一种耐除草剂抗虫转基因大豆GE-J12培育及特异性检测方法技术

本发明专利技术提供了一种耐除草剂转基因大豆GE

【技术实现步骤摘要】
一种耐除草剂抗虫转基因大豆GE
‑
J12培育及特异性检测方法


[0001]本专利技术涉及大豆转基因领域，特别涉及一种耐除草剂转基因大豆GE
‑
J12培育及特异性检测方法。

技术介绍

[0002]大豆具有很高的营养价值，这种大豆脂肪里含有很多不饱和脂肪酸，容易被人体消化吸收。而且大豆脂肪可以阻止胆固醇的吸收，所以大豆对于动脉硬化患者来说，是一种理想的营养品。豆渣中的膳食纤维对促进良好的消化和排泄固体废物有着举足轻重的作用。适量地补充纤维素，可使肠道中的食物增大变软，促进肠道蠕动，从而加快了排便速度，防止便秘和降低肠癌的风险。同时，膳食纤维具有明显的降低血浆胆固醇、调节胃肠功能及胰岛素水平等功能。但是现在的大豆种植时，会受到病虫害的影响导致产量降低，也可能会因为农药的喷洒导致农药残留。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供了一种耐除草剂转基因大豆GE
‑
J12培育及特异性检测方法，其能够防虫防病，具有很好的遗传性和特异性，方便推广。
[0004]为了达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0005]一种耐除草剂转基因大豆GE
‑
J12的培育方法，所述转基因大豆GE
‑
J12是通过向目的大豆中转入双价基因g2
‑
epsps和gat获得的；具体方法为：
[0006]将外源基因T
‑
DNA片段插入到目的大豆基因组3号染色体，外源基因T
‑
DNA片段插入位点为大豆基因组第3号染色体45313059
‑
45313079位间；
[0007]转基因大豆GE
‑
J12放入5
’
端侧翼序列位于目的大豆基因组19号染色体的45312369..45313059位，3
’
端侧翼序列位于目的大豆基因组19号染色体的45313081..45313738位。
[0008]作为改进，所述g2
‑
epsps基因来源于荧光假单胞杆菌，基因全长1335bp，编码444个氨基酸；gat基因来源于土壤微生物宏基因组，基因全长441bp，编码146个氨基酸。
[0009]作为改进，所述gat基因表达盒1.4Kb，由32xCaMV35S启动子783bp、gat基因441bp和PolyA终止子208bp组成；所述g2
‑
epsps基因表达盒2.4Kb，插入序列包括35S启动子572bp、叶绿体导肽rbcS加g2
‑
epsps基因为1581bp，NOS终止子271bp组成。
[0010]作为改进，所述的转基因大豆GE
‑
J12放入5
’
端侧翼序列位于目的大豆基因组19号染色体的45312369..45313059位，具体序列为：
[0011][0012][0013]作为改进，所述的3
’
端侧翼序列位于目的大豆基因组19号染色体的45313081..45313738位。具体序列为：
[0014][0015]作为改进，所述的培育方法制备的转基因大豆在育种中应用。
[0016]一种耐除草剂转基因大豆GE
‑
J12的特异性检测方法，所述的检测方法为：
[0017]S1：利用来源于转基因大豆GE
‑
J12插入位点两侧大豆基因组的引物和来源于外源
基因的引物，分别组成可以特异性检测转基因大豆GE
‑
J12中5
’
插入位置的引物对以及特异性检测3
’
插入位置的引物对；
[0018]S2：进行PCR反应，观察转基因大豆GE
‑
J12利用位于插入位点5
’
端的引物对是否可以扩增出条带，利用位于插入位点3
’
端的引物对是否可以扩增出条带并与无模板对照及受体Jack做对照；
[0019]作为改进，所述方法二中的检测引物序列如下：J12
‑
F:5'TGAATTATTAACTTACAAGACCGAT3'，J12
‑
R:5'GCTCATGTGTTGAGCATATAAGAA3'。
[0020]一种用于检测样品中存在转基因大豆植物材料的试剂盒，所述的试剂盒包括权利要求1中所述的外源基因T
‑
DNA片段、权利要求7中所述的引物对。
[0021]本专利技术的有益效果为：
[0022]本专利技术通过转基因手段能够改造大豆内部的基因序列，受体转入双价基因g2
‑
epsps和gat获得的。g2
‑
epsps基因来源于荧光假单胞杆菌，基因全长1335bp，编码444个氨基酸；gat基因来源于土壤微生物宏基因组，基因全长441bp，编码146个氨基酸，两个基因具有不同的抗性机理。耐除草剂特性的形成与植物体内草甘膦的降解和EPSP酶对草甘膦的敏感性有关。植物本身的EPSP酶对草甘膦非常敏感，它的功能可被草甘膦强烈抑制，在草甘膦处理条件下植物体由于不能合成芳香族氨基酸致死。荧光假单胞菌g2
‑
epsps基因编码一种不被草甘膦抑制的EPSP酶，通过转基因，在草甘膦处理条件下它能在植物体内代替本身的epsps基因执行功能，使植物免受草甘膦的伤害。细菌的gat基因可以在植物体内降解草甘膦，使其降解为没有除草剂活性的N
‑
乙酰草甘膦。因此转g2
‑
epsps基因和gat基因大豆可显著提高对草甘膦除草剂的耐受性，同时还具有好的抗病性。
附图说明
[0023]图1为本专利技术g2
‑
epsps基因和gat双价基因作用机制示意图；
[0024]图2为本专利技术转化体选育过程示意图；
[0025]图3为本专利技术T3代材料草甘膦抗性鉴定对比图；
[0026]图4为本专利技术T3代材料草甘膦抗性鉴定对比图；
[0027]图5为本专利技术插入序列结构及在大豆3号染色体上的相对位置示意图；
[0028]图6为本专利技术特异性检测引物在转基因大豆基因组中的相对位置示意图；
[0029]图7为本专利技术转基因大豆5
’
端(A)和3
’
端(B)插入位点特异性PCR检测示意图；
[0030]图8为本专利技术转化体插入位点特异性PCR检测示意图；
[0031]图9为本专利技术转化体特异性PCR灵敏度检测示意图。
具体实施方式
[0032]下面结合附图来进一步说明本专利技术的具体实施方式。其中相同的零部件用相同的附图标记表示。
[0033]为了使本专利技术的内容更容易被清楚地理解，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
[0034]如图1
‑
9所示，如图1...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种耐除草剂转基因大豆GE
‑
J12的培育方法，其特征在于，所述转基因大豆GE
‑
J12是通过向目的大豆中转入双价基因g2
‑
epsps和gat获得的；具体方法为：将外源基因T
‑
DNA片段插入到目的大豆基因组3号染色体，外源基因T
‑
DNA片段插入位点为大豆基因组第3号染色体45313059
‑
45313079位间；转基因大豆GE
‑
J12放入5
’
端侧翼序列位于目的大豆基因组19号染色体的45312369..45313059位，3
’
端侧翼序列位于目的大豆基因组19号染色体的45313081..45313738位。2.根据权利要求1所述的一种耐除草剂转基因大豆GE
‑
J12的培育方法，其特征在于，所述g2
‑
epsps基因来源于荧光假单胞杆菌，基因全长1335bp，编码444个氨基酸；gat基因来源于土壤微生物宏基因组，基因全长441bp，编码146个氨基酸。3.根据权利要求1所述的一种耐除草剂转基因大豆GE
‑
J12的培育方法，其特征在于，所述gat基因表达盒1.4Kb，由32xCaMV35S启动子783bp、gat基因441bp和PolyA终止子208bp组成；所述g2
‑
epsps基因表达盒2.4Kb，插入序列包括35S启动子572bp、叶绿体导肽rbcS加g2
‑
epsps基因为1581bp，NOS终止子271bp组成。4.根据权利要求1所述的一种耐除草剂转基因大豆GE
‑
J12的培育方法，其特征在于，所述的转基因大豆GE
‑
J12放入5
’
端侧翼...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱丽娟，郭勇，郭兵福，张丽娟，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：