用于癌症诊断的抗体制造技术

本发明专利技术涉及针对位于CLDN6的C端部分内的表位的抗体，其可用于例如诊断癌症和/或确定癌细胞是否表达CLDN6。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于癌症诊断的抗体
技术介绍
紧密连接蛋白(claudin)为位于上皮和内皮的紧密连接(tightjunction)内的整合膜蛋白。据预测，紧密连接蛋白包含四个跨膜区段，两个胞外环，和位于细胞质中的N端和C端。跨膜蛋白紧密连接蛋白(CLDN)家族在上皮和内皮的紧密连接的维持中起着关键作用，并且也可能在细胞骨架的维持和细胞信号传导中起作用。紧密连接蛋白-6(CLDN6)是癌胚基因(oncofetalgene)，在鼠和人的干细胞以及定型为上皮细胞命运的胚状体中表达(Turksen,K.etal.(2001)DevDyn222,292-300；AndersonWJ.etal.(2008)DevDyn237,504-12；TurksenK.etal.(2002)Development,129,1775-84；AssouS.etal.(2007)StemCells25,961-73)。作为肿瘤相关抗原，由于其在表皮形态发生的早期表达，在表皮分化和屏障形成中至关重要，因此可归类为分化抗原(differentiationantigen)。另外在上皮组织或新生儿舌、皮肤、胃和乳房的正常上皮组织中观察到表达(AbuazzaG.etal.(2006),AmJPhysiolRenalPhysiol291,1132-1141；TroyT.C.etal.(2007),MolecularBiotechnology36,166-74；ZhaoL.etal.(2008),AmJPhysiolRegulIntegrCompPhysiol294,1856-1862)。除此之外，自己的数据还揭示了CLDN6在人胎盘、膀胱、子宫内膜、前列腺和周围神经中低表达或极低表达，以及在不同癌症中频繁过表达。已证明CLDN6在肿瘤中过表达，所述肿瘤包括小儿脑肿瘤、胃腺癌和生殖细胞肿瘤以及内脏癌(例如卵巢癌)。还已证明，CLDN6在胃癌细胞中的过表达导致侵袭、转移和增殖的增加，提示了CLDN6为预后不良的标志，并且可能在维持恶性表型中起潜在作用。另外，已表明CLDN6在乳腺癌细胞系中通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而起到抑制癌症的作用。图1B所示的CLDN3、CLDN4、CLDN6和CLDN9的序列比对表明，CLDN6对其他紧密连接蛋白高度保守。CLDN6与其他紧密连接蛋白的高度同源性，特别是与CLDN9和CLDN4的高度同源性，使得难以提供具有适于诊断目的特性(如特异性和亲和力)的CLDN6抗体。本专利技术人发现针对位于CLDN6的C端部分的某个表位的抗体满足抗体的诊断应用标准，特别是用于检测和鉴定表达CLDN6的细胞。本专利技术的抗体可用于例如诊断癌症和/或确定癌细胞是否表达CLDN6。优选地，癌症疾病或癌细胞的特征在于CLDN6的表面表达。表达CLDN6的癌细胞为靶向CLDN6的疗法(例如抗CLDN6抗体的疗法)的合适靶标。在一实施方案中，癌细胞表达或异常表达CLDN6，而相应的正常细胞不表达CLDN6或CLDN6表达水平较低。
技术实现思路
在一方面，本专利技术涉及一种抗体或其抗原结合片段，其结合：(i)具有氨基酸序列EYPTKNY(SEQIDNO：38)的肽，和/或(ii)紧密连接蛋白6(CLDN6)，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN6内的表位结合来结合CLDN6，所述表位具有氨基酸序列EYPTKNY(SEQIDNO：38)，和/或(iii)具有氨基酸序列EYPTKNYV(SEQIDNO：29)的肽，和/或(iv)紧密连接蛋白6(CLDN6)，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN6内的表位结合来结合CLDN6，所述表位具有氨基酸序列EYPTKNYV(SEQIDNO：29)，和/或(v)具有氨基酸序列AISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：15)的肽，其中所述抗体或其抗原结合片段不结合具有氨基酸序列TSAPAISRGPSEYPT(SEQIDNO：14)的肽，和/或(vi)紧密连接蛋白6(CLDN6)，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN6内的表位结合来结合CLDN6，所述表位具有氨基酸序列AISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：15)，其中所述抗体或其抗原结合片段不结合具有氨基酸序列TSAPAISRGPSEYPT(SEQIDNO：14)的肽。在本文所述方面的实施方案中以及在其他方面，本专利技术涉及单克隆抗体或其抗原结合片段，其(i)结合具有氨基酸序列AISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：15)的肽和/或(ii)结合紧密连接蛋白6(CLDN6)，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN6内的表位结合来结合CLDN6，所述表位具有氨基酸序列AISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：15)。在本文所述方面的实施方案中以及在其他方面，本专利技术涉及一种抗体或其抗原结合片段，其结合以下肽中的一个或多个，优选全部：PAISRGPSEYPTKNY(SEQIDNO：22)、AISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：15)、ISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：23)、SRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：24)、RGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：25)、GPSEYPTKNYV(SEQIDNO：26)、PSEYPTKNYV(SEQIDNO：27)、SEYPTKNYV(SEQIDNO：28)和EYPTKNYV(SEQIDNO：29)，其中所述抗体或其抗原结合片段不结合具有氨基酸序列TSAPAISRGPSEYPT(SEQIDNO：14)的肽。在一实施方案中，所述抗体或抗原结合片段以最低亲和力与所述肽结合和以最高亲和力与所述肽结合的结合亲和力的差异为50％或更少、40％或更少、30％或更少、20％或更少或10％或更少。本文所述的抗体或抗原结合片段优选不与这样的肽结合，其包含氨基酸序列EYPTK(SEQIDNO：59)和/或氨基酸序列EYPTKN(SEQIDNO：60)但不包含氨基酸序列EYPTKNY(SEQIDNO：38)。换句话说，本文所述的抗体或抗原结合片段与具有氨基酸序列EYPTKNY(SEQIDNO：38)的肽和/或具有氨基酸序列EYPTKNYV(SEQIDNO：29)的肽的结合是由于第二个酪氨酸的存在，所述第二个酪氨酸在氨基酸序列EYPTK(SEQIDNO：59)和/或氨基酸序列EYPTKN(SEQIDNO：60)中缺失。如本文所示，优选的抗体或抗原结合片段不与这样的肽结合，其包含氨基酸序列YPTKNY(SEQIDNO：61)和/或EYPTKN(SEQIDNO：60)但不包含氨基酸序列EYPTKNY(SEQIDNO：38)，表明可认为氨基酸序列EYPTKNY(SEQIDNO：38)是结合这些抗体的最小表位序列。在本文所述方面的实施方案中以及在其他方面，本专利技术涉及由杂交瘤产生或可从其获得的抗体，所述杂交瘤保藏于DSMZ(德国不伦瑞克38124因霍芬路7B)，并具有以下名称和保藏号之一：1.58-4B-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体或其抗原结合片段，其结合：/n(i)具有氨基酸序列EYPTKNY(SEQ ID NO：38)的肽，和/或/n(ii)紧密连接蛋白6(CLDN6)，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN6内的表位结合来结合CLDN6，所述表位具有氨基酸序列EYPTKNY(SEQ ID NO：38)，和/或/n(iii)具有氨基酸序列EYPTKNYV(SEQ ID NO：29)的肽，和/或/n(iv)紧密连接蛋白6(CLDN6)，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN6内的表位结合来结合CLDN6，所述表位具有氨基酸序列EYPTKNYV(SEQ ID NO：29)，和/或/n(v)具有氨基酸序列AISRGPSEYPTKNYV(SEQ ID NO：15)的肽，其中所述抗体或其抗原结合片段不结合具有氨基酸序列TSAPAISRGPSEYPT(SEQ ID NO：14)的肽，和/或/n(vi)紧密连接蛋白6(CLDN6)，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN6内的表位结合来结合CLDN6，所述表位具有氨基酸序列AISRGPSEYPTKNYV(SEQ ID NO：15)，其中所述抗体或其抗原结合片段不结合具有氨基酸序列TSAPAISRGPSEYPT(SEQ ID NO：14)的肽。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170906 EP PCT/EP2017/0723861.一种抗体或其抗原结合片段，其结合：
(i)具有氨基酸序列EYPTKNY(SEQIDNO：38)的肽，和/或
(ii)紧密连接蛋白6(CLDN6)，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN6内的表位结合来结合CLDN6，所述表位具有氨基酸序列EYPTKNY(SEQIDNO：38)，和/或
(iii)具有氨基酸序列EYPTKNYV(SEQIDNO：29)的肽，和/或
(iv)紧密连接蛋白6(CLDN6)，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN6内的表位结合来结合CLDN6，所述表位具有氨基酸序列EYPTKNYV(SEQIDNO：29)，和/或
(v)具有氨基酸序列AISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：15)的肽，其中所述抗体或其抗原结合片段不结合具有氨基酸序列TSAPAISRGPSEYPT(SEQIDNO：14)的肽，和/或
(vi)紧密连接蛋白6(CLDN6)，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN6内的表位结合来结合CLDN6，所述表位具有氨基酸序列AISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：15)，其中所述抗体或其抗原结合片段不结合具有氨基酸序列TSAPAISRGPSEYPT(SEQIDNO：14)的肽。


2.权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其中所述CLDN6为细胞表面膜结合的CLDN6。


3.权利要求1或2的抗体或其抗原结合片段，其中所述CLDN6存在于癌细胞上。


4.权利要求3的抗体或其抗原结合片段，其中所述癌细胞为表达CLDN6的癌细胞。


5.权利要求3或4的抗体或其抗原结合片段，其中所述癌细胞选自卵巢癌细胞、睾丸癌细胞、胃癌细胞、乳腺癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、子宫癌细胞和膀胱癌细胞。


6.权利要求3或4的抗体或其抗原结合片段，其中所述癌细胞是转移癌细胞。


7.权利要求1-5中任一项的抗体，其为嵌合抗体、人抗体或人源化抗体。


8.权利要求1-7中任一项的抗体，其为单克隆抗体。


9.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其
(i)结合具有氨基酸序列AISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：15)的肽，和/或
(ii)结合紧密连接蛋白6(CLDN6)，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN6内的表位结合来结合CLDN6，所述表位具有氨基酸序列AISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：15)。


10.一种抗体或其抗原结合片段，其与以下肽中的一个或多个结合，优选与所有的肽结合：
PAISRGPSEYPTKNY(SEQIDNO：22)、AISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：15)、ISRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：23)、SRGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：24)、RGPSEYPTKNYV(SEQIDNO：25)、GPSEYPTKNYV(SEQIDNO：26)、PSEYPTKNYV(SEQIDNO：27)、SEYPTKNYV(SEQIDNO：28)以及EYPTKNYV(SEQIDNO：29)，其中所述抗体或其抗原结合片段不结合具有氨基酸序列TSAPAISRGPSEYPT(SEQIDNO：14)的肽。

【专利技术属性】
技术研发人员：R·米特纳赫特克劳斯，S·韦尔，K·瓦尔特，O·蒂雷西，U·沙欣，
申请(专利权)人：安斯泰来制药有限公司，约翰·古腾堡大学美因兹医学大学转化肿瘤学公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP