一种高产胞苷的大肠杆菌突变株以及发酵生产胞苷的方法技术

本发明专利技术涉及一种高产胞苷的大肠杆菌突变株以及发酵生产胞苷的方法，属于发酵技术领域，该大肠杆菌突变株是通过诱变筛选获得的，其具有如下特征：①氨甲酰磷酸合成酶182位的丙氨酸突变为缬氨酸，948位的丝氨酸突变为苯丙氨酸；②天冬氨酸氨甲酰转移酶调节亚基86位的异亮氨酸、93位的甘氨酸、109位的半胱氨酸缺失；③尿苷酸激酶72位的天冬酰胺突变为丙氨酸，159位的天冬氨酸突变为天冬酰胺；④胞苷三磷酸合成酶147位天冬氨酸突变为谷氨酸，149位谷氨酸突变为丙氨酸。该突变株在50 L发酵罐中经过发酵，胞苷产量达到90±2 g/L，糖酸转化率可达30±1%，均为现有报道的最高值。

A mutant of colibacillus with high production of cytidine and the method of producing cytidine by fermentation

【技术实现步骤摘要】
一种高产胞苷的大肠杆菌突变株以及发酵生产胞苷的方法
本专利技术属于发酵
，具体地，涉及一种高产胞苷的大肠杆菌突变株以及发酵生产胞苷的方法。
技术介绍
胞苷是合成核糖核酸与脱氧核糖核酸的前体物质，参与了许多生命体内的反应。胞苷是重要的医药合成中间体，可以用来合成扎西他滨、卡培他滨、环胞苷、阿糖胞苷、阿扎胞苷、盐酸阿糖胞苷等抗病毒与抗肿瘤药物。因此，开发大批量、工业化、低成本高效的胞苷生产方法，满足医药领域对于胞苷原料的需求是一个重要的问题。生物发酵法合成胞苷主要依赖于微生物的发酵作用，所以生物发酵所选用的微生物种类就显得至关重要。自然条件下能够合成胞苷的菌株主要来源于大肠杆菌和枯草芽孢杆菌，但是胞苷合成量很低且无法控制。采用传统诱变或分子生物学方法可以提高菌株的胞苷生产能力。日本在胞苷合成菌种的培育上取得了较多成果，成功培育出了具有胞苷脱氨酶缺失、3-脱杂氮尿嘧啶抗性、5-氟胞苷抗性、氨甲酰磷酸合成酶活力增强以及高丝氨酸脱氢酶活力缺失等特性的枯草芽孢杆菌突变株，其最大胞苷产率稳定在30g/L左右(Bioscience,biotech本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高产胞苷的大肠杆菌突变株，所述大肠杆菌突变株具有如下特征：1、氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的氨甲酰磷酸合成酶大亚基的第182位的丙氨酸突变为缬氨酸、第948位的丝氨酸突变为苯丙氨酸；2、氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的天冬氨酸氨甲酰转移酶调节亚基第86位的异亮氨酸、第93位的甘氨酸和第109位的半胱氨酸缺失；3、氨基酸序列如SEQ ID No.9所示的尿苷酸激酶第72位的天冬酰胺突变为丙氨酸、第159位的天冬氨酸突变为天冬酰胺；4、氨基酸序列如SEQ ID No.13所示的胞苷三磷酸合酶第147位天冬氨酸突变为谷氨酸、第149位谷氨酸突变为丙氨酸。/n

【技术特征摘要】
1.一种高产胞苷的大肠杆菌突变株，所述大肠杆菌突变株具有如下特征：1、氨基酸序列如SEQIDNo.1所示的氨甲酰磷酸合成酶大亚基的第182位的丙氨酸突变为缬氨酸、第948位的丝氨酸突变为苯丙氨酸；2、氨基酸序列如SEQIDNo.5所示的天冬氨酸氨甲酰转移酶调节亚基第86位的异亮氨酸、第93位的甘氨酸和第109位的半胱氨酸缺失；3、氨基酸序列如SEQIDNo.9所示的尿苷酸激酶第72位的天冬酰胺突变为丙氨酸、第159位的天冬氨酸突变为天冬酰胺；4、氨基酸序列如SEQIDNo.13所示的胞苷三磷酸合酶第147位天冬氨酸突变为谷氨酸、第149位谷氨酸突变为丙氨酸。


2.如权利要求1所述的一种高产胞苷的大肠杆菌突变株，其特征在于：所述大肠杆菌突变株，分类命名为大肠埃希氏菌（Escherichiacoli），保藏编号为CGMCCNo.19117，保藏日期为2019年12月9日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。


3.利用如权利要求2所述的大肠杆菌突变株进行胞苷发酵生产的方法，包括以下步骤：以所述大肠杆菌突变株为生产菌株，将生产菌株接种到含有6L种子培养基的10L发酵罐中进行种子培养，接种量为7-10%，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李静，李国栋，刘晓东，张孟涛，滕佳佳，张兆昆，宋会文，
申请(专利权)人：河南巨龙生物工程股份有限公司，郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南;41