新颖的抗GREMLIN1抗体制造技术

本公开在本文中提供了抗gremlin1抗体或其抗原结合片段、编码其的分离的多核苷酸、包含其的药物组合物和其用途。含其的药物组合物和其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新颖的抗GREMLIN1抗体
专利

[0001]本公开大体上涉及与人类gremlin1特异性结合的新颖的抗gremlin1(GREM1)抗体。

技术介绍

[0002]Gremlin1(GREM1)为具有富含半胱氨酸的区域和半胱氨酸结的高度保守的分泌性蛋白质(Wordinger等人,《实验眼科研究(Exp Eye Res.)》2008年8月；87(2):78
‑
79.)。其为成神经细胞瘤家族中差异筛选选择的基因异常(differential screening
‑
selected gene aberrative in neuroblastoma；DAN)的成员，其充当骨形态生成蛋白(bone morphogenetic protein；BMP)的拮抗剂(Wordinger等人,《实验眼科研究》2008年8月；87(2):78
‑
79.)。GREM1可与BMP
‑
2、BMP
‑
4或BMP
‑
7物理结合以形成异二聚体且防止BMP配体与其对应BMP受体相互作用，并且接着相继地抑制BMP信号传导路径的活化。
[0003]GREM1与肾脏、肺、肝脏和视网膜的纤维化病灶以及若干肿瘤类型，包括胰脏癌、结肠癌、肺癌、神经胶质瘤、胃癌和前列腺癌密切相关(Sneddon等人,《美国国家科学院院刊(PNAS)》2006年10月；103(40):14842
‑
14847)。举例来说，异常gremlin1上调赋予干细胞生态位(stem cell niche)外部的结肠细胞具有致肿瘤性。还发现肿瘤干细胞高度表达且分泌gremlin1以维持其在神经胶质瘤中的干细胞性(Yan,K.等人,《基因发展(Genes Dev)》28,1085
‑
1100(2014))。因此，gremlin1已在治疗gremlin相关疾病中用作治疗靶标。
[0004]然而，由于GREM1也在其它正常组织中表达，因此由于包括对正常组织的毒性的副作用，目前没有对GREM1相关疾病的有效治疗。因此，需要具有降低的副作用的新颖的抗gremlin1抗体。

技术实现思路

[0005]在整个本公开中，冠词“一(a/an)”和“所述”在本文中用于指一个(种)或多于一个(种)(即，至少一个(种))所述冠词的语法对象。举例来说，“抗体”意指一种抗体或多于一种抗体。
[0006]本公开尤其提供新颖的单克隆抗gremlin1(GREM1)抗体、编码此类抗体的核苷酸序列和其用途。当相较于现有抗GREM1抗体时，本文所提供的抗GREM1抗体与GREM1的不同区域结合并且对调节GREM1对骨形态发生蛋白质(BMP)结合的活性具有差异影响。确切地说，相对于非癌细胞，本文所提供的抗GREM1抗体能够选择性地降低癌细胞中GREM1介导的对BMP信号传导的抑制。这是出人意料的，并且解决了抗GREM1抗体由于gremlin在癌细胞以及非癌细胞中的普遍表达而引起的副作用这一长期存在的问题。
[0007]在一个方面中，本公开提供一种抗人类gremlin1(hGREM1)的分离抗体或其抗原结合片段，其具有以下特征中的至少一者：
[0008]a)相对于非癌细胞，能够选择性地降低癌细胞中hGREM1介导的对BMP信号传导的抑制；
[0009]b)在非癌细胞中展现hGREM1介导的对BMP信号传导的抑制降低不超过50％；
[0010]c)能够与包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的嵌合hGREM1结合；
[0011]d)能够与hGREM1结合而非与小鼠gremlin1特异性结合；
[0012]e)在包含残基Gln27和/或残基Asn33的表位处与hGREM1结合，其中残基编号是根据SEQ ID NO:69，或与包含残基Gln27和/或残基Asn33的hGREM1片段结合，任选地所述hGREM1片段具有至少3个(例如，4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸残基的长度；
[0013]f)能够以如通过Fortebio所测量的不超过1nM的K
D
与hGREM1结合；
[0014]h)能够以如通过ELISA所测量的大于50％的最大阻断百分比阻断hGREM1与BMP7的结合；
[0015]i)能够阻断GREM1与FGFR的相互作用；和/或
[0016]j)能够与hGREM1和DAN两者结合。
[0017]在某些实施方式中，表位为直链或构象表位。
[0018]在另一方面中，本公开提供一种抗人类gremlin1(hGREM1)的分离抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变(VH)区和/或轻链可变(VL)区，其中所述重链可变区包含：
[0019]a)HCDR1，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:1、11、21、31、114、119和123，
[0020]b)HCDR2，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:2、12、22、32和115，和
[0021]c)HCDR3，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:3、13、23、33、116、120和124，和/或
[0022]其中所述轻链可变区包含：
[0023]d)LCDR1，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:4、14、24、34、117、121、122和125，
[0024]e)LCDR2，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:5、15、25和35，和
[0025]f)LCDR3，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:6、16、26、36和118。
[0026]在某些实施方式中，本文所提供的抗hGREM1的抗体或其抗原结合片段的重链可变区选自由以下组成的群组：
[0027]a)重链可变区，其包括包含SEQ ID NO:1的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:3的序列的HCDR3；
[0028]b)重链可变区，其包括包含SEQ ID NO:11的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:12的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:13的序列的HCDR3；
[0029]c)重链可变区，其包括包含SEQ ID NO:21的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:22的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:23的序列的HCDR3；
[0030]d)重链可变区，其包括包含SEQ ID NO:31的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:32的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:33的序列的HCDR3；
[0031]e)重链可变区，其包括包含SEQ ID NO:114的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:115的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:116的序列的HCDR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗人类gremlin1(hGREM1)的分离抗体或其抗原结合片段，其具有以下特征中的至少一者：a)相对于非癌细胞，能够选择性地降低癌细胞中hGREM1介导的对BMP信号传导的抑制；b)在非癌细胞中展现hGREM1介导的对BMP信号传导的抑制降低不超过50％；c)能够与包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的嵌合hGREM1结合；d)能够与hGREM1结合而非与小鼠gremlin1特异性结合，或替代地对小鼠gremlin1具有交叉反应性；e)在包含残基Gln27和/或残基Asn33的表位处与hGREM1结合，其中残基编号是根据SEQ ID NO:69，或与包含残基Gln27和/或残基Asn33的hGREM1片段结合，任选地所述hGREM1片段具有至少3个(例如，4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸残基的长度；f)能够以如通过Fortebio所测量的不超过1nM的K
D
与hGREM1结合；h)能够以如通过ELISA所测量的大于50％的最大阻断百分比阻断hGREM1与BMP7的结合；i)能够阻断GREM1与FGFR的相互作用；和/或j)能够与hGREM1和DAN两者结合。2.根据权利要求1所述的抗hGREM1的分离抗体或其抗原结合片段，其中所述表位为线性表位或构象表位。3.一种抗人类gremlin1(hGREM1)的分离抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变(VH)区和/或轻链可变(VL)区，其中所述重链可变区包含：a)HCDR1，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:1、11、21、31、114、119和123，b)HCDR2，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:2、12、22、32和115，和c)HCDR3，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:3、13、23、33、116、120和124，和/或其中所述轻链可变区包含：d)LCDR1，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:4、14、24、34、117、121、122和125，e)LCDR2，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:5、15、25和35，和f)LCDR3，其包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:6、16、26、36和118。4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区选自由以下组成的群组：a)重链可变区，其包括包含SEQ ID NO:1的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:3的序列的HCDR3；b)重链可变区，其包括包含SEQ ID NO:11的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:12的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:13的序列的HCDR3；c)重链可变区，其包括包含SEQ ID NO:21的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:22的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:23的序列的HCDR3；d)重链可变区，其包括包含SEQ ID NO:31的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:32的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:33的序列的HCDR3；
NO:117的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO:35的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:118的序列的LCDR3；f)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:119的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:115的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:120的序列的HCDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ ID NO:121的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO:35的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:118的序列的LCDR3；g)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:119的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:115的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:120的序列的HCDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ ID NO:122的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO:35的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:118的序列的LCDR3；h)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:123的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:115的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:124的序列的HCDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ ID NO:125的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO:35的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:118的序列的LCDR3；i)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:114的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:115的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:116的序列的HCDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ ID NO:117的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO:35的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:118的序列的LCDR3；j)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:119的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:115的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:120的序列的HCDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ ID NO:121的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO:35的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:118的序列的LCDR3；或k)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:119的序列的HCDR1、包含SEQ ID NO:115的序列的HCDR2和包含SEQ ID NO:120的序列的HCDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ ID NO:122的序列的LCDR1、包含SEQ ID NO:35的序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:118的序列的LCDR3。7.根据前述权利要求中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:134，和与其具有至少80％序列一致性但仍保持与gremlin的特定结合特异性或亲和力的同源序列。8.根据前述权利要求中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136和SEQ ID NO:137，和与其具有至少80％序列一致性但仍保持与gremlin的特定结合特异性或亲和力的同源序列。9.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：a)包含SEQ ID NO:7的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:8的序列的轻链可变区；或
b)包含SEQ ID NO:17的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:18的序列的轻链可变区；或c)包含SEQ ID NO:27的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:28的序列的轻链可变区；或d)包含SEQ ID NO:37的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:38的序列的轻链可变区；或e)包含SEQ ID NO:126的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:127的序列的轻链可变区；或f)包含SEQ ID NO:128的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:129的序列的轻链可变区；或g)包含SEQ ID NO:128的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:130的序列的轻链可变区；或h)包含选自由SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:45组成的群组的序列的重链可变区，和包含选自由SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:49组成的群组的序列的轻链可变区；或i)选自由以下组成的群组的一对重链可变区和轻链可变区序列：SEQ ID NO:41/47、41/49、43/47、43/49、45/47和45/49；或j)包含选自由SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:57组成的群组的序列的重链可变区，和包含选自由SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:61组成的群组的序列的轻链可变区；或k)选自由以下组成的群组的一对重链可变区和轻链可变区序列：SEQ ID NO:51/59、51/61、53/59、53/61、55/59、55/61、57/59和57/61；或l)包含选自由SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:134组成的群组的序列的重链可变区，和包含选自由SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136和SEQ ID NO:137组成的群组的序列的轻链可变区；或m)选自由以下组成的群组的一对重链可变区和轻链可变区序列：SEQ ID NO:131/135、131/136、131/137、132/135、132/136、132/137、133/135、133/136、133/137、134/135、134/136和134/137。10.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含一个或多个氨基酸残基取代或修饰，但仍保持与hGREM1的特定结合特异性或亲和力。11.根据权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述取代或修饰中的至少一者在所述VH或VL序列的一个或多个CDR序列中，和/或在一个或多个非CDR区中。12.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含免疫球蛋白恒定区，任选地人类IgG的恒定区。13.根据权利要求12所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述恒定区包含人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恒定区，并且任选地所述恒定区包括包含SEQ ID NO:138的序列的重链恒定区和/或包含SEQ ID NO:139的序列的轻链恒定区。14.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为人源化的或嵌合的。15.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为双功能抗体、Fab、
Fab'、F(ab')2、Fd、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv
‑
dsFv')、二硫键稳定的双功能抗体(ds双功能抗体)、单链抗体分子(scFv)、scFv二聚体(二价双功能抗体)、多特异性抗体、骆驼化单结构域抗体、纳米抗体、结构域抗体和二价结构域抗体。16.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为双特异性的。17.根据权利要求16所述的抗体或其抗原结合片段，其能够与gremlin的第一和第二表位特异性结合，或能够与hGREM1和第二抗原两者特异性结合。18.根据权利要求17所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二抗原包含免疫相关靶标。19.根据权利要求18所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二抗原包含PD
‑
1、PD
‑
L1、PD
‑
L2、CTLA
‑
4、TIM
‑
3、LAG3、A2AR、CD160、2B4、TGFβ、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱雪明，崔素丽，李红俊，孙迪，郭欢欢，
申请(专利权)人：苏州创胜医药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：