融合蛋白及其制备用于治疗肿瘤和病毒感染的药物的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种融合蛋白及其制备用于治疗肿瘤和病毒感染的药物的应用，所述融合蛋白包含特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段和人干扰素IFNα

【技术实现步骤摘要】
融合蛋白及其制备用于治疗肿瘤和病毒感染的药物的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域。具体地，本专利技术涉及一种融合蛋白及其用途。更具体地，本专利技术涉及抗OX40抗体和人干扰素的融合蛋白及其在制备用于治疗肿瘤和/或病毒感染的药物中的应用。

技术介绍

[0002]人OX40主要表达于活化的T细胞上，包括CD4、CD8、Th和Treg细胞等。在T细胞上OX40的表达很低，但是经过抗原诱导刺激后其表达水平上调，并在12小时至5
‑
6天内达到峰值。类似地，OX40L的表达也受到细胞活化状态的影响。APC细胞在抗原刺激后1
‑
3天可以检测到OX40L的表达。有趣的是，除了免疫细胞外，肌肉细胞在炎症因子的刺激下也会表达OX40L，提示OX40L
‑
OX40信号通路可能广泛作用于机体的炎症反应。
[0003]抗原依赖的OX40L/OX40共刺激分子的活化与T细胞内多个信号通路相偶联。晶体结构研究表明，OX40L与OX40的结合可诱导OX40
‑
OX40L复合物三聚体化，从而在胞内形成与受体相关因子(receptor
‑
associated factor，TRAF)的结合位点。后者(TRAF2、5)则可进而激活NF
‑
κB信号通路，抑制T细胞凋亡。有研究发现，OX40活化可以导致Bcl
‑
2和Bcl
‑
xL高表达，提示OX40可能通过NF
‑
κB信号通路诱导抗凋亡蛋白表达而实现其抑制T细胞凋亡的功能。
[0004]PKB/PI3K是OX40下游的另一个重要信号通路。研究发现，一方面，T细胞上OX40的共刺激信号是维持PKB活化的必要条件，另一方面，组成型活化的PKB可以拮抗OX40缺陷导致的T细胞中抗凋亡蛋白的下调。OX40共刺激信号可以通过PKB/PI3K信号通路维持Survivin蛋白的表达。
[0005]最后，T细胞上TCR和OX40的活化还可以协同引起钙流和NFAT信号通路的活化，调节包括IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
5和IFN
‑
γ在内的细胞因子的表达。
[0006]综上，上述研究表明OX40的活化可以通过NF
‑
κB信号通路、PKB/PI3K信号通路和NFAT信号通路来调节T细胞的增殖、凋亡和细胞因子分泌活性，从而达到增强免疫系统活力的效果。
[0007]基于上述发现，OX40成为免疫疗法的一个重要靶点，众多的临床前和临床研究都提示OX40可以作为肿瘤免疫疗法的一个重要靶点。有趣的是，最近的研究还发现OX40信号通路在抑制乙肝病毒感染中的作用，提示OX40激动剂可能作为抗病毒感染，例如乙肝病人治疗的潜在手段。
[0008]干扰素是一类高活性多功能的糖蛋白。一方面。干扰素能够通过调控肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤转移及血管新生、激活抗肿瘤免疫反应发挥强大的抗肿瘤作用；另一方面，通过调节人体免疫系统，干扰素在抗病毒方面有重要的临床应用价值，比如干扰素已经成为临床治疗乙肝病毒感染的重要手段之一。人干扰素IFNα
‑
2a和人干扰素IFNα
‑
2b是人干扰素的两种类型。人干扰素IFNα
‑
2a第23位氨基酸是赖氨酸(Lys)，与IFNα
‑
2a不同，IFNα
‑
2b第23位氨基酸是精氨酸(Arg)。进一步地，重组人INFα
‑
2b以非共价二聚体结晶存在，其具有锌离
子介导二聚体表面相互作用。在所有INFα亚型中，只有两个INFα
‑
2b、INFα
‑
14c有糖基化，INFα
‑
2b是唯一在第106位为苏氨酸残基的INFα亚型，也是仅有的O
‑
糖基化人INFα蛋白。上述结构差异可能影响着不同IFNα
‑
2亚型的免疫原性、免疫毒性，现有技术表明IFNα
‑
2a与INFα
‑
2b存在一定的免疫原性差异，但是不存在免疫毒性的差异。
[0009]OX40激动剂及干扰素都在抗肿瘤和抗病毒方面有重要的应用价值或潜力，但是现有的证据表明两者在病人响应率和药效方面都有不足。因此，当前对治疗效果更好的OX40激动剂及干扰素存在需求。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的在于提供一种融合蛋白，所述融合蛋白包含特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段和人干扰素IFNα
‑
2a。本专利技术还提供了所述融合蛋白用于治疗肿瘤和/或病毒感染的用途。
[0011]为实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
[0012]一方面，本专利技术提供了一种融合蛋白，其包含：
[0013]a)特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段；和
[0014]b)人干扰素IFNα
‑
2a或其突变体；
[0015]其中所述人干扰素IFNα
‑
2a或其突变体直接连接或通过肽接头连接至所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段的轻链或重链的羧基端或氨基端。
[0016]根据本专利技术所述的融合蛋白，其中所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段包含：
[0017]重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示的重链可变区(VH)中的3个互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其中各HCDR的定义如本专利申请以下说明部分的表1所示；和
[0018]轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:2所示的重链可变区(VL)中的3个互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中各LCDR的定义如本专利申请以下说明部分的表1所示。
[0019]优选地，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或由其组成，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由其组成。
[0020]根据本专利技术所述的融合蛋白，其中所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段是骆驼化单域抗体、scFv、scFv二聚体、BsFv、dsFv、dsFv2、dsFv
‑
dsFv'、Fv片段、Fab、Fab'、F(ab')2、ds双功能抗体、纳米抗体、域抗体或双价域抗体。
[0021]根据本专利技术所述的融合蛋白，其中所述抗体进一步包含免疫球蛋白恒定区，例如人IgG1、IgG2或IgG4的恒定区。
[0022]根据本专利技术所述的融合蛋白，其中所述人干扰素IFNα
‑
2a的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；
[0023]进一步优选地，所述人干扰素IFNα
‑
2a突变体的氨基酸序列为在SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列上选自以下中的一种或多种突变的：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其包含：a)特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段；和b)人干扰素IFNα
‑
2a或其突变体；其中所述人干扰素IFNα
‑
2a或其突变体直接连接或通过肽接头连接至所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段的轻链或重链的羧基端或氨基端。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示的重链可变区中的3个互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:2所示的轻链可变区中的3个互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3；其中，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3的定义如下表所示：优选地，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或由其组成，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由其组成。3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段是骆驼化单域抗体、scFv、scFv二聚体、BsFv、dsFv、dsFv2、dsFv
‑
dsFv'、Fv片段、Fab、Fab'、F(ab')2、ds双功能抗体、纳米抗体、域抗体或双价域抗体。4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗体进一步包含免疫球蛋白的恒定区；优选地，所述恒定区为人IgG1、IgG2或IgG4的恒定区。5.根据权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中所述人干扰素IFNα
‑
2a的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；优选地，所述人干扰素IFNα
‑
2a突变体的氨基酸序列为在SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列上分别具有选自以下的一种或多种突变：T106A、R149A、A145G、A145D、R120A或L117A；更优选地，所述人干扰素IFNα
‑
2a突变体的氨基酸序列为在SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列上分别具有选自以下的一种或多种双突变：T106A/A145D、T106A/R149A、T106A/A145G、T106A/R120A或T106A/L117A。6.根据权利要求1至5中任一项所述的融合蛋白，其中所述肽接头选自：(G)
n
、KESGSVSSEQLAQFR...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵勇，莫世甫，王志超，徐伟，顾莉蕴，
申请(专利权)人：南京优迈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：