特异性结合至非天然存在的修饰的Fc受体的人非天然存在的修饰的IgG的Fc区制造技术

本发明专利技术提供一种多肽，其包含修饰的IgG的Fc区，以及特异性结合该多肽的修饰的Fcγ受体，以及使用免疫疗法治疗或预防患者疾病或病症的方法。症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异性结合至非天然存在的修饰的Fc受体的人非天然存在的修饰的IgG的Fc区
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2020年8月19日提交的美国临时申请号63/067,629的优先权权益。前述申请的全部内容通过引用纳入本文。
[0003]专利技术背景
[0004]近年来，利用免疫系统消除癌细胞的癌症免疫疗法的研究和开发取得了进展(Nature Reviews Drug Discovery(2019)18,第899
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900页)。特别地，表达嵌合抗原受体(CAR)的嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T)，其中抗原识别位点和激活信号转导位点相连，据报道其在单次给药后具有显著的治疗效果(The New England Journal of Medicine)(2017)377,第2545
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2554页)，人们广泛期待一种新的癌症治疗方法。
[0005]针对各种癌症类型的传统CAR
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T疗法的开发中出现了一些问题(Nature Reviews Clinical Oncology(2020)17,第147
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167页)。首先，存在安全性问题，因为在使用CAR
‑
T的免疫细胞治疗中已经报道了严重的基于免疫反应的副作用，如细胞因子释放综合征。在传统CAR
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T中，很难解决副作用的发生，因为表达CAR的细胞在转移到患者体内后不能选择性地调节其活性。癌症组织具有获得治疗耐药性的机制，同时也出现了一些问题，例如在治疗过程中出现了失去癌症相关抗原的癌细胞(Cancer Discovery(2018)8(10),第1219
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1226页)，以及具有不同特性的细胞群(异质性)。目前使用靶向单一抗原的传统CAR
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T治疗无法克服这些问题。
[0006]为了解决这些问题，正在研究使用癌症靶分子和免疫效应细胞(如T细胞和自然杀伤(NK)细胞)的组合疗法。已经开发了具有识别这些标签分子的标签分子(如FITC和CAR
‑
T)的抗体分子(WO 2012/082841、WO
[0007]2016/030414和WO 2017/091546)。通过将各种癌症靶分子与识别标签的CAR
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T组合，该技术可以将针对多种癌症抗原和癌细胞的细胞毒性活性赋予给单一类型的识别标签的CAR
‑
T。然而，存在由于将原本不存在于体内的标签分子赋予抗体而增强抗体分子的免疫原性的风险。
[0008]同时，还开发了一种利用效应细胞和抗体分子本身而不添加标签分子的技术。抗体能够通过Fc区与Fc受体结合，并向效应细胞传输信号。为与具有癌症抗原识别功能的抗体一起使用而创建的细胞包括表达IgG的Fc片段受体IIIa(称为FcγRIIIA，CD16A)作为Fc受体的NK细胞(JCI Insight.(2019)4(20):e130688)和表达与CD16A融合的CAR和信号转导位点的T细胞(CD16A CAR
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T)或NK细胞(CD16A CAR
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NK)(British Journal of Cancer(2019)120(1),第79
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87页,Oncotarget.(2017)8(23),第37128
–
37139页)。由于一种表达CD16A的NK和T细胞可以与多种癌症靶向性抗体结合，因此这些细胞也有潜力成为一种优秀的治疗方法，其能够获得对表达各种抗原的细胞的细胞毒性活性。由于使用了抗体分子本身，据信可以获得比使用加标签抗体的治疗方法具有更低的免疫原性和更高的安全性水平的治疗方法。
[0009]然而，体内血清中存在大量内源性免疫球蛋白，其也与CD16A结合。也已经证实了
血清中可溶性Fc受体的存在(Journal of Clinical Investigation(1990)86,第416
‑
423页)，其与治疗性抗体结合。换言之，当效应细胞上的CD16A被体内的免疫球蛋白占据或给予的抗体被可溶性Fc受体占据时，给予的抗体不能向效应细胞传输激活信号，且预期药物功效降低。此外，当表达CD16A的NK细胞、CD16A CAR
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T或CAR
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NK细胞与识别患者自身组织的抗体分子(例如自身抗体)给予患者时，它们可能针对患者自身组织被激活并导致组织损伤。已知CD16A突变体结合至非岩藻糖基化抗体，而不结合至未非岩藻糖基化(non
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afucosylated)的内源性免疫球蛋白(WO
[0010]2017/161333)，但这些非岩藻糖基化抗体不仅向CD16A突变体传输信号，也向内源性CD16A传输信号。不结合内源性免疫球蛋白的CD16A突变体和不结合内源性CD16A的Fc突变体的组合，及其彼此特异性组合的突变体组合至今未知。

技术实现思路

[0011]本专利技术涉及包含修饰的Fc区的多肽和特异性结合该多肽的修饰的Fcγ受体，其可用作免疫治疗。本专利技术的一个目的是提供一种内源性分子不会降低其药效的免疫治疗。
[0012]本专利技术是基于(至少部分基于)非天然存在的Fcγ受体突变体和非天然存在的Fc区的发现，所述Fcγ受体突变体不结合内源性免疫球蛋白，所述非天然存在的Fc区突变体不结合内源性Fcγ受体，其组合以特异性地结合非天然存在的Fcγ受体突变体和非天然存在的Fc区突变体作为免疫治疗用于治疗对象的用途，以及制备这些组合的方法。例如，本专利技术人在计算机上提取影响CD16A和抗体的Fc区之间结合活性的氨基酸位点，制备在CD16A和抗体的Fc区中引入了突变的突变体，并评估对野生型结合活性的改变，发现对野生型结合活性有所降低(实施例1
‑
4)。基于该发现，本专利技术人鉴定了非天然存在的Fc区突变体，所述非天然存在的Fc区突变体对野生型CD16A没有表现出结合活性，但对非天然存在的突变的CD16A保持高结合活性。本专利技术人还鉴定了不结合野生型CD16A的非天然存在的修饰的Fc区和不结合野生型抗体Fc区的非天然存在的突变的CD16A的组合。由于使用针对不同抗原的多种抗体获得了相似的结果，还确定了这些特征不依赖于抗原(实施例5
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8)。本专利技术人还建立了表达野生型CD16A或非天然存在的突变的CD16A的自然杀伤(NK)细胞系，并确认了抗体依赖性细胞毒性(ADCC)反映了结合活性，如实施例6(实施例10、11)所证。此外，本专利技术人证实了存在过量IgG1抗体的情况下实施例6中的结合活性特征(实施例9)。
[0013]本专利技术提供了预期在医学和工业中使用的作为组合物和方法的以下方面。
[0014]一方面，本专利技术提供了包含修饰的IgG的Fc区的多肽，其中所述修饰的Fc区是非天然存在的，与野生型或天然存在的IgG的Fc区相比包含至少一个氨基酸突变；该多肽基本上不具有对野生型或天然存在的Fcγ受体的结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含修饰的IgG的Fc区的多肽，其中所述修饰的Fc区是非天然存在的，与野生型或天然存在的IgG的Fc区相比包含至少一个氨基酸突变，所述多肽基本上不具有对野生型或天然存在的Fcγ受体的结合活性，与野生型或天然存在的Fcγ受体相比，所述多肽能够与包括至少一个氨基酸突变的非天然存在的Fcγ受体结合。2.如权利要求1所述的多肽，其中所述野生型或天然存在的Fcγ受体是野生型或天然存在的CD16A，所述包含至少一个氨基酸突变的非天然存在的Fcγ受体是包含至少一种氨基酸突变的非天然存在的CD16A。3.如权利要求2所述的多肽，其中所述野生型或天然存在的CD16A包括SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列。4.如权利要求2或3所述的多肽，其中所述包括至少一个氨基酸突变的CD16A包括选自下组的至少一个突变：(i)对应于SEQ ID NO:78中第131位的位置处赖氨酸突变为天冬氨酸(K131D突变)，(ii)对应于SEQ ID NO:78中第128位的位置处赖氨酸突变为谷氨酸(K128E突变)，和(iii)对应于SEQ ID NO:78中第131位的位置处赖氨酸突变为谷氨酸(K131E突变)。5.如权利要求4所述的多肽，其中所述包括至少一个氨基酸突变的CD16A包括K131D突变和K128E突变之一或两者都有。6.如权利要求4所述的多肽，其中所述包括至少一个氨基酸突变的CD16A包括K131E突变和K128E突变之一或两者都有。7.如权利要求4所述的多肽，其中所述包括至少一个氨基酸突变的CD16A包括K131D突变，还包括选自下组的至少一个突变：(iv)对应于SEQ ID NO:78中第38位的位置处天冬酰胺突变为谷氨酰胺(N38Q突变)和(v)对应于SEQ ID NO:78中第74位的位置处天冬酰胺突变为谷氨酰胺(N74Q突变)。8.如权利要求4所述的多肽，其中所述包括至少一个氨基酸突变的CD16A包括SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。9.如权利要求1
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8中任一项所述的多肽，其中所述多肽包括人Igγ1的修饰的Fc区，所述修饰的Fc区包括(i)对应于根据EU索引标号第269位的位置处谷氨酸突变为精氨酸(E269R突变)和(ii)选自下组的至少一个突变：(a)对应于根据EU索引标号第294位的位置处谷氨酸突变为精氨酸(E294R突变)和(b)对应于根据EU索引标号第294位的位置处谷氨酸突变为赖氨酸(E294K突变)。10.如权利要求1
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9中任一项所述的多肽，其中所述多肽是抗体。11.如权利要求10所述的多肽，其中所述多肽是结合至癌症抗原的抗体。12.一种使用免疫疗法治疗或预防患者的疾病或病症的方法，所述方法包括给予所述患者如权利要求1
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11中任一项所述的多肽以及表达非天然存在的Fcγ受体的细胞，与野生型或天然存在的Fcγ受体相比，所述非天然存在的Fcγ受体包括至少一个氨基酸突变，其中所述多肽能够结合至所述包括至少一个氨基酸突变的非天然存在的Fcγ受体。13.如权利要求12所述的方法，其中所述细胞是人免疫细胞。14.如权利要求13所述的方法，其中所述人免疫细胞是选自下组的细胞：T细胞、巨噬细胞、树突细胞、NKT
‑
细胞、NK细胞、小胶质细胞、破骨细胞、粒细胞、单核细胞和先天免疫细胞。15.如权利要求12
‑
14中任一项所述的方法，其中所述细胞来源于干细胞。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述干细胞选自多潜能干细胞、造血干细胞、成人干细胞、胎儿干细胞、间充质干细胞、产后干细胞、多能干细胞和胚胎生殖细胞。17.如权利要求16所述的方法，其中所述干细胞是多潜能干细胞。18.如权利要求17所述的方法，其中，所述多潜能干细胞是诱导多潜能干细胞(iPS细胞)或胚胎干细胞(ES细胞)。19.如权利要求12
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18中任一项所述的方法，其中所述细胞包括β
‑
2微球蛋白(B2M)基因中遗传工程改造的破坏。20.如权利要求19所述的方法，其中所述细胞还包含能够编码单链融合人白细胞抗原(HLA)I类蛋白的多核苷酸，所述单链融合人白细胞抗原(HLA)I类蛋白包含直接或通过接头序列共价连接HLA
‑
1α链至少一部分的B2M蛋白的至少一部分。21.如权利要求20所述的方法，其中所述HLA
‑
1α链选自HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C、HLA
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E、HLA
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F和HLA
‑
G。22.如权利要求12
‑
21中任一项所述的方法，其中所述细胞包括人白细胞抗原(HLA)II类相关基因中遗传工程改造的破坏。23.如权利要求22所述的方法，其中所述HLAII类相关基因选自：含调节因子X
‑
相关锚蛋白的蛋白(RFXANK)、调节因子5(RFX5)、调节因子X相关蛋白(RFXAP)、II类反式激活子(CIITA)、HLA
‑
DPA(α链)、HLA
‑
DPB(β链)、HLA
‑
DQA、HLA
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DQB、HLA
‑
DRA、HLA
‑
DRB、HLA
‑
DMA、HLA
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DMB、HLA
‑
DOA和HLA
‑
DOB。24.如权利要求12
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23中任一项所述的方法，其中所述细胞包含一种或多种编码单链融合HLAII类蛋白的多核苷酸或HLAII类蛋白。25.如权利要求12
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24中任一项所述的方法，其中，所述方法是治疗或预防癌症的方法。26.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1
‑
11中任一项所述的多肽和药学上可接受的赋形剂。27.如权利要求26所述的药物组合物，其与细胞用于免疫疗法的组合用途，其中所述细胞表达非天然存在的Fcγ受体，所述非天然存在的Fcγ受体与野生型或天然存在的Fcγ受体相比包含至少一个氨基酸突变，其中所述多肽能够结合至包含至少一个氨基酸突变的非天然存在的Fcγ受体。28.如权利要求27所述的药物组合物，其中所述细胞是人免疫细胞。29.如权利要求28所述的药物组合物，其中所述人免疫细胞是选自下组的细胞：T细胞、巨噬细胞、树突细胞、NKT
‑
细胞、NK细胞、小胶质细胞、破骨细胞、粒细胞、单核细胞和先天免疫细胞。30.如权利要求27
‑
29中任一项所述的药物组合物，其中所述细胞来源于干细胞。31.如权利要求30所述的药物组合物，其中所述干细胞选自多潜能干细胞、造血干细胞、成人干细胞、胎儿干细胞、间充质干细胞、产后干细胞、多能干细胞和胚胎生殖细胞。32.如权利要求31所述的药物组合物，其中所述干细胞是多潜能干细胞。33.如权利要求32所述的药物组合物，其中，所述多潜能干细胞是诱导多潜能干细胞(iPS细胞)或胚胎干细胞(ES细胞)。34.如权利要求27
‑
33中任一项所述的药物组合物，其中所述细胞包括β
‑
2微球蛋白(B2M)基因中遗传工程改造的破坏。
35.如权利要求34所述的药物组合物，其中所述细胞还包括能够编码单链融合人白细胞抗原(HLA)I类蛋白的多核苷酸，所述单链融合人白细胞抗原(HLA)I类蛋白包含直接或通过接头序列共价连接HLA
‑
1α链至少一部分的B2M蛋白的至少一部分。36.如权利要求35所述的药物组合物，其中所述HLA
‑
1α链选自HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C、HLA
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E、HLA
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F和HLA
‑
G。37.如权利要求27
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36中任一项所述的药物组合物，其中所述细胞包括人白细胞抗原(HLA)II类相关基因中遗传工程改造的破坏。38.如权利要求37所述的药物组合物，其中所述HLAII类相关基因选自：含调节因子X
‑
相关锚蛋白的蛋白(RFXANK)、调节因子5(RFX5)、调节因子X相关蛋白(RFXAP)、II类反式激活子(CIITA)、HLA
‑
DPA(α链)、HLA
‑
DPB(β链)、HLA
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DQA、HLA
‑
DQB、HLA
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DRA、HLA
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DRB、HLA
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DMA、HLA
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DMB、HLA
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DOA和HLA
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DOB。39.如权利要求27
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38中任一项所述的药物组合物，其中所述细胞包含一种或多种编码单链融合HLAII类蛋白的多核苷酸或HLAII类蛋白。40.一种用于采用免疫治疗来治疗或预防患者的疾病或病症的试剂盒，所述试剂盒包括(i)如权利要求1
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11中任一项所述的多肽和(ii)表达非天然存在的Fcγ受体的细胞，与野生型或天然存在的Fcγ受体相比，所述非天然存在的Fcγ受体包括至少一个氨基酸突变，其中所述多肽能够结合至所述包括至少一个氨基酸突变的非天然存在的Fcγ受体。41.如权利要求40所述的试剂盒，其中所述细胞是人免疫细胞。42.如权利要求41所述的试剂盒，其中所述人免疫细胞是选自下组的细胞：T细胞、巨噬细胞、树突细胞、NKT
‑
细胞、NK细胞、小胶质细胞、破骨细胞、粒细胞、单核细胞和先天免疫细胞。43.如权利要求40
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42中任一项所述的试剂盒，其中所述细胞来源于干细胞。44.如权利要求43所述的试剂盒，其中所述干细胞选自多潜能干细胞、造血干细胞、成人干细胞、胎儿干细胞、间充质干细胞、产后干细胞、多能干细胞和胚胎生殖细胞。45.如权利要求44所述的试剂盒，其中所述干细胞是多潜能干细胞。46.如权利要求45所述的试剂盒，其中，所述多潜能干细胞是诱导多潜能干细胞(iPS细胞)或胚胎干细胞(ES细胞)。47.如权利要求40
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46中任一项所述的试剂盒，其中所述细胞包括β
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2微球蛋白(B2M)基因中遗传工程改造的破坏。48.如权利要求47所述的试剂盒，其中所述细胞还包括能够编码单链融合人白细胞抗原(HLA)I类蛋白的核苷酸，所述单链融合人白细胞抗原(HLA)I类蛋白包含直接或通过接头序列共价连接HLA
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1α链至少一部分的B2M蛋白的至少一部分。49.如权利要求48所述的试剂盒，其中所述HLA
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1α链选自HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C、HLA
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E、HLA
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F和HLA
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G。50.如权利要求40
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49中任一项所述的试剂盒，其中所述细胞包括人白细胞抗原(HLA)II类相关基因中遗传工程改造的破坏。51.如权利要求50所述的试剂盒，其中所述HLAII类相关基因选自：含调节因子X
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相关锚蛋白的蛋白(RFXANK)、调节因子5(RFX5)、调节因子X相关蛋白(RFXAP)、II类反式激活子(CIITA)、HLA
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DPA(α链)、HLA
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DPB(β链)、HLA
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DQA、HLA
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DQB、HLA
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DRA、HLA
‑
DRB、HLA
‑
DMA、
HLA
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DMB、HLA
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DOA和HLA
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DOB。52.如权利要求40
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...

【专利技术属性】
技术研发人员：守屋隆一，白井宏树，曽我真司，岛田尚子，D，
申请(专利权)人：安斯泰来制药有限公司，
类型：发明
国别省市：