一种抗人PD-L1抗体及其抗原结合片段、制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种抗人PD‑L1抗体或其抗原结合片段、制备方法和应用。本发明专利技术还提供了包含本发明专利技术的分离的多核苷酸的载体。本发明专利技术还提供了本发明专利技术的抗体或其抗原结合片段在制备药物中的用途，所述药物用于治疗和/或预防通过增强免疫应答和/或通过暴露于干扰素而受益的病症，其中所述病症是癌症或病毒感染，例如乙肝病毒感染。

An anti human PD-L1 antibody and its antigen binding fragment, preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种抗人PD-L1抗体及其抗原结合片段、制备方法和应用
本专利技术属于生物免疫
，具体涉及能特异性结合人PD-L1并阻断其与程序性死亡分子l(PD-l)的结合的抗人PD-L1抗体及其抗原结合片段，本专利技术还涉及所述抗体及其抗原结合片段的制备方法和用途。
技术介绍
程序性细胞死亡因子配体1(Programmedcelldeath1ligand1，PD-L1)，也称为CD274或B7-H1，是一种由290个氨基酸组成的40kDa的1型跨膜蛋白。PD-L1属于B7家族，具有IgV和IgC样区、跨膜区及胞浆尾部，PD-L1与其T细胞上的程序性细胞死亡因子1(Programmedcelldeath1，PD-1)相互作用，在抑制免疫系统中起主要作用。PD-L1与PD-1的结合可产生抑制信号，抑制抗原特异性T细胞的增殖，同时减少调节性T细胞(Treg细胞)的凋亡。因此，高表达PD-L1的肿瘤细胞能够通过这种免疫抑制作用躲避过免疫监视。在正常免疫系统中，PD-L1在免疫耐受方面，起着极其重要的作用。研究表明PD-L1表达在牙周膜细胞表面，促进T细胞的凋亡并抑制炎症细胞对牙周膜细胞的损伤作用(张杰华等，第九届全国免疫学学术大会论文集，2014)。在肿瘤方面，在淋巴瘤、绒毛膜癌、黑色素瘤、食管癌等大多数肿瘤细胞系都检测到了PD-L1的表达，致使T细胞的凋亡，清除活化的T细胞(DongH等，NatMed,2002,8(8):793-800.)。PD-L1在乳腺癌(MuenstS，BreastCancerResTreat,2014,146(1):15-24.)、胃癌(KimJW.GastricCancer,2014oma[J].Annoncol,2014,25(11):2178-2184)等多种肿瘤中表达上调，而在正常组织中低表达或不表达。肿瘤细胞免疫逃逸是肿瘤躲避免疫系统清除的重要原因之一。表达于肿瘤细胞表面的PD-L1与PD-1结合抑制T细胞的激活，使其不能发现肿瘤。抗PD-L1单抗能有效结合癌细胞表面的PD-L1，阻断信号通路，激活T细胞，并杀死肿瘤细胞。阻断PD-L1/PD-1通路能提高T细胞的反应。研究发现，PD-L1在非肌层浸润性膀胱癌细胞表达水平与肿瘤病理分期相关，根据PD-L1的表达选择药物，可以提高治疗效果。下调肺腺癌A549细胞PD-L1的mRNA表达，可以增强杀伤细胞对A549细胞的杀伤作用(蒋涛，现代肿瘤医学.2015.23(12):1641-1643)，PD-L1蛋白是非小细胞肺癌中预测肿瘤术后进展的重要指标(刘明东，现代肿瘤医学.2017.885-889)。PD-L1的预后指标作用在其他肿瘤的研究中也有相关报道。在慢性病毒感染性疾病方面，研究结果显示，在PD-L1基因敲除小鼠中，大量CD8+T细胞聚集在肝内，使活化T细胞的清除率下降，导致自身免疫性肝炎的发病率上升(DongH.，Immunity,2004,20(3):327-336.)。研究发现，在活化的T细胞或者在病毒感染期，干扰素上调PD-L1在肝细胞上的表达，并与表达在T细胞上PD-1共同作用，诱导T细胞凋亡。研究慢性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒感染小鼠，结果表明，对功能受损病毒特异性CD8+T细胞进行基因表达分析比较，发现PD-L1在感染的细胞上也高表达，对PD-1/PD-L1信号通路进行阻断可以增强T细胞的反应性，恢复CD8+T细胞部分功能。此机制有助于为慢性感染性疾病制定治疗策略。抗体药物是以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程技术制备的药物，具有特异性高，机制明确，疗效显著，毒副作用少等优点，在各种疾病治疗、特别是对肿瘤治疗有非常广阔的前景。许多PD-L1抑制剂正在开发中作为免疫肿瘤学疗法，目前美国FDA已经批准使用的抗PD-L1的单抗药物为罗氏(Roche/Genentech)的Atezolizumab(Tecentriq)，在临床上用于治疗膀胱癌和非小细胞肺癌。已上市的PD-L1抗体还包括Atezolizumab和Avelumab。基于此，当前对更高效，特异性更强的抗PD-L1抗体存在需求。
技术实现思路
基于现有技术的不足，本专利技术的主要目的在于提供一种高效、安全的抗人PD-L1抗体。本专利技术还提供了所述抗体的制备方法和用途，本专利技术的抗人PD-L1抗体通过调节人免疫功能治疗多种癌症或病毒感染。一方面，本专利技术提供了一种抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段，其包含一个或多个选自以下的重链可变区：VHCDR1，其包含如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；VHCDR2，其包含如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；和VHCDR3，其包含如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列。优选地，所述抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段还，包含一个或多个选自以下的轻链可变区：VLCDR1，其包含如SEQIDNO:4所示的氨基酸序列；VLCDR2，其包含如SEQIDNO:5所示的氨基酸序列；和VLCDR3，其包含如SEQIDNO:6所示的氨基酸序列。在根据本专利技术的一个实施方案中，抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段还包含人源重链恒定区和/或人源轻链恒定区连接；优选地，所述人源重链恒定区选自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链恒定区，所述人源轻链恒定区选自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4轻链恒定区；更优选地，所述人源重链恒定区为人IgG1重链恒定区，所述人源轻链恒定区为κ链。在根据本专利技术的一个实施方案中，抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段是骆驼化单域抗体、scFv、scFv二聚体、BsFv、dsFv、dsFv2、dsFv-dsFv'、Fv片段、Fab、Fab'、F(ab')2、ds双功能抗体、纳米抗体、域抗体或双价域抗体。在根据本专利技术的一个实施方案中，抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的重链可变区包含SEQIDNO:7所示的氨基酸序列。在根据本专利技术的一个实施方案中，抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的轻链可变区包含SEQIDNO:8所示的氨基酸序列。在根据本专利技术的一个实施方案中，抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的重链包含SEQIDNO:9所示的氨基酸序列。在根据本专利技术的一个实施方案中，抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的轻链包含SEQIDNO:10所示的氨基酸序列。在根据本专利技术的一个实施方案中，抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的重链可变区包含SEQIDNO:13所示的氨基酸序列。在根据本专利技术的一个实施方案中，抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的轻链可变区包含SEQIDNO:14所示的氨基酸序列。在根据本专利技术的一个实施方案中，抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的重链包含SEQIDNO:15所示的氨基酸序列。在根据本专利技术的一个实施方案中，抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的轻链包含SEQIDNO:16所示的氨基酸序列。在根据本专利技术的另一个实施方案中，所述抗人PD-L1抗体或其抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段，其包含一个或多个选自以下的重链可变区：/nVH CDR1，其包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；/nVH CDR2，其包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；和/nVH CDR3，其包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段，其包含一个或多个选自以下的重链可变区：
VHCDR1，其包含如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；
VHCDR2，其包含如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；和
VHCDR3，其包含如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列。


2.根据权利要求1所述的抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段还包含一个或多个选自以下的轻链可变区：
VLCDR1，其包含如SEQIDNO:4所示的氨基酸序列；
VLCDR2，其包含如SEQIDNO:5所示的氨基酸序列；和
VLCDR3，其包含如SEQIDNO:6所示的氨基酸序列。


3.根据权利要求1或2所述的抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段还包含人源重链恒定区和/或人源轻链恒定区；更优选地，所述人源重链恒定区选自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区，所述人源轻链恒定区选自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的轻链恒定区；进一步优选地，所述人源重链恒定区为人IgG1的重链恒定区，所述人源轻链恒定区为κ链；
优选地，所述抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段是骆驼化单域抗体、scFv、scFv二聚体、BsFv、dsFv、dsFv2、dsFv-dsFv'、Fv片段、Fab、Fab'、F(ab')2、ds双功能抗体、纳米抗体、域抗体或双价域抗体。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的重链可变区包含SEQIDNO:7所示的氨基酸序列；
优选地，所述抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的轻链可变区包含SEQIDNO:8所示的氨基酸序列；
优选地，所述抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的重链包含SEQIDNO:9所示的氨基酸序列；
优选地，所述抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的轻链包含SEQIDNO:10所示的氨基酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫世甫，赵静，
申请(专利权)人：南京优迈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32