一种利用阳离子交换层析纯化疏水性蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用阳离子交换层析纯化疏水性蛋白的方法。该方法的层析步骤包括平衡、上样、冲洗和洗脱，在层析过程中所用阳离子洗脱液不包含强电解质成分，所用阳离子冲洗液电导率高于上样样品；所述阳离子平衡液、冲洗液和洗脱液所用的盐包括弱酸盐和/或磷酸盐类。本发明专利技术所述的方法能有效去除HCP和聚体，避免阳离子层析洗脱峰出现裂峰或多峰现象，收集的双特异性抗体的收率和纯度较高，均可达90％以上(纯度甚至可达99％以上)。以上(纯度甚至可达99％以上)。

【技术实现步骤摘要】
一种利用阳离子交换层析纯化疏水性蛋白的方法


[0001]本专利技术涉及抗体纯化
，尤其是涉及一种阳离子交换层析法纯化疏水性蛋白的方法。

技术介绍

[0002]疏水性是抗体分子重要的理化性质，抗体分子疏水性的强弱对阳离子交换层析的填料的选择和工艺开发有重要的影响。一般疏水性较强的抗体分子在阳离子交换层析纯化过程中更容易出现洗脱多峰，聚合体去除效果较差、稳定性差和收率低等问题。以下以疏水性抗体为例作具体介绍。
[0003]经过30多年的研究和发展，单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)药物在肿瘤和自身免疫疾病治疗领域取得了巨大进展，同时也成为了医药领域增长速度最快、最有前景的发展方向，为常规治疗无效的患者带来了新的希望。目前通过基因工程改造以及有效的质量控制，大大提高了药物的亲和力、稳定性、生物学活性及治疗效果。
[0004]双特异性抗体(Bispecific monoclonal antibody，BsAb)能够实现单个分子同时结合两个独特的靶点，对于包括肿瘤和感染性疾病在内的各种适应症，均观察到双特异本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用阳离子交换层析纯化疏水性蛋白的方法，其层析步骤包括平衡、上样、冲洗和洗脱，其特征在于，在层析过程中所用阳离子洗脱液不包含强电解质成分，所用阳离子冲洗液电导率高于上样样品；所述阳离子平衡液、冲洗液和洗脱液所用的盐包括弱酸盐和/或磷酸盐类。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的阳离子交换层析所用填料为含选自由磺酸基(SO
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)、磺甲基(S)、磺丙基(SP)和磷酸基(P)构成的群组中的基团的强阳离子交换剂或含选自由羧甲基(CM)、羧基(COO
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)构成的群组中的离子交换基团的弱阳离子交换剂，优选含磺酸基或磺丙基的强阳离子交换剂；和/或，所述的阳离子交换层析采用结合
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洗脱模式；和/或，所述阳离子平衡液、冲洗液和洗脱液为醋酸
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醋酸盐缓冲液、枸橼酸
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枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液或者组氨酸盐缓冲液，优选醋酸
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醋酸盐缓冲液；较佳地，所述的阳离子平衡液、冲洗液和洗脱液均不包含强电解质成分；和/或，所述的洗脱为盐梯度洗脱或者盐等度洗脱，所述的盐梯度洗脱优选盐线性梯度洗脱。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述盐等度洗脱的洗脱液电导率为12.55～17.6mS/cm，pH值为4.8～5.5；所述的盐线性梯度洗脱的洗脱液电导率为19.0～25.0mS/cm，pH值为5.0～5.4。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，当所述填料为Capto S Impact时，所述的盐等度洗脱洗脱液电导率的范围为13.5～15.5mS/cm；当所述填料为Poros 50HS时，所述的盐等度洗脱洗脱液电导率的范围为12.55～14.75mS/cm。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冲洗液的pH为4.9～5.5，优选5.0；电导率为3.0～10.5mS/cm，优选5.7～10.5mS/cm，更优选8.0mS/cm；和/或，所述平衡缓冲液的pH为4.9～5.5，优选5.0；电导率为3.0～10.5mS/cm，优选5.7～10.5mS/cm，更优选8.0mS/cm；和/或，上样样品的电导率为3.74～10.5mS/cm，优选3.74～7.55mS/cm。6.如权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述的疏水性蛋白为抗体，如双特异性抗体或者单抗；所述的双特异性抗体优选OX40/...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪小锋，杨忠华，蔺智勇，
申请(专利权)人：信达生物制药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：