一种具有桧烯高耐受能力的大肠杆菌基因工程菌及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种具有桧烯高耐受能力的大肠杆菌基因工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。该基因工程菌是以大肠杆菌为宿主细胞，在大肠杆菌中过表达不饱和脂肪酸合成酶基因fabA和不饱和脂肪酸合成酶基因fabB。本发明专利技术还提供了该大肠杆菌基因工程菌的构建方法和其在构建产桧烯基因工程菌和发酵生产桧烯中的应用。本发明专利技术不仅在一定程度上能够解决当前大肠杆菌对桧烯耐受性差的问题，打破了桧烯的积累对菌体生长造成的限制，而且为提升桧烯产量提供了新的思路，新的方法。

A high tolerance Escherichia coli gene engineering strain with sabinene and its construction method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种具有桧烯高耐受能力的大肠杆菌基因工程菌及其构建方法与应用
本专利技术涉及一种具有桧烯高耐受能力的大肠杆菌基因工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程

技术介绍
桧烯是一种重要的化工原料，可作为先进生物燃料前体、制备调味品、香水添加剂、精细化学品和药物等。桧烯作为双环萜烯，密度达到0.89g/mL，而以链烷烃为主的航空煤油密度为0.78g/mL，而含大量环烷烃的火箭煤油密度则增加至0.83g/mL。飞行器的性能，例如航程、航速和载荷等，在很大程度上取决于燃料燃烧所释放的热量。因此，提高燃料的能量(或体积热值)是低成本提高航天航空飞行器的推进性能的重要方式。已知生产桧烯的方法主要是通过自然界植物精油的萃取，但这些方法需要高温、高压和复杂的贵重金属催化剂才能实现，不仅投资大、分离提纯困难，还会造成严重的环境污染。微生物合成是一种很有前途的合成桧烯的途径。在目前的研究中，研究人员已能指出桧烯的一般合成途径。桧烯是由异戊二烯单元合成的。该途径的关键中间体是两种常见的C5前体，异戊烯基焦磷酸(IPP)及其异构体二甲基烯丙基焦磷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有桧烯高耐受能力的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主细胞，在大肠杆菌中过表达不饱和脂肪酸合成酶基因fabA和不饱和脂肪酸合成酶基因fabB；其中：所述不饱和脂肪酸合成酶基因fabA的GenBank序列登录号为ABJ00363.1；所述不饱和脂肪酸合成酶基因fabB的GenBank序列登录号为AVJ11102.1。/n

【技术特征摘要】
1.一种具有桧烯高耐受能力的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主细胞，在大肠杆菌中过表达不饱和脂肪酸合成酶基因fabA和不饱和脂肪酸合成酶基因fabB；其中：所述不饱和脂肪酸合成酶基因fabA的GenBank序列登录号为ABJ00363.1；所述不饱和脂肪酸合成酶基因fabB的GenBank序列登录号为AVJ11102.1。


2.根据权利要求1所述的具有桧烯高耐受能力的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌为E.coliBL21(DE3)。


3.一种如权利要求1所述的具有桧烯高耐受能力的大肠杆菌基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)构建含有不饱和脂肪酸合成酶基因fabA的重组质粒；
2)构建含有不饱和脂肪酸合成酶基因fabB的重组质粒；
3)构建同时含有不饱和脂肪酸合成酶基因fabA和不饱和脂肪酸合成酶基因fabB的重组质粒；
4)将步骤1至步骤3获得的三个重组质粒导入大肠杆菌中，得到具有桧烯高耐受能力的大肠杆菌基因工程菌。


4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将不饱和脂肪酸合成酶基因fabA连接到质粒pTrcHis-2B上，得到重组质粒pHB1；
2)将不饱和脂肪酸合成酶基因fabB连接到质粒pTrcHis-2B上，得到重组质粒pHB2；
3)将不饱和脂肪酸合成酶基因fabB连接到重组质粒pHB1上或不饱和脂肪酸合成酶基因fabA连接到将重组质粒pHB2上，得到重组质粒pHB3；
4)将重组质粒pHB1、重组质粒pHB2和重组质粒pHB3导入E.coliB...

【专利技术属性】
技术研发人员：咸漠，吴桐，张海波，张鸽，李兴，王帆，
申请(专利权)人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37