泊洛沙姆和/或泊洛沙胺与PEG脂质组合的复合物纳米粒制造技术

泊洛沙姆和/或泊洛沙胺与PEG脂质组合的阳离子复合物纳米粒，涉及基因治疗领域，其包括泊洛沙姆和或泊洛沙胺与PEG脂质。所述阳离子复合物纳米粒包括

Poloxamer and / or poloxamide / PEG lipid complex nanoparticles

【技术实现步骤摘要】
泊洛沙姆和/或泊洛沙胺与PEG脂质组合的复合物纳米粒
本专利技术涉及基因治疗领域，具体涉及一种用于核酸递送的泊洛沙姆和/或泊洛沙胺与脂质组合的阳离子复合物纳米粒，以及制备这种阳离子复合物纳米粒的方法，及其用于体内外细胞基因转染的用途，及其在疫苗新药领域的应用。
技术介绍
基因治疗是指将外源治疗性基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。基因递送是通过递送技术将有生物活性的外源治疗性基因递送至病人的受体细胞中，并使外源治疗性基因翻译产生蛋白多肽从而治疗某种疾病。基因转染是一种将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能的技术。近年来，随着基因的体外合成技术、载体技术和编辑技术等生物技术的成熟，基因治疗时代已经正式来临。此前，美国FDA批准了AlnylamPharmaceuticals公司的两款基于RNA干扰(RNAi)技术的基因治疗药物Onpattro和Gilvaari，它们分别用于治疗遗传性甲状腺素转运蛋白淀粉样变性(hereditarytransthyretinamyloidosishATTR)多发神经病变和急性肝卟啉症(AHP)，这在基因治疗领域的新药开发史上具有里程碑意义。然而在另一领域，随着如蛋白替代疗法、蛋白补充疗法、癌症和传染病的疫苗接种等更多关于mRNA应用场景的发现，人们开始着手克服mRNA的缺点如体内外稳定性、短半衰期和不利的免疫原性等，以挖掘其更多的功能。与DNA基因疗法相比，IVTmRNA疗法有自己的优势。IVTmRNA不需要进入细胞核就能发挥作用；相比之下，DNA疗法需要进入细胞核转录成RNA。这主要是由于mRNA是在细胞质起作用，不需要穿越难以逾越的细胞核膜，因此mRNA不会整合进入靶细胞的基因组，也就不存在插入诱变的风险。基于mRNA的疗法和药物开发引起了科学家与投资者的广泛兴趣。2019年底从中国爆发的2019-nCoV新型冠状病毒疫情来势凶猛，全球有69000多人感染，死亡人数超过1700人，但绝大多数发生在中国，其他20多个国家有300多人感染此病，严峻的形势让全球研究人员争相研发疫苗。疫苗一般分为两类：预防性疫苗和治疗性疫苗。预防性疫苗主要用于疾病的预防，接受者为健康个体或新生儿；治疗性疫苗主要用于患病的个体，接受者为患者，如肿瘤患者。预防性疫苗是将病原微生物(如细菌、立克次氏体、病毒等)及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用转基因等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。肿瘤疫苗属于治疗性疫苗，其工作原理是将肿瘤细胞、肿瘤相关蛋白或多肽、表达肿瘤抗原的基因等，导入患者体内，克服肿瘤引起的免疫抑制状态，增强免疫原性，激活患者自身的免疫系统，诱导机体细胞免疫和体液免疫应答，从而达到控制或清除肿瘤的目的。DNA疫苗是20世纪90年代发展起来的新型疫苗，是继减毒疫苗、基因工程疫苗之后的第3代疫苗。DNA疫苗不仅有预防疾病的作用，同时还具有治疗疾病的作用。DNA疫苗是由插入一种或多种外源基因的质粒DNA和真核启动调控基因等元件构成的，载有外源抗原的质粒DNA在一种真核启动子和加尾信号以及相关增强子等基因单元的控制下，可在哺乳动物的各类细胞中表达出相关的抗原蛋白。将重组有外源抗原编码基因的质粒，利用某种基因递送方法导入人或动物的细胞内，通过宿主细胞的转录系统，在被免疫对象机体的活体细胞内合成抗原蛋白，从而诱导机体产生免疫应答。DNA疫苗具有以下优点：DNA接种载体(如质粒)的结构简单，提纯质粒DNA的工艺简便，因而生产成本较低，且适于大批量生产；DNA分子克隆比较容易，使得DNA疫苗能根据需要随时进行更新；DNA分子很稳定，可制成DNA疫苗冻干苗，使用时在盐溶液中可恢复原有活性，因而便于运输和保存；比传统疫苗安全，虽然DNA疫苗具有与弱毒疫苗相当的免疫原性，能激活细胞毒性T淋巴细胞而诱导细胞免疫，但由于DNA序列编码的仅是单一的一段病毒基因，基本没有毒性逆转的可能，因此不存在减毒疫苗毒力回升的危险，而且由于机体免疫系统中DNA疫苗的抗原相关表位比较稳定，因此DNA疫苗也不像弱毒疫苗或亚单位疫苗那样，会出现表位丢失的现象。质粒本身可作为佐剂，因此使用DNA疫苗不用加佐剂，既降低成本又方便使用；将多种质粒DNA简单混合，就可将生化特性类似的抗原(如来源于相同病原菌的不同菌株)或一种病原体的多种不同抗原结合在一起，组成多价疫苗，从而使一种DNA疫苗能够诱导产生针对多个抗原表位的免疫保护作用，使DNA疫苗生产的灵活性大大增加。但DNA疫苗存在以下严重的安全性问题：外源DNA进入机体后是否整合到宿主基因组，导致癌基因激活或抑癌基因失活；疫苗DNA长期在体内表达是否会诱导机体产生免疫耐受，长远来说，导致机体免疫功能低下；疫苗DNA作为一种外来物质，是否会引起机体产生抗DNA抗体；DNA疫苗诱导的CTL反应是否会对其他细胞产生杀伤作用。这些潜在的风险限制了DNA疫苗的广泛应用。mRNA疫苗是近几年发展起来的新型疫苗，是继减毒疫苗、基因工程疫苗、DNA疫苗之后的第4代新型疫苗，安全性比DNA疫苗更具优势。mRNA疫苗作为一种新的应对方案，是将编码抗原蛋白的mRNA直接导入细胞，通过细胞的表达系统合成蛋白,从而诱导特异免疫应答，与传统的减毒活疫苗、灭活疫苗、抗毒素、亚单位疫苗(含多肽疫苗)、载体疫苗、DNA疫苗相比有明显的优势。首先，mRNA可被正常的细胞过程降解，降低代谢毒性的风险，体内半衰期可以通过某些修饰和递送方式进行调节，因此mRNA在体内会经历一个自然的降解过程；其次，mRNA易于合成，可编码任何新抗原，mRNA疫苗可以快速制备，通常生产一种传统流感疫苗需要至少6个月时间，而mRNA疫苗由于高产量的体外转录反应，在实现标准化生产的情况下30天内就可以生产出所需疫苗，时效性尤其在应对新型冠状病毒和禽流感病毒疫情尤为重要；另外，mRNA水溶性较好，更易成药，通过搭载各种修饰和递送方式，可有效提高mRNA疫苗稳定性，避免其在进入细胞前被体内RNA酶所降解；mRNA进入胞内后通过蛋白质翻译由机体自体产生足够的新抗原以快速启动局部T细胞，mRNA疫苗能够有效诱导B细胞和T细胞免疫应答，能引起免疫记忆效果，可以传递更多有效抗原。免疫原性方面，mRNA疫苗可以被专门设计为编码多种肽和蛋白质结构，从而表达整个抗原，还可以设计成一次表达多个抗原或在同一个纳米制剂中包含几个甚至几十段IVTmRNA序列用于制备多价mRNA疫苗。此外mRNA疫苗是非感染性的，属于非集成平台，避免了感染和插入突变的风险，还有成本低，便于保存和运输的优点。IVTmRNA除了应用于mRNA疫苗或其他恶性肿瘤免疫疗法开发外，IVTmRNA还可以应用于罕见遗传疾病的治疗、蛋白替代或蛋白补充疗法、多功能干细胞疗法和核酸酶的基因组工程等。使本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.泊洛沙姆和/或泊洛沙胺与PEG脂质组合的阳离子复合物纳米粒，其包含泊洛沙姆和或泊洛沙胺与PEG脂质；所述泊洛沙胺选自

【技术特征摘要】
1.泊洛沙姆和/或泊洛沙胺与PEG脂质组合的阳离子复合物纳米粒，其包含泊洛沙姆和或泊洛沙胺与PEG脂质；所述泊洛沙胺选自304、701、704、707、803、901、904、908、1107、1301、1304、1307或90R4、150R1中的一种或几种；所述泊洛沙姆选自17R4、P10R5、L-121、L-31、L-64、L-85、P-10R5、L-35、L-61、P-123、F108、F127、F68、P105、P104、P-85、P103或L122中的一种或几种；所述PEG脂质为PEG-C-DMG、mPEG-C-CLS、DSPE-PEG-Mal、DSPE-PEG-NH2或mPEG-DSPE，尤其是指PEG2000-C-DMG、mPEG1000-C-CLS、mPEG2000-C-CLS、mPEG5000-C-CLS、mPEG10000-C-CLS、DSPE-PEG2000-Mal、DSPE-PEG5000-NH2或mPEG2000/5000-DSPE。


2.如权利要求1所述阳离子复合物纳米粒，其特征在于包括如下脂质PC、DSPC、DOTAP或DOPE。


3.如权利要求1所述阳离子复合物纳米粒，其特征在于所述阳离子复合物纳米粒组合物包括904、L-64、304、90R4、704、701、17R4、P-85、L-31、L-61中的一种或几种。


4.如权利要求1所述阳离子复合物纳米粒，其特征在于所述阳离子复合物纳米粒组合物由L64:P10R5:mPEG2000-DSPE:DSPC:mPEG5000-C-CLS摩尔比为50:50:3:20:80组成。


5.如权利要求1所述阳离子复合物纳米粒，其特征在于所述阳离子复合物纳米粒组合物由:PEG2000-C-DMG:PC:mPEG2000-C-CLS摩尔比为100:3:120:80组成。
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【专利技术属性】
技术研发人员：张龙贵，刘晨，
申请(专利权)人：深圳厚存纳米药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44