新型抗CLDN18.2抗体制造技术

本公开在此提供了抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段、编码所述抗体或其抗原结合片段的分离的多核苷酸、包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物及其用途。段的药物组合物及其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型抗CLDN18.2抗体


[0001]本公开总体上涉及与人CLDN18.2特异性结合的新型抗CLDN18.2抗体。

技术介绍

[0002]Claudin
‑
18(CLDN18)分子(Genbank登录号：剪接变体1(CLDN18A1或CLDN18.1)：NP_057453、NM_016369和剪接变体2(CLDN18A2或CLDN18.2)：NM_001002026、NP_001002026)是具有分子量约为27.9/27.72kD的整合跨膜蛋白。CLDN18蛋白位于上皮和内皮的紧密连接内，其在相邻细胞之间组织膜内颗粒互连链的网络。CLDN18和闭合蛋白是紧密连接中最突出的跨膜蛋白成分。由于其紧密的细胞间粘附特性，这些紧密连接蛋白质可形成主要屏障，以防止和控制溶质的细胞旁转运，并限制膜脂和蛋白质的横向扩散，以维持细胞极性。因此，它们在组织上皮组织结构中起关键作用。
[0003]CLDN18是四跨膜蛋白家族的成员，具有4个疏水区。CLDN18显示了几种不同的构象，可以通过抗体选择性地对其进行处理(参见Sahin U,Koslowski M,Dhaene K等人，Claudin
‑
18 splice variant 2 is a pan
‑
cancer target suitable for therapeutic antibody development[J].Clinical Cancer Research,2008,14(23):7624
‑<br/>7634)。如针对绝大多数CLDN家族成员所述，CLDN18
‑
构象
‑
1的所有四个疏水区域均作为跨膜结构域(TM)，并形成两个细胞外环(被疏水区1和疏水区2包围的第1环；被疏水区3和4包围的第2环)。第二构象(CLDN18
‑
构象
‑
2)意味着，如针对PMP22所述，第二和第三疏水区未完全穿过质膜，因此第一和第四跨膜结构域之间的部分(D3环)位于细胞外。第三构象(CLDN18
‑
构象
‑
3)显示了具有两个内部疏水区的很大的胞外结构域，其被第一和第四疏水区包围。由于D3环中具有典型的N
‑
糖基化位点，因此CLDN
‑
18拓扑变体CLDN18拓扑
‑
2和CLDN18拓扑
‑
3包含额外的细胞外N
‑
糖基化位点。
[0004]CLDN18具有两种不同的剪接变体，其在小鼠和人中均存在。剪接变体CLDN18.1和CLDN18.2在包含第一个TM和第1环的N端处的前21个氨基酸不同，而C端的蛋白序列相同(参见Niimi T,Nagashima K,Ward J M等人，Claudin
‑
18,a novel downstream target gene for the T/EBP/NKX2.1 homeodomain transcription factor,encodes lung
‑
and stomach
‑
specific isoforms through alternative splicing[J].Molecular and cellular biology,2001,21(21):7380
‑
7390)。
[0005]CLDN18.1在正常的肺和胃的上皮细胞上选择性表达，而CLDN18.2仅在胃细胞上表达。最重要的是，CLDN18.2的表达仅限于胃上皮细胞的分化后的短寿细胞中，但不在胃部干细胞区域表达。使用灵敏的RT
‑
PCR，在任何其他正常人体器官中都无法检测到这两种变体。但是，它们在几种癌症类型中(包括胃癌、食道癌、胰腺癌和肺癌以及人癌细胞系)高表达(参见Matsuda Y,Semba S,Ueda J等人，Gastric and intestinal claudin expression at the invasive front of gastric carcinoma[J].Cancer science,2007,98(7):1014
‑
1019)。
[0006]迫切需要可用于治疗CLDN18.2表达呈阳性的疾病(例如癌症)的新型抗CLDN18.2
抗体。

技术实现思路

[0007]本公开全文中的冠词“一种(a)”、“一个(an)”和“所述(the)”在此用于指代一个或多于一个(即，至少一个)该冠词的语法对象。举例来说，“一种抗体”指一种抗体或多于一种抗体。
[0008]本公开尤其提供了新型单克隆抗CLDN18.2抗体，编码该抗体的核苷酸序列，以及其用途。
[0009]在一个方面，本公开提供了分离的针对人CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段，其能够与表位结合，所述表位包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列中D28、W30、V43、N45、Y46、L49、W50、R51、R55、E56、F60、E62、Y66、L72、L76、V79和R80位处的至少一个、两个或三个氨基酸残基。
[0010]在某些实施方式中，所述表位包含在E56位处的氨基酸残基。在某些实施方式中，所述表位不包含至少一个以下残基：A42或N45。在某些实施方式中，所述表位包含在W30、L49、W50、R55和E56位处的氨基酸残基。在某些实施方式中，所述表位还包含T41、N45、Y46、R51、F60、E62和R80中的一个或多个氨基酸残基。在某些实施方式中，所述表位进一步包含D28、V43、N45、Y46、Y66、L72、L76和V79中的一个或多个氨基酸残基。
[0011]在一个方面，本公开提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其能够与人CLDN18.2特异性结合并具有至少一个以下特征：
[0012]a)如通过KinExA分析所测定的，以不超过2.5nM(或不超过2.4、2.3、2.2、2.1、2.0、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4nM)的Kd值与表达人CLDN18.2的细胞结合；
[0013]b)如通过流式细胞术所测定的，以不超过70μg/ml(或不超过65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、12或10、9、8、7、6、5、4、3、2或1μg/ml)的EC50值与表达人CLDN18.2的细胞结合；
[0014]c)如通过细胞毒性分析所测定的，以不超过1μg/ml(或不超过0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05或0.01μg/ml)的EC50值在表达人CLDN18.2的细胞上诱导补体依赖的细胞毒性(CDC)；
[0015]d)如通过ADCC报告基因分析所测定的，以不超过2μg本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的针对人CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段，其能够与表位结合，所述表位包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列中D28、W30、V43、N45、Y46、L49、W50、R51、R55、E56、F60、E62、Y66、L72、L76、V79和R80位处的至少一个、两个或三个氨基酸残基。2.根据权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含在E56位处的氨基酸残基。3.根据权利要求1或2所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位不包含至少一个以下残基：A42或N45。4.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含在W30、L49、W50、R55和E56位处的氨基酸残基。5.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位还包含T41、N45、Y46、R51、F60、E62和R80中的一个或多个氨基酸残基。6.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位进一步包含D28、V43、N45、Y46、Y66、L72、L76和V79中的一个或多个氨基酸残基。7.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其能够与人CLDN18.2特异性结合并具有至少一个以下特征：a)如通过KinExA分析所测定的，以不超过2.5nM(或不超过2.0、1.5、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4nM)的Kd值与表达人CLDN18.2的细胞结合；b)如通过流式细胞术所测定的，以不超过70μg/ml(或不超过65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、12或10、9、8、7、6、5、4、3、2或1μg/ml)的EC50值与表达人CLDN18.2的细胞结合；c)如通过细胞毒性分析所测定的，以不超过1μg/ml(或不超过0.9、0.8、0.7、0.6、0.5μg/ml)的EC50值在表达人CLDN18.2的细胞上诱导补体依赖的细胞毒性(CDC)；d)如通过ADCC报告基因分析所测定的，以不超过2μg/ml(或不超过1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或0.1μg/ml)的EC50值在表达人CLDN18.2的细胞上诱导抗体依赖的细胞毒性(ADCC)。8.根据权利要求7所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞包含NUGC4细胞、SNU
‑
620细胞、SNU
‑
601细胞、KATOIII细胞、或与其相当的细胞，所述与其相当的细胞具有与NUGC4细胞、SNU
‑
620细胞、SNU
‑
601细胞或KATOIII细胞相当的或不超过上述细胞的人CLDN18.2蛋白表达水平。9.根据权利要求7所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞包含人CLDN18.2高表达细胞、人CLDN18.2中等表达细胞或人CLDN18.2低表达细胞，其中所述人CLDN18.2高表达细胞以如通过IHC所测定的至少2+的强度和以免疫组织化学(IHC)中至少40％的细胞为阳性染色的水平表达人CLDN18.2；所述人CLDN18.2中等表达细胞以如通过IHC所测定的至少1+且低于2+的强度和以IHC中至少30％但低于40％的细胞为阳性染色的水平表达人CLDN18.2；所述人CLDN18.2低表达细胞以如通过IHC所测定的高于0但低于1+的强度和以IHC中高于0但低于30％的细胞为阳性染色的水平表达人CLDN18.2。10.根据权利要求7所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中与NUGC4细胞结合的EC50值不超过70μg/ml(或不超过65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、12或10μg/ml)。11.根据权利要求7所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中如通过ADCC报告基因分
析所测定的，所述NUGC4细胞上的ADCC的EC50值不超过2μg/ml(或不超过1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或0.1μg/ml)。12.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其能够与人CLDN18.2特异性结合并具有至少一个以下特征：a)如通过KinExA分析所测定的，以不超过IMAB362的80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、15％的Kd值与人CLDN18.2结合；b)如通过流式细胞术分析所测定的，以不超过IMAB362的80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、15％或10％的EC50值与表达人或小鼠CLDN18.2的细胞结合；c)如通过细胞毒性分析所测定的，以不超过IMAB362的80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％或5％的EC50值在表达人CLDN18.2的细胞上诱导补体依赖的细胞毒性(CDC)；以及d)如通过ADCC报告基因分析所测定的，以不超过IMAB362的80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％或1％的EC50值在表达人CLDN18.2的细胞上诱导抗体依赖的细胞毒性(ADCC)；其中IMAB362是包含重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区包含如SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：73所示的氨基酸序列。13.根据权利要求12所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞包含NUGC4细胞、SNU
‑
620细胞、SNU
‑
601细胞、KATOIII细胞、或细胞系，所述细胞系具有与NUGC4细胞、SNU
‑
620细胞、SNU
‑
601细胞、KATOIII细胞相当的或不超过上述细胞的人CLDN18.2蛋白表达水平。14.根据权利要求12所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞包含人CLDN18.2高表达细胞、人CLDN18.2中等表达细胞、或人CLDN18.2低表达细胞，其中所述人CLDN18.2高表达细胞以如通过IHC所测定的至少2+的强度和以IHC中至少40％的细胞为阳性染色的水平表达人CLDN18.2；所述人CLDN18.2中表达细胞以如通过IHC所测定的至少1+且低于2+的强度和以IHC中至少30％但低于40％的细胞为阳性染色的水平表达人CLDN18.2；并且所述人CLDN18.2低表达细胞以如通过IHC所测定的高于0但低于1+的强度和以IHC中高于0但低于30％的细胞为阳性染色的水平表达人CLDN18.2。15.根据权利要求7
‑
14中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体与表位结合，所述表位包含如SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列中D28、W30、V43、N45、Y46、L49、W50、R51、R55、E56、F60、E62、Y66、L72、L76、V79和R80位处的至少一个、两个或三个氨基酸残基，可选地，所述表位包含在E56位处的氨基酸残基；可选地，所述表位不含有至少一个以下残基：A42或N45；可选地，所述表位包含在W30、L49、W50、R55和E56位处的氨基酸残基；可选地，所述表位进一步包含T41、N45、Y46、R51、F60、E62和R80中的一个或多个氨基酸残基：并且，可选地，所述表位进一步包含D28、V43、N45、Y46、Y66、L72、L76和V79中的一个或多个氨基酸残基。16.一种抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3和/或轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，其中：所述HCDR1序列包含GYNMN(SEQ ID NO：1)或TYFIGVG(SEQ ID NO：13)，或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；
所述HCDR2序列包含X1IDPYYX2X3TX4YNQKFX5G(SEQ ID NO：32)或HIWWNDNKYYNTALKS(SEQ ID NO：15)，或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；所述HCDR3序列包含X6X7X8GNAFDY(SEQ ID NO：33)或MGSGAWFTY(SEQ ID NO：17)，或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；所述LCDR1序列包含KSSQX9LX
10
NX
11
GNX
12
KNYLT(SEQ ID NO：34)，或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；所述LCDR2序列包含WASTRX
13
S(SEQ ID NO：35)，或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；所述LCDR3序列包含QNDYX
14
X
15
PX
16
T(SEQ ID NO：36)，或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；其中X1是N或Y或H，X2是G或V，X3是A或G或T，X4是R或T或S，X5是K或R，X6是S或M，X7是Y或F，X8是Y或H，X9是S或N，X
10
是L或F，X
11
是S或N，X
12
是Q或L，X
13
是E或K，X
14
是S或Y，X
15
是F或Y，且X
16
是F或L。17.一种抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含：a)HCDR1包含选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：13的序列，b)HCDR2包含选自SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：22的序列，以及c)HCDR3包含选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：21的序列，和/或轻链可变区包含：d)LCDR1包含如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：20所示的序列，e)LCDR2包含如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：16所示的序列，以及f)LCDR3包含选自SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：18的序列。18.根据前述任意一项权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区选自下组：包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变区，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：1所示的序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：3所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：5所示的序列；包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变区，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：1所示的序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：7所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：5所示的序列；包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变区，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：1所示的序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：9所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：11所示的序列；包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变区，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：13所示的序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：15所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：17所示的序列；包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变区，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：1所示的序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：19所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：21所示的序列；以及包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变区，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：1所示的序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：22所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：5所示的序列。
19.根据前述任意一项权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区选自下组：包含LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变区，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：2所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：6所示的序列；包含LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变区，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：2所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：8所示的序列；包含LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变区，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：10所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：6所示的序列；包含LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变区，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：2所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：12所示的序列；包含LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变区，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：14所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：16所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：18所示的序列；包含LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变区，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：20所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：6所示的序列。20.根据前述任意一项权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中：所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：1所示的序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：3所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：5所示的序列；并且，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：2所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：6所示的序列；所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：1所示的序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：7所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：5所示的序列；并且，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：2所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：8所示的序列；所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：1所示的序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：9所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：11所示的序列；并且，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：10所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：6所示的序列；所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：13所示的序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：15所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：17所示的序列；并且，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：2所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：12所示的序列；所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：1所示的序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：19所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：21所示的序列；并且，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：14所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：16所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：18所示的序列；或者所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含如SEQ ID NO：1所示的序
列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO：22所示的序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO：5所示的序列；并且，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含如SEQ ID NO：20所示的序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO：4所示的序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO：6所示的序列。21.根据前述任意一项权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含一个或多个重链HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，和/或一个或多个轻链LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，其中：所述HFR1包含QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYX
17
FT(SEQ ID NO：54)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，所述HFR2包含WVX
18
QAPGQGLEWX
19
G(SEQ ID NO：55)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱雪明，李振，滕菲，李红俊，柴辉，郭欢欢，
申请(专利权)人：苏州创胜医药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：