Fab-白蛋白结合肽融合蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及Fab

【技术实现步骤摘要】
Therapy,2008,22(5):331
‑
337.)。另有报道对Adalimumab Fab片段(mutSS Fab
SH
)重链羧基端进行定点PEG
‑
MAL(20 KDa)修饰，PEG修饰Fab产物在大鼠体内的半衰期相较于未修饰的Fab片段半衰期延长了28倍(Nakamura H,Anraku M,Odaueda N,et al.C
‑
Terminal Cysteine PEGylation of Adalimumab Fab with an Engineered Interchain SS Bond[J].Biological&Pharmaceutical Bulletin,2020,43(3):418
‑
423.)。但以PEG修饰技术作为基础的长效策略存在修饰过程复杂、修饰产物分离困难和修饰后蛋白活性降低等问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种Fab
‑
白蛋白结合肽融合蛋白及其制备方法和应用，所述Fab
‑
白蛋白结合肽融合蛋白具有白蛋白结合能力，延长了半衰期。
[0007]为此，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]本专利技术的第一方面，提供一种Fab
‑
白蛋白结合肽融合蛋白，其包括白蛋白结合肽和结合TNF
‑
α的Fab片段，所述白蛋白结合肽与所述Fab片段的C端连接。
[0009]Fab
‑
白蛋白结合肽融合蛋白中，所述白蛋白结合肽的N端或者C端可以与所述Fab片段的C端连接，其中连接可以是直接连接或者通过连接肽段连接。在一些实施方案中，所述白蛋白结合肽的N端直接或通过连接肽段连接至Fab片段的重链和/或Fab片段的轻链的C端。
[0010]进一步的，在一些实施方案中，所述白蛋白结合肽的N端直接或通过连接肽段连接至Fab片段的重链的C端。优选的，在一些实施方案中，所述白蛋白结合肽的N端通过所述连接肽段连接至Fab片段的重链的C端。
[0011]在另一些实施方案中，所述白蛋白结合肽的N端直接或通过连接肽段连接至Fab片段的轻链的C端。在另一些实施方案中，所述白蛋白结合肽的N端直接或通过连接肽段连接至Fab片段的轻链的C端以及Fab片段的重链的C端。
[0012]所述Fab片段可以是鼠源的、嵌合的、人源化的或全人的。
[0013]在一些实施方案中，所述Fab片段包含选自以下CDR组成的组：
[0014]a)英夫利昔单抗的轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列和重链CDR1
‑
3的氨基酸序列；
[0015]b)阿达木单抗的轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列和重链CDR1
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3的氨基酸序列；
[0016]c)戈利木单抗的轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列和重链CDR1
‑
3的氨基酸序列；或
[0017]d)赛妥珠单抗的轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列和重链CDR1
‑
3的氨基酸序列。
[0018]优选的实施方案，所述Fab片段包含阿达木单抗的轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列和重链CDR1
‑
3的氨基酸序列。
[0019]在一些实施方案中，所述Fab片段包含英夫利昔单抗的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列，阿达木单抗的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列，戈利木单抗的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列，或赛妥珠单抗的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列。优选的实施方案，所述Fab片段包含阿达木单抗的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列。
[0020]在一些实施方案中，所述Fab片段为英夫利昔单抗的Fab片段、阿达木单抗的Fab片段、戈利木单抗的Fab片段或赛妥珠单抗的Fab片段，优选为阿达木单抗的Fab片段。
[0021]英夫利昔单抗(infliximab)，商品名其轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列分别
如专利申请WO2017102835中SEQ ID NO:24
‑
26所示，重链CDR1
‑
3的氨基酸序列分别如专利申请WO2017102835中SEQ ID NO:27
‑
29所示；其轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如WO2017102835中SEQ ID NO:40和41所示。
[0022]戈利木单抗(golimumab)，商品名其轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列分别如专利申请WO2017102835中SEQ ID NO:30
‑
32所示，重链CDR1
‑
3的氨基酸序列分别如专利申请WO2017102835中SEQ ID NO:33
‑
35所示；其轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如WO2017102835中SEQ ID NO:42和43所示。
[0023]赛妥珠单抗(certolizumab pegol)，商品名其轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列分别如专利申请WO2017102835中SEQ ID NO:18
‑
20所示，重链CDR1
‑
3的氨基酸序列分别如专利申请WO2017102835中SEQ ID NO:21
‑
23所示；其轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如WO2017102835中SEQ ID NO:38和39所示。
[0024]阿达木单抗(adalimumab)，商品名其轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13
‑
15所示，重链CDR1
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3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16
‑
18所示，轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:19和20所示；其Fab片段的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，Fab片段的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0025]所述白蛋白结合肽(ABD)能够特异性结合人血清白蛋白，包括源自微生物天然蛋白序列筛选获得的结构域以及其各种工程化衍生物。在一些实施方案中，所述白蛋白结合肽包含与选自SEQ ID NO:3
‑
6所示的任一序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述白蛋白结合肽包含选自SEQ ID NO:3
‑
6所示的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，所述白蛋白结合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:3、4、5或6所示。实验证实，所述SEQ ID NO:3
‑
6之一所示的氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Fab
‑
白蛋白结合肽融合蛋白，其特征在于，所述Fab
‑
白蛋白结合肽融合蛋白包括白蛋白结合肽和结合TNF
‑
α的Fab片段，所述白蛋白结合肽与所述Fab片段的C端连接。2.根据权利要求1所述的Fab
‑
白蛋白结合肽融合蛋白，其特征在于，所述白蛋白结合肽的N端直接或通过连接肽段连接至Fab片段的重链和/或Fab片段的轻链的C端；优选的，所述白蛋白结合肽的N端通过所述连接肽段连接至Fab片段的重链的C端。3.根据权利要求1或2所述的Fab
‑
白蛋白结合肽融合蛋白，其特征在于，所述Fab片段包含选自以下CDR组成的组：a)英夫利昔单抗的轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列和重链CDR1
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3的氨基酸序列；b)阿达木单抗的轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列和重链CDR1
‑
3的氨基酸序列；c)戈利木单抗的轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列和重链CDR1
‑
3的氨基酸序列；或d)赛妥珠单抗的轻链CDR1
‑
3的氨基酸序列和重链CDR1
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3的氨基酸序列。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的Fab
‑
白蛋白结合肽融合蛋白，其特征在于，所述白蛋白结合肽包含与选自SEQ ID NO:3
‑
6所示的任一序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯军，张庆彬，张喜全，吴勇，赵文杰，徐宏江，黄宗庆，于敏，杜萱，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院上海多米瑞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：