靶向PD-1和TGFβ的重组蛋白制造技术

本发明专利技术公开了一种重组融合蛋白，该重组融合蛋白包含：1)能够结合TGFβ的TGFβR2或其片段，和2)结合PD

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向PD
‑
1和TGF
β
的重组蛋白


[0001]本公开涉及一种靶向PD
‑
1和TGFβ的重组融合蛋白及其制备和用途。

技术介绍

[0002]根据世界卫生组织的数据，癌症是全球第二大致死病因。据估计，2018年有960万人死于癌症。
[0003]癌症实际上是一组涉及异常的细胞生长和分裂的疾病。癌细胞是相当“聪明的”，并且它们已经发展出若干种机制来逃避宿主的免疫监视。例如，它们表达高水平的膜蛋白PD
‑
L1和PD
‑
L2，这两种蛋白结合T细胞表面上的PD
‑
1并诱导T细胞耗竭(Oscar Arrieta等，(2017)Oncotarget 8(60):101994
‑
102005)。癌细胞还提高转化生长因子β(TGFβ)的表达，最常提高TGFβ1的表达，以通过降低CD8
+
T细胞和NK细胞中激活免疫受体NKG2D的表达并抑制NKG2D配体MICA的表达来抑制细胞毒性淋巴细胞和NK细胞的细胞杀伤(Masato Morikawa等，(2016)Cold Spring Harb Perspect Biol 8:a021873；Joan Massague(2008)Cell 134(2):215
‑
230；Paul Spear等，(2013)Cancer Immun.13:8)。
[0004]人们已在癌症的早期诊断和适当治疗方面做出了努力，因此与癌症有关的总体死亡率正在下降。目前癌症治疗的选择包括手术、放射疗法、化疗、激素疗法、靶向疗法、免疫疗法等。其中，免疫疗法是一种通过增强免疫应答来帮助免疫系统对抗癌症的治疗。免疫疗法尚未像手术、化疗和放射疗法那样得到广泛应用，但近年来已取得相当大的成功。免疫疗法中使用了靶向免疫抑制途径的药物，例如抗体。
[0005]PD
‑1[0006]PD
‑
1也称为CD279，是一种细胞表面受体。它具有两个配体，即PD
‑
L1和PD
‑
L2。PD
‑
L1的表达响应于LPS和GM
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CSF处理在巨噬细胞和树突状细胞上上调，并在TCR和B细胞受体信号传导后在T细胞和B细胞上上调，并且在小鼠心脏、肺、胸腺、脾和肾中检测到了PD
‑
L1 mRNA(Freeman GJ等，(2000)Journal of Experimental Medicine 192(7):1027；Yamazaki T等，(2002)Journal of Immunology 169(10):5538
‑
5545。PD
‑
L1在肿瘤细胞上也有表达。PD
‑
L2具有更局限的表达谱。
[0007]当与PD
‑
L1或PD
‑
L2结合时，PD
‑
1通过抑制T细胞炎性活动下调免疫系统并促进自身耐受性。PD
‑
1对免疫系统的抑制作用可预防自身免疫性疾病。而另一方面，癌细胞中局部PD
‑
L1表达的增加可阻止免疫系统杀伤这些细胞。若干种抗PD
‑
1抗体，诸如(BMS)和(默克)已被证明可以单独或与其他抗肿瘤剂组合用于临床癌症治疗。
[0008]TGFβ
[0009]转化生长因子β(TGFβ)是一种双功能细胞因子，其具有三种哺乳动物同种型，即TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3。TGFβ与其他因子复合形成丝氨酸/苏氨酸激酶复合物，该复合物结合TGFβ受体并激活下游底物和调节蛋白。在大多数细胞类型中，TGFβ信号传导主要传递强烈的生长抑制活性。例如，TGFβ抑制T淋巴细胞和胸腺细胞的增殖。TGFβ在某些条件下还刺激
一些细胞的增殖。例如，TGFβ与IL
‑
2组合诱导Treg细胞分化。癌细胞表达高水平的TGFβ1以抑制免疫功能，同时通过核心途径组分的突变失活或失去信号传导途径的肿瘤抑制臂来使TGFβ的肿瘤抑制作用失效。
[0010]TGFβ受体TGFβR1和TGFβR2均对TGFβ1具有高亲和力。TGFβR2是由C末端蛋白激酶结构域和N末端胞外结构域组成的跨膜蛋白。该胞外结构域由含有九条β链的紧凑折叠和由六个链内二硫键的网络维持稳定的单螺旋组成。TGFβR2的T细胞特异性表达可阻止小鼠体内接种的黑色素瘤或胸腺瘤生长。
[0011]靶向多于一种分子的疗法
[0012]有时发现靶向单一肿瘤相关抗原或单一免疫抑制途径的药物其治疗效果有限。例如，抗VEGF抗体被证明在一定程度上抑制癌细胞生长，但不能消除癌细胞。此外，获批的抗PD
‑
L1抗体阿维鲁单抗(巴文西亚)的总缓解率仅为33％。
[0013]因此，在临床试验和临床治疗中，通常将药用制剂与另一种治疗剂组合施用，从而以多种方式攻击靶细胞(例如癌细胞)。另选地，可以开发具有两种或更多种靶点结合特异性的单分子药物，例如双特异性或多特异性抗体/蛋白质，以实现靶向多于一种分子的疗法。例如，EMD Serono已经开发出一种双特异性融合蛋白M7824，其含有与TGFβR2胞外结构域连接的抗PD
‑
L1抗体，用于治疗多种实体癌，包括非小细胞肺癌和胆道癌。

技术实现思路

[0014]本公开公开了一种重组融合蛋白，该重组融合蛋白包含：1)能够结合TGFβ的TGFβR2或其片段，和2)结合PD
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1的抗体或其抗原结合片段。该重组融合蛋白捕获肿瘤微环境中的TGFβ以降低对免疫细胞增殖和功能的抑制作用，并且还阻断肿瘤细胞上的PD
‑
L1与免疫细胞上的PD
‑
1的相互作用以解除PD
‑
1介导的抑制信号对免疫细胞的制约。通过靶向两种免疫抑制途径，本公开的重组融合蛋白增强了对肿瘤细胞的免疫应答。
[0015]本公开的TGFβR2可以是人TGFβR2。本公开的TGFβR2片段可以是TGFβR2胞外结构域。在一些实施方案中，本公开的重组融合蛋白包含TGFβR2胞外结构域，该TGFβR2胞外结构域包含与SEQ ID NO:1具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中该TGFβR2胞外结构域结合TGFβ。
[0016]本公开的结合PD
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1的抗体可以是人或人源化抗PD
‑
1抗体。在一些实施方案中，本公开的结合PD
‑
1的抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地具有人IgG1、IgG4重链恒定区和人κ轻链恒定区，该重链可变区具有与SEQ ID NO:2具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组融合蛋白，所述重组融合蛋白包含：a)结合TGFβ的人TGFβR2或其片段，和b)结合PD
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1的抗体或其抗原结合片段。2.根据权利要求1所述的重组融合蛋白，所述重组融合蛋白包含：a)人TGFβR2片段，和b)结合PD
‑
1并包含SEQ ID NO:2的重链可变区和SEQ ID NO:3的轻链可变区的6个CDR的抗体或其抗原结合片段，其中所述人TGFβR2片段与所述重链或其抗原结合片段的C末端连接。3.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的重组融合蛋白，其中人TGFβR2是TGFβR2胞外结构域。4.根据权利要求3所述的重组融合蛋白，其中所述TGFβR2胞外结构域包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少90％同一性的氨基酸序列。5.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2具有至少90％同一性的氨基酸序列，并同时具有SEQ ID NO:2的3个CDR；并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3具有至少90％同一性的氨基酸序列，并同时具有SEQ ID NO:3的3个CDR。6.根据权利要求1或2所述的重组融合蛋白，其中所述重链包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或与SEQ ID NO:4具有至少80％同一性的氨基酸序列，并同时具有SEQ ID NO:4的3个CDR；并且所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性的氨基酸序列，并同时具有SEQ ID NO:5的3个CDR。7.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述TGFβR2片段通过接头与所述重链的C末端连接(重链
‑
接头
‑
TGFβR2片段)，或与所述重链可变区的C末端连接(重链可变区
‑
接头
‑
TGFβR2片段)。8.根据权利要求7所述的重组融合蛋白，其中所述接头包含SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9的氨基酸序列。9.根据权利要求7
‑
8中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述重链
‑
接头
‑
TGFβR2片段包含选自SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13中的任一者的氨基酸序列或与SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13具有至少80％同一性的氨基酸序列，并同时具有相应的SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13的3个CDR。10.根据权利要求9所述的重组融合蛋白，其中所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性的氨基酸序列，并同时具有SEQ ID NO:5的3个CDR。11.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：康小强，黄潇，
申请(专利权)人：南京维立志博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：