在植物细胞或整株植物中产生结合物-毒素融合蛋白的方法技术

本发明专利技术涉及一种产生结合物

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在植物细胞或整株植物中产生结合物
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毒素融合蛋白的方法
专利

[0001]本专利技术申请涉及结合物
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毒素融合蛋白的领域。

技术介绍

[0002]在四十年前已经开发了组合靶结合物和毒素的缀合物，现在代表着对抗癌症的主要希望。这些缀合物主要由抗体
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药物
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缀合物(ADC)类别代表，由通过接头与化学细胞毒性剂化学缀合的单克隆抗体组成。这些药物结合了单克隆抗体靶向癌细胞的特异性和有效载荷的高毒性效能，以杀死被靶向的细胞，同时使健康组织不受伤害。
[0003]然而，事实证明，这一观念难以转化为临床成功。尽管其对肿瘤细胞具有特异性，但在产品未达到其有效治疗剂量的情况下，经常会发生不良反应，导致相对狭窄的治疗窗口，这可能会限制其临床反应。通常在非靶向表达的组织中观察到剂量限制性毒性(脱靶效应)，主要是由于所用接头的相对不稳定性导致不需要的毒素释放，而不是由于抗体的特异性问题(Drake and Rabuka(2015))。
[0004]除了脱靶毒性之外，已经表明只有极少本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种产生结合物
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毒素融合蛋白的方法，所述融合蛋白至少包含：a)选自以下的一种蛋白质结合物
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抗体
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保留靶结合能力的抗体片段或衍生物，或
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抗体模拟物，b)任选地，肽接头，和c)至少一种蛋白质毒素或蛋白质原毒素所述方法包括以下步骤：(i)将植物细胞或整株植物与核酸构建体接触，所述核酸构建体至少包含可操作连接的以下：A)至少一种编码所述蛋白质结合物或其靶结合链或结构域的多核苷酸，以及B1)编码可切割肽接头的多核苷酸和编码蛋白质毒素的多核苷酸，或B2)编码蛋白质原毒素的多核苷酸，所述原毒素包含用于其激活的可切割结构域，(ii)使所述构建体整合到所述植物细胞或所述整株植物的一或多个细胞的核中，和(iii)表达由所述核酸构建体编码的所述融合蛋白。2.权利要求1的方法，其还包括以下步骤：(iv)回收和/或纯化步骤(iii)中表达的所述融合蛋白。3.前述权利要求任一项的方法，其中所述植物或植物细胞来自烟草属(Nicotiana)。4.前述权利要求任一项的方法，其中所述肽接头或原毒素中的可切割结构域可由哺乳动物细胞表达的酶或哺乳动物宿主产生的酶特异性或非特异性切割。5.前述权利要求任一项的方法，其中所述可切割接头或原毒素中的可切割结构域包含选自以下的至少一个切割位点：a)内体和/或溶酶体蛋白酶切割位点，b)胞质蛋白酶切割位点，和/或c)细胞表面蛋白酶切割位点。6.前述权利要求任一项的方法，其中所述肽接头或原毒素中的可切割结构域不能被植物细胞表达的酶或植物宿主产生的酶切割。7.前述权利要求任一项的方法，其中至少一种蛋白质毒素或原毒素是酶。8.前述权利要求任一项的方法，其中所述蛋白质毒素是选自以下的至少一种：(1)细胞死亡诱导蛋白，(2)蛋白质合成抑制剂，(3)膜扰动蛋白，(4)细胞分裂抑制蛋白。9.前述权利要求任一项的方法，其中至少一种蛋白质毒素是哺乳动物毒素或其保留所述蛋白质毒素毒性活性的片段，所述毒素优选选自颗粒酶类，更优选是颗粒酶B。10.用权利要求1至9任一项的方法产生的结合物
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毒素融合蛋白。11.结合物
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毒素融合蛋白，其至少包含：a)选择的一种蛋白质结合物，b)任选地，肽接头，和
c)至少一种蛋白质毒素或蛋白质原毒素，其中所述结合物
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毒素融合蛋白由核酸构建体编码，所述核酸构建体至少包含可操作连接的以下：A)至少一种编码所述蛋白质结合物或其靶结合链或结构域的多核苷酸，以及B1)编码可切割肽接头的多核苷酸和编码蛋白质毒素的多核苷酸，或B2)编码蛋白质原毒素的多核苷酸，所述原毒素包含用于其激活的可切割结构域。12.权利要求11的结合物
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毒素融合蛋白，所述蛋白包含至少一种植物特异性N
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聚糖。13.权利要求11至12任一项的结合物
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毒素融合蛋白，其中所述蛋白质结合物结合人CD20。14.权利要求11至13任一项的结合物
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【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：ATB治疗公司，
类型：发明
国别省市：