一种抗CCR5抗体及其在治疗肿瘤中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种抗CCR5抗体及其在治疗肿瘤中的应用，能够抑制RANTES与CCR5的结合，能够抑制肿瘤生长或抑制肿瘤细胞转移，能够减少黑色素瘤中MDSC数量，能够用于预防或治疗黑色素瘤，有着广阔的应用前景。

An anti CCR5 antibody and its application in the treatment of tumor

【技术实现步骤摘要】
一种抗CCR5抗体及其在治疗肿瘤中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体的涉及抗CCR5抗体及其在治疗黑色素瘤中的应用。
技术介绍
黑色素瘤起源自胚胎期神经脊，是一种恶性程度极高的肿瘤，全球每年新发皮肤恶性黑色素瘤约20余万例，而中国每年新发病例达2万余例[1]。黑色素瘤易出现淋巴与血行转移，预后差，发生远处转移后患者5年生存率较低，传统化疗药物对黑色素瘤疗效有限，五年生存率低于10％，且易发生耐药。分子靶向药物对于黑色素瘤具有较强的针对性与有效性，可使患者的生存质量得到改善，与传统化疗对比具有明显优势，在肿瘤的治疗上日益受到人们的关注，掀起了黑色素瘤治疗研究的新热潮。目前免疫检查点抑制剂PD-1/PD-L1和CTIA-4抑制剂[2-4]，经典分子靶向药物BRAF、MEK抑制剂[5-7]都取得了一定的疗效，但免疫治疗存在毒副作用[8-12]。且随着免疫学的发展，不断有新的治疗靶点被发现。有研究表明阻断CC趋化因子受体5(C-Cchemokinereceptortype5,CCR5)后能够抑制黑色素瘤的发展[13-16]，因此CCR5可能成为新的黑色素瘤治疗靶点。趋化因子受体5(C-Cchemokinereceptortype5,CCR5)是一个能G蛋白偶联的细胞趋化蛋白受体,具有蛋白偶联受体所特有的特征性7个跨膜区,CCR5主要表达在单核细胞,树突细胞，T细胞，NK细胞等白细胞上[14,17],近来研究认为它是活化Th1细胞的表面标志物。当与其特异性配体CCL3(MIP-1a),CCL4(MIP-1b)和CCL5(RANTES)结合后,激活G蛋白并最终引起胞内Ca+浓度的升高及蛋白激酶C的活化,活化后的效应表现为炎性反应及对白细胞的趋化性等各种生理功能[18]。此外，研究表明趋化因子与其受体在肿瘤的生长、迁移及血管新生方面起着重要作用。其中趋化因子RANTES和其受体CCR5结合后，引起短暂的钙离子流，导致受体极化和细胞迁移，增加癌细胞的运动能力和侵袭能力，对癌细胞的浸润、转移以及生长产生影响。CCR5与许多疾病的发生发展有密切关系,是HIV-1感染初期的主要辅助受体之一,为药物治疗HIV-1感染的高度有效的靶点[19],且与类风湿性关节炎,自身免疫性心肌炎,糖尿病等急慢性炎症有着重要的联系[20-22]。有研究显示CCR5的表达与黑色素瘤的发展有关且抑制CCR5表达后能够抑制黑色素瘤的发展[15-16]。最近研究表明阻断CCR5能够抑制黑色素瘤的生长，增加T细胞迁移同时减弱骨髓来源抑制性细胞(myeloid-derivedsuppressorcells,MDSCs)的免疫抑制功能和浸润[13]。到目前为止，有许多CCR5抗体在W02003072766、W02006103100、WO2008037419、W00158916、US20040043033、US6528625等专利中提及，但一方面它们对CCR5的结合能力还并不十分理想，另一方面，它们也并没有用来治疗黑色素瘤。CN202010094816.0是申请人之前的研究结果，其中公开了一个CCR5抗体4E8，该抗体虽然在CCR5的结合能力和黑色素瘤的治疗上都有着不错的效果，然而其在抑制RANTES诱导的Ca2+转移的能力上并不突出，还有改进的空间。
技术实现思路
为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术的目的在于提供一种新的且具有更高CCR5结合能力的抗CCR5抗体，为黑色素瘤的治疗提供一种新可能性。本专利技术提供以下技术方案：一种CCR5抗体，由重链和轻链组成，重链和轻链分别包括可变区和恒定区，其中重链可变区包含3个互补决定区，分别命名为VH-CDR1，VH-CDR2,VH-CDR3；同样地，轻链可变区也包含3个互补决定区，分别命名为VL-CDR1,VL-VDR2,VL-CDR3。所述CCR5抗体的重链包含如SEQIDNO:1所示的VH-CDR1氨基酸序列，和如SEQIDNO:2所示的VH-CDR2氨基酸序列，和如SEQIDNO:3所示的VH-CDR3氨基酸序列；所述CCR5抗体的轻链包含如SEQIDNO:4所示的VL-CDR1氨基酸序列，和如SEQIDNO:5所示的VL-CDR2氨基酸序列，和如SEQIDNO:6所示的VL-CDR3氨基酸序列。本专利技术所述CCR5抗体包含SEQIDNO:7所示的重链可变区和SEQIDNO:8所示的轻链可变区。本专利技术所述CCR5抗体的重链可变区和轻链可变区均包含框架区，所述抗体轻链可变区进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链框架区。所述抗体重链可变区进一步包含鼠源IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3或其变体的重链框架区。本专利技术所述CCR5抗体包含恒定区,并且所述恒定区是人源化的，包含选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区和包含选自kappa或Lambda亚型的轻链恒定区。在一些实施方案中,所述CCR5抗体以42.8±11.2ng/ml的EC50值与CCR5相结合。在一些实施方案中，所述CCR5抗体能够抑制黑色素瘤生长或抑制黑色素瘤细胞转移。在一些实施方案中，所述CCR5抗体能够减少黑色素瘤中MDSC细胞数量。本专利技术提供一种治疗黑色素瘤的方法，其特征在于：使用本专利技术所述的抗CCR5抗体。本专利技术所述的CCR5抗体可应用于制备治疗转移性肿瘤药物中，优选为治疗黑色素瘤药物。本专利技术所使用的术语“抗体”指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有特异性结合抗原的抗原结合位点的分子，涵盖全长抗体(例如，IgG1或IgG4抗体)、其各种功能性片段(例如可仅包含抗原结合部分，如Fab、Fab′、F(ab′)2)。抗体的实例包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、Fab、Fab′、F(ab′)2片段等。术语“单克隆抗体”，指由单一的克隆细胞株得到的抗体，所述的细胞株不限于真核的，原核的或噬菌体的克隆细胞株。单克隆抗体或抗原结合片段可以用如杂交瘤技术、重组技术、噬菌体展示技术，合成技术(如CDR-grafting)，或其它现有技术进行重组得到。Fab片段”由一条轻链和一条重链的CH1及可变区组成。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。“Fab′片段”含有一条轻链和一条重链的VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间的恒定区部分，由此可在两个Fab′片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成F(ab′)2分子。“F(ab′)2片段”含有两条轻链和两条重链的VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间的恒定区部分，由此在两条重链间形成链间二硫键。因此，F(ab′)2片段由通过两条重链间的二硫键保持在一起的两个Fab′片段组成。本文所用术语“超变区”或“CDR区”或“互补决定区”，是指负责抗原结合的抗体氨基酸残基。CDR区序列可以由Kabat、Chothia方法来定义或本领域熟知的任何CDR区序列确定方法而鉴定的可变区内的氨基酸残基。本专利技术所用的方法可利用或根据这些方法中的任一种所定义的C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗CCR5抗体，由重链和轻链组成，重链和轻链分别包括可变区和恒定区，其中重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示的VH-CDR1氨基酸序列，和如SEQ ID NO:2所示的VH-CDR2氨基酸序列，和如SEQ ID NO:3所示的VH-CDR3氨基酸序列；轻链可变区包含如SEQ ID NO:4所示的VL-CDR1氨基酸序列，和如SEQ ID NO:5所示的VL-CDR2氨基酸序列，和如SEQ ID NO:6所示的VL-CDR3氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗CCR5抗体，由重链和轻链组成，重链和轻链分别包括可变区和恒定区，其中重链可变区包含如SEQIDNO:1所示的VH-CDR1氨基酸序列，和如SEQIDNO:2所示的VH-CDR2氨基酸序列，和如SEQIDNO:3所示的VH-CDR3氨基酸序列；轻链可变区包含如SEQIDNO:4所示的VL-CDR1氨基酸序列，和如SEQIDNO:5所示的VL-CDR2氨基酸序列，和如SEQIDNO:6所示的VL-CDR3氨基酸序列。


2.根据权利要求1所述的抗CCR5抗体，其特征在于：所述重链可变区序列的为序列表SEQIDNo:7的氨基酸序列；所述轻链可变区序列的为序列表SEQIDNo:8的氨基酸序列。


3.根据权利要求1-2任一项所述的抗CCR5抗体，其特征在于：所述抗体为全长抗体或其各种功能性片段如鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、Fab、Fab′、F(ab...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭菲，顾超，
申请(专利权)人：北京岳昊科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11