层析过程病毒灭活的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及蛋白纯化技术领域，尤其是涉及一种层析过程病毒灭活的方法及其应用。层析过程病毒灭活的方法，包括如下步骤：调节细胞发酵液的pH至5.0～5.5后进行深层过滤处理，将滤出液进行阳离子层析上样，冲洗处理后，采用pH为3.4～3.8的缓冲液冲洗阳离子层析柱后，静置30min以上，洗脱。本发明专利技术在阳离子层析过程中进行低pH孵育病毒灭活，为后续纯化步骤节省pH调节、稀释等工艺环节，提高纯化过程整体效率；并且，省去的离线灭活步骤还能够省去大容量储存容器等，节约空间。节约空间。节约空间。

【技术实现步骤摘要】
层析过程病毒灭活的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及蛋白纯化
，尤其是涉及一种层析过程病毒灭活的方法及其应用。

技术介绍

[0002]随着生物制药技术的进步，尤其是上游细胞发酵的技术发展，抗体表达量逐渐升高，由此给下游纯化带来很大的压力。目前制约下游纯化的最大障碍是捕获步骤的填料成本高以及生产效率较低。抗体的粗纯步骤目前主要是通过Protein A亲和层析来进行捕获，而广泛使用的Protein A填料普遍存在价格高昂，载量不高等问题。
[0003]生物制药界提出了很多种解决方案，如膜层析、新填料、连续流层析、阳离子层析捕获等等。其中阳离子层析捕获相较于亲和层析捕获，优势在于：1)载量高，配基稳定；2)流速高，生产效率高；3)价格低，成本低。用阳离子层析代替亲和层析进行捕获可以有效提高效率，并同时大大降低捕获的成本。
[0004]病毒灭活是血液制品、细胞表达制品病毒安全性评价中用于病毒去除的一个重要步骤。通常在Protein A亲和层析时，会用较低pH的流动相进行洗脱回收蛋白，从而十分便于后续进行低pH孵育病毒灭活的操本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，包括如下步骤：调节细胞发酵液的pH至5.0～5.5后进行深层过滤处理，将滤出液进行阳离子层析上样，冲洗处理后，采用pH为3.4～3.8的缓冲液冲洗阳离子层析柱后，静置30min以上，洗脱。2.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，所述pH为3.4～3.8的缓冲液包括醋酸钠
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醋酸缓冲液、甘氨酸
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盐酸缓冲液和柠檬酸
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柠檬酸钠缓冲液中的任一种或多种；优选的，所述缓冲液的浓度为20～100mM；优选的，所述缓冲液的pH为3.4～3.6。3.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，所述阳离子层析的填料包括POROS 50HS、POROS 50XS、Capto S Impact、Eshmono CPX、Monomix HC60
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SP和NanoGel 50SP中的任一种或多种。4.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，所述阳离子层析的填料的装柱高度为15～25cm；优选的，所述阳离子层析的线性流速为200～400cm/hr。5.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，采用pH为3.4～3.8的缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：周佳豪，柳帆邹，徐晓渊，张赶，杨晓明，叶峰，
申请(专利权)人：苏州创胜医药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：