包含核糖体毒素或RNAse的重组免疫毒素制造技术

本发明专利技术涉及结合剂

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含核糖体毒素或RNAse的重组免疫毒素
专利

[0001]本申请涉及结合剂
‑
毒素融合蛋白的领域。
[0002]专利技术背景
[0003]组合靶结合剂和毒素的缀合物已在40年前开发出来，现在代表着抗癌的主要希望。这些缀合物主要以抗体
‑
药物
‑
缀合物(ADC)类为代表，由通过接头化学缀合于化学细胞毒性剂的单克隆抗体组成。这些药物组合单克隆抗体靶向癌细胞的特异性和有效载荷的高毒力，以杀死靶细胞，同时保护健康组织。
[0004]仍然需要新的这种实体来为不同的肿瘤类型提供更好的治疗选择。因此，本专利技术的一个目的是提供这样的新实体。
[0005]本专利技术的另一个目的是为癌症患者提供替代的或甚至更好的治疗选择。
[0006]这些和进一步的目的与根据本专利技术的独立权利要求的方法和方式一致。从属权利要求涉及具体实施方案。

技术实现思路

[0007]在PCT申请PCT/EP2020/054263中公开了用于本专利技术的构思和付诸实施的方法，其内容通过引用整体并入本文。其中公开的定义和实施方案构成本公开的一部分。为清楚起见，PCT申请PCT/EP2020/054263的文本附于本申请并构成其公开内容的一部分。
[0008]专利技术的实施方案
[0009]在详细描述本专利技术之前，应当理解本专利技术不限于所描述的装置的特定组成部分或所描述的方法的处理步骤，因为这样的装置和方法可以变化。还应理解，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而不旨在限制。必须注意，如在说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括单数和/或复数指示物，除非上下文另有明确规定。此外应当理解，在给出由数值界定的参数范围的情况下，该范围被认为包括这些限制值。
[0010]还应理解，本文公开的实施方案并不意味着被理解为不相互关联的单独实施方案。一个实施方案讨论的特征也意在结合本文所示的其它实施方案来公开。如果在一种情况下，某特定特征未与一个实施方案一起公开，但与另一实施方案一起公开，则本领域技术人员将理解这并不一定意味着所述特征不打算与所述另一实施方案一起公开。本领域技术人员将理解，本申请的主旨是也针对其它实施方案公开所述特征，但是仅仅为了清楚的目的并且为了将说明书保持在可控篇幅内而没有这样做。
[0011]此外，本文引用的现有技术文献的内容通过引用并入。这尤其适用于公开标准或常规方法的现有技术文件。在这种情况下，通过引用并入的主要目的是提供充分的公开信息，并避免冗长的重复。
[0012]本专利技术的实施方案在权利要求中示出。
[0013]根据一个实施方案，提供了一种结合剂
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毒素融合蛋白，其包含anisoplin或其活性片段。优选地，所述结合剂
‑
毒素融合蛋白包含根据SEQ ID NO:48或49的毒素序列，或其
与SEQ ID NO:48或49具有至少66％序列相同性的同源物。
[0014]根据一个实施方案，提供了一种结合剂
‑
毒素融合蛋白，其包含anisoplin同源物或其活性片段。优选地，所述结合剂
‑
毒素融合蛋白包含根据SEQ ID NO:51、52或53的毒素序列，或其与SEQ ID NO:51、52或53具有至少66％序列相同性的同源物。
[0015]Anisoplin是一种真菌核糖体毒素，在自然界中由昆虫病原性真菌绿僵菌(Metarhizium anisopliae)产生。绿僵菌(M.anisopliae)在1800年代后期首次被用于小麦谷物甲虫的生物防治。从那时起，基于这种真菌的生物农药得到了极大的发展。最近，绿僵菌(M.anisopliae)也成为一种感兴趣且有前途的替代品，用于控制如冈比亚按蚊(Anopheles gambiae mosquito)等成年疟疾载体，因为对杀虫剂的抗药性的出现阻碍了控制该疾病的努力。
[0016]迄今为止，Anioplin尚未在抗肿瘤治疗的背景下进行描述，也未作为结合剂
‑
毒素融合蛋白中的毒素成分进行描述。本专利技术人首先探索了anisoplin在这些情况下的潜力，并令人惊讶地发现该毒素具有使其适合这些应用的优异特性。
[0017]在一些实施方案中，所述毒素序列与SEQ ID NO:48或49具有≥67％、≥68％、≥69％、≥70％、≥71％、≥72％、≥73％、≥74％、≥75％、≥76％、≥77％、≥78％、≥79％、≥80％、≥81％、≥82％、≥83％、≥84％、≥85％、≥86％、≥87％、≥88％、≥89％、≥90％、≥91％、≥92％、≥93％、≥94％、≥95％、≥96％、≥97％、≥98％、≥99％及最优选100％的序列相同性。
[0018]根据一个实施方案，所述蛋白质结合剂选自由以下组成的组：
[0019]·
抗体，
[0020]·
保留靶结合能力的抗体片段或衍生物，或
[0021]·
抗体模拟物。
[0022]根据一个实施方案，所述结合剂
‑
毒素融合蛋白包含将结合剂或其结构域与毒素或与毒素中包含的可裂解结构域连接的肽接头。
[0023]根据所述结合剂
‑
毒素融合蛋白的一些实施方案：
[0024]·
所述肽接头或可裂解结构域可被哺乳动物细胞表达的酶或哺乳动物宿主产生的酶特异性或非特异性裂解，和/或
[0025]·
所述肽接头或可裂解结构域不能被植物细胞表达的酶或植物宿主产生的酶裂解，和/或
[0026]·
所述结合剂
‑
毒素融合蛋白在转染的植物细胞或转染的整株植物中表达。
[0027]本领域技术人员手头有一堆常规方法来检查所述肽接头或原毒素中的可裂解结构域不可被植物细胞表达的酶或植物宿主产生的酶裂解的条件是否符合。见例如Wilbers等人(2016)。此外，本领域技术人员可以用常规方法检查所述肽接头或可裂解结构域是否可被哺乳动物细胞表达的酶或哺乳动物宿主产生的酶特异性或非特异性裂解。
[0028]根据一个实施方案，所述蛋白质结合剂结合人CD20或人CD79B。
[0029]根据本专利技术的进一步方面，结合剂
‑
毒素融合蛋白至少包含：
[0030]a)一种选自由以下组成的组的蛋白质结合剂：
[0031]·
抗体，
[0032]·
保留靶结合能力的抗体片段或衍生物，或
[0033]·
抗体模拟物，
[0034]b)RNAse、核糖体毒素或相应的原毒素，和
[0035]c)任选地，将所述结合剂或其结构域与毒素或包含在原毒素中的可裂解结构域连接的肽接头。
[0036]根据一个方面，这种结合剂
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毒素融合蛋白是选自由以下组成的组的形式之一：
[0037]·
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.结合剂
‑
毒素融合蛋白，其包含anisoplin或其活性片段，优选地包含根据SEQ ID NO:48或49的序列，或与其具有至少66％序列相同性的其同源物。2.根据权利要求1的结合剂
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毒素融合蛋白，其中所述蛋白质结合剂选自由以下组成的组：
·
抗体，
·
保留靶结合能力的抗体片段或衍生物，或
·
抗体模拟物。3.根据权利要求1或2的结合剂
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毒素融合蛋白，其中所述融合蛋白包含连接结合剂或其结构域与毒素或毒素中包含的可裂解结构域的肽接头。3.根据权利要求1至3任一项的结合剂
‑
毒素融合蛋白，其中
·
所述肽接头或可裂解结构域是能被哺乳动物细胞表达的酶或哺乳动物宿主产生的酶特异性或非特异性裂解的，和/或
·
所述肽接头或可裂解结构域是不能被植物细胞表达的酶或植物宿主产生的酶裂解的，和/或
·
所述结合剂
‑
毒素融合蛋白在转染的植物细胞或转染的整株植物中表达。4.根据权利要求1至3任一项的结合剂
‑
毒素融合蛋白，其中所述蛋白质结合剂结合人CD20或人CD79B。5.一种结合剂
‑
毒素融合蛋白，其至少包含：a)一种选自由以下组成的组的蛋白质结合剂：
·
抗体，
·
保留靶结合能力的抗体片段或衍生物，或
·
抗体模拟物，b)RNAse、核糖体毒素或相应的原毒素，和c)任选地，连接所述结合剂或其结构域与毒素或包含在所述原毒素中的可裂解结构域的肽接头，其中所述结合剂
‑
毒素融合蛋白是选自由以下组成的组的形式之一：
·
(scFv
‑
FC)
‑
(接头)
‑
毒素(二聚体)，
·
两个HC和两个LC
‑
(接头)
‑
毒素的四聚体，
·
两个LC和两个HC
‑
(接头)
‑
毒素的四聚体，或
·
两个LC
‑
(接头)
‑
毒素和两个HC
‑
(接头)
‑
毒素的四聚体，其中所述接头是任选地。6.结合剂
‑
毒素融合蛋白，其至少包含：a)一种选自由以下组成的组的蛋白质结合剂：
·
抗体，
·
保留靶结合能力的抗体片段或衍生物，或
·
抗体模拟物，b)RNAse、核糖体毒素或相应的原毒素，和c)任选地，连接所述结合剂或其结构域与毒素或包含在所述原毒素中的可裂解结构域的肽接头，
其中以下至少之一：
·
所述肽接头或所述原毒素中的可裂解结构域是能被哺乳动物细胞表达的酶或哺乳动物宿主产生的酶特异性或非特异性裂解的，和/或
·
所述肽接头或所述原毒素中的可裂解结构域是不能被植物细胞表达的酶或植物宿主产生的酶裂解的。7.结合剂
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毒素融合蛋白，其至少包含：a)一种选自由以下组成的组的蛋白质结合剂：
·
抗体，
·
保留靶结合能力的抗体片段或衍生物，或
·
抗体模拟物，b)RNAse、核糖体毒素或相应的原毒素，和c)任选地，连接所述结合剂或其结构域与毒素或包含在所述原毒素中的可裂解结构域的肽接头，其中所述结合剂
‑
毒素融合蛋白在转染的植物细胞或转染的整株植物中表达。8.结合剂
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毒素融合蛋白，其至少包含：a)一种选自由以下组成...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：ATB治疗公司，
类型：发明
国别省市：