，其中所述半衰期延长结构域包含CH3结构域。8.根据权利要求5至7中任一项所述的抗体构建体，其中所述抗体构建体包含至少一个以铰链结构域
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CH2结构域
‑
CH3结构域顺序以氨基至羧基顺序融合至CH2结构域的铰链结构域和CH3结构域。9.根据权利要求5至8中任一项所述的抗体构建体，其中所述抗体构建体包含至少两个的所述铰链结构域
‑
CH2结构域
‑
CH3结构域元件。10.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第三结合结构域(C)包含抗体的VH和VL结构域。11.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第三结合结构域(C)结合靶细胞表面上的抗原，所述抗原选自CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD52、CD70、CD74、CD79b、CD123、CLL1、BCMA、FCRH5、EGFR、EGFRvlll、HER2和GD2。12.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第二结合结构域(B)包含抗体的VH和VL结构域。13.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)融合至第一CH3结构域的C端，并且所述第二结合结构域(B)融合至第二CH3结构域的C端。14.根据权利要求13所述的抗体构建体，其中所述抗体构建体对于所述第一结合结构域(A)是单价的，并且对于所述第二结合结构域(B)是单价的。15.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)融合至第一铰链的N
‑
端，并且所述第二结合结构域(B)融合至第二铰链的N
‑
端。
16.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)和所述第二结合结构域(B)彼此融合。17.根据权利要求16所述的抗体构建体，其中所述抗体构建体对于所述第一结合结构域(A)是单价的，并且对于所述第二结合结构域(B)是单价的。18.根据权利要求16的抗体构建体，其中所述抗体构建体对于所述第一结合结构域(A)是二价的，并且对于所述第二结合结构域(B)是二价的，其中所述第一结合结构域(A)中的每一个融合至第二结合结构域(B)。19.根据权利要求16至18中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)的VL的C端融合至所述第二结合结构域(B)的VH的N端，并且所述第二结合结构域(B)的VL的C端融合至所述第一结合结构域(A)的VH的N端。20.根据权利要求16至18中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)的VL的N端融合至所述第二结合结构域(B)的VH的C端，并且所述第二结合结构域(B)的VL的N端融合至所述第一结合结构域(A)的VH的C端。21.根据权利要求16至18中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)的VL的C端融合至所述第二结合结构域(B)的VL的N端，并且所述第一结合结构域(A)的VH的C端融合至所述第二结合结构域(B)的VH的N端。22.根据权利要求16至18中任一项所述的抗体构建体，其中所述第二结合结构域(B)的VL的C端融合至所述第一结合结构域(A)的VL的N端，并且所述第二结合结构域(B)的VH的C端融合至所述第一结合结构域(A)的VH的N端。23.根据权利要求16至18中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)和所述第二结合结构域(B)以bi
‑
scFv、双Fab、Db或scDb的形式彼此融合。24.根据权利要求23所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)和所述第二结合结构域(B)以Db或scDb的形式彼此融合。25.根据权利要求24所述的抗体构建体，其中所述Db或scDb的可变结构域以V
L
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V
H
‑
V
L
‑
V
H
顺序排列。26.根据权利要求15至25中任一项所述的抗体构建体，其中(a)所述第一结合结构域(A)以N
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端融合至铰链结构域，并且所述第二结合结构域(B)以N
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端融合至所述第一结合结构域(A)；或(b)所述第一结合结构域(A)以C
‑
端融合至CH3结构域，并且所述第二结合结构域(B)以C
‑
端融合至所述第一结合结构域。27.根据权利要求15至26中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)以N
‑
端融合至铰链结构域，并且所述第二结合结构域(B)以N
‑
端融合至所述第一结合结构域(A)。28.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)的结合位点和所述第二结合结构域(B)的结合位点在约25nm或更短、优选约20nm或更短、优选约15nm或更短、优选约10nm或更短的距离内。29.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)的结合位点和所述第二结合结构域(B)的结合位点为顺式取向。30.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域(A)的结合位点和所述第三结合结构域(C)的结合位点为反式取向。
31.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第二结合结构域(B)的结合位点和所述第三结合结构域(C)的结合位点...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：阿菲姆德股份有限公司，
类型：发明
国别省市：